甲胎蛋白(AFP)测定(化学发光法)

 西安长安医院 检 验 科 甲胎蛋白(AFP )测定(化学发光法) 文件编号：CA-JY-CZ-MY 第 二 版 执行日期：2010-1-4 共5页 第1页 １ 原理 AFP是胚胎时期的重要血清成分，由内黄囊和肝细胞合成，胎儿出生后其浓度急剧下降，几个月至一年可降至正常水平，正常值小于20ng/ml。本检验科使用日本东曹AIA-1800型全自动免疫发光分析仪进行 测定，采用微粒子捕捉酶免疫分析技术(MEIA)。 AFP测定利用双抗体夹心法原理：已包被了抗体的塑料微珠试剂中，加入待测标本后，经温育，再加入碱性磷酸酶标记的抗体、形成“抗体－抗原－酶标记抗体复合物”。然后将其转移到玻璃纤维柱上，用缓冲液洗涤，没有结合的抗原、酶标抗体被洗掉，结合抗原抗体的塑料微珠则被保留在纤维柱滤膜的上方。这时再加入底物：4-甲基伞型酣磷酸盐(4-Mup)。酶标抗体上的碱性磷酸酶将4-Mup分解,脱磷酸后形成甲基伞型酣(4-Mu)，它在365nm激发光的照射下，发出448nm的荧光，经过荧光读数仪的记录、放大，计算出所测物质的含量。 2 标本采集与处理 2.1 原始样本类型：血清、血浆或全血（应用抗凝剂为肝素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1或EDTA）、尿液(晨尿、随即尿、24小时尿等)或其他体液(羊水等)。 2.2 样本量：根据不同项目样本量不等（83μl-238μl）。 2.3患者准备：严禁使用接受过鼠单克隆抗体诊断或治疗的病人样本，引起体内含有人抗鼠抗体（HAMA），当这些样品在使用含鼠单克隆抗体分析试剂进行测试时，引起结果升高或降低。 2.4 样本采集方法：一般采用静脉采血。 样本采集要求： 避免过度溶血，必须在无菌体条件下采集； 确保离心速度（10000转/分钟）和时间（10分钟），避免颗粒物质的干扰。 避免样品的反复冻融，溶解后的样品需低速震荡或轻轻颠倒混匀已获得稳定的结果。若样品中有颗粒物质，红血球或浑浊物质必须离心使其澄清后再进行测试。 2.5样品的稳定期和保存：上机3小时内完成检测；2℃-8℃标本可保存1-14天；若需长期保存（1年内），必须将血清分离出来，冷冻保存（-10℃或更冷）。 3 试剂 3.1 所有试剂均购自日本东曹公司 TOSOHⅡ相关校准品 TOSOHⅡ相关校准品1 TOSOHⅡ相关校准品2 TOSOHⅡ样本稀释液 TOSOHⅡ基质：4-甲基伞形酮酰磷酸 TOSOHⅡ基质溶解液 TOSOHⅡ清洗液 TOSOHⅡ缓冲液 3.2 试剂准备与检查： 从冰箱中取出1号液（底物液）放入仪器 从冰箱中取出相关测试试剂放入仪器 检查所有试剂和缓冲液是否在有效期内，超过有效期的试剂不可使用 检查所有试剂和缓冲液是否足够 检查所有消耗品（纤维杯或反应杯）是否足够，废液或废物是否清空 3.3 试剂保存条件： 试剂盒、标准品、质控品在2℃-8℃保存。 3.4 试剂性能可接受性： 按测定项目资料手册中质量控制章节所规定内容进行质量控制，结果必须在实验室规定的可接受范围内。 4 操作步骤 1 开机前检查 a 察看电源是否正常安全通电 b 推主机下部的前门，打开后检查洗净水与分注液的用量是否满足当日用量2 开机 废试样杯与废吸嘴是否丢弃 a更换75%酒精，放置基质液 b 打开电脑主机及AIA-1800电源, 点击主业面进入root c 试样吸嘴的设置及酶标识试剂，检体稀释液的设置，按主机操作版面Reagent/Tip键，LED指示灯变为绿色，打开试剂吸嘴护罩，将酶标识试剂标识面朝前 ，检体稀释液设置在试剂托架上，将条形码d 试剂杯的设置，按主机操作版面的Cup Sorter键，LED指示灯变为绿色，拉开分类器抽屉将试剂托盘设置在分类器托盘上，将分类器抽屉推到底 3 开机日检 4 日检通过后，进行标本检测，在树形菜单上进入界面设置标本检测项目，Assay键点击开始测定 5 测定完毕后，按主机操作版面的Cup Sorter及Reagent/Tip键，LED指示灯变为绿色，打开试剂吸嘴护罩及分类器抽屉，收集试剂放入冰箱，更换基质液，放置75%酒精 6 点击源 关机，待窗口消失，关闭AIA-1800电源，在关闭电脑及主电5 质量控制： 每批试剂都要使用东曹公司标准品作质量控制，请参见AIA-1800仪器操作手册。 6 结果计算（定量分析）： 利用点对点数据产生方法来产生标准曲线，并根据标准曲线机器会自动计算最终样品浓度； 7 报告格式： 各种定量单位通常采用ug/L 8 参考值： 0-10.9ug/L 9 临床意义： 原发性肝癌患者血清AFP约有75%－80%的阳性率。一般认为AFP>350时对原发性肝癌有较高的诊断价值。 胃癌或胰腺癌时血中AFP含量也可升高。 病毒性肝炎、肝硬变时AFP也有不同程度的升高，但其水平常在100ng/ml以下。 妊娠妇女的不同时期血清中AFP亦有不同程度的上升。 10 方法学性能: 精密度：采用NCCLS中的EPS-T2标准，测WithinRun,BetweenRun,Re-tweenDay和Total四个方面进行精密度的评价，检测方案为：测6套以上的血清盘，（每套3个以上的样品），在3-4个试验点，每天分两个时间段，每个样品做复管（每个样品累计测80次以上），连续测20天以上，使用一个以上批号试剂和标准曲线。总的CV%值控制在8%以内。 正确度（准确度）：采用与东曹原有的商品化试剂或市售的其他经典的商品化试剂（如：HPLC或RIA）进行相关性的比较，回归方式一般采用Least Squares Linear Regression和/或Passing-Bablok Linear Regression方式，比较Intercept（截距），Slope(斜率)和Correlation Coefficient（相关参数）等参数，并注明参与比较的样品类型，数量和样品的浓度范围。 编写者：李 伟 审批者：闵金凤 审批日期：2010-1-4 复审人： 复审结果： 复审日期：