两色金鸡菊对遗传毒性的保护作用及其应用[发明专利]

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 CN 109260244 A(43)申请公布日 2019.01.25

(21)申请号 201811316614.5(22)申请日 2018.11.07

(71)申请人 北京健旭康技术有限公司

地址 100083 北京市海淀区中关村东路18

号1号楼C-1807(72)发明人 不公告发明人　(51)Int.Cl.

A61K 36/28(2006.01)A61P 43/00(2006.01)A23L 33/00(2016.01)A61K 133/00(2006.01)

权利要求书1页 说明书4页

(54)发明名称

两色金鸡菊对遗传毒性的保护作用及其应用

(57)摘要

本发明公开了两色金鸡菊(Coreopsis tinctoria Nutt.)在制备抗遗传毒性产品中的用途。以两色金鸡菊的花为原料，可以通过提取工艺和加工工艺有效地转变为各类优质的抗遗传毒性的遗传保护产品。

CN 109260244 ACN 109260244 A

权　利　要　求　书

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1.一种抗遗传毒性的产品应用，其特征在于含有两色金鸡菊(Coreopsis tinctoria Nutt.)的花或花的提取物。

2.一种两色金鸡菊花提取物，其特征在于采用如下方法制备获得，取两色金鸡菊花，用沸水提取后，制得细粉。

3.根据权利要求2所述的两色金鸡菊花提取物，其特征在与提取物细粉和适当的食品配料可以制成各种液态或固态的产品。

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两色金鸡菊对遗传毒性的保护作用及其应用

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技术领域

[0001]本发明涉及一种具有对遗传毒性有保护作用的植物“两色金鸡菊”的加工技术以及在对遗传毒性有保护作用产品中的用途，具体地说，是新鲜和干燥两色金鸡菊花朵、两色金鸡菊提取物、两色金鸡菊有效化学成分等在制备抗遗传损伤产品中的应用。背景技术

[0002]遗传性疾病是影响人类健康的大问题。目前的数据显示人类遗传性疾病导致了大约20％的婴儿死亡率、50％的流产和80％的弱智患者。而大量的不良的环境化学因素、物理因素和生物制剂等作用于有机体，就有可能使人类的遗传物质在染色体水平、分子水平和DNA碱基水平上受到各种损伤，从而造成遗传相关的不良作用的遗传毒性。永久性的、可遗传的变化可能会影响人类的体细胞产生包括癌变在内的疾病，也可能通过诱变的生殖细胞传给后代而造成遗传性疾病。所以说，预防环境遗传毒性的技术是保障人类健康的迫切需求。

[0003]两色金鸡菊(Coreopsis tinctoria Nutt.)：两色金鸡菊是一种菊科草本植物，目前还没有两色金鸡菊的对遗传毒性有保护作用的报告。

[0004]本发明这是发现了两色金鸡菊及其提取物在液态和固态的饮食产品、保健食品和药品中的抗遗传毒性的新用途和加工方法。

发明内容

[0005]本发明的目的是提供两色金鸡菊的新用途，即在制备在抗遗传损伤的饮食产品的新应用。

[0006]本发明的另一目的是提供一种抗遗传损伤的保健食品。[0007]本发明的再一个目的是提供一种抗遗传损伤的药物。

[0008]本发明的目的还包括提供简便的两色金鸡菊提取物制备方法。

[0009]发明人按照农产品的加工方法对两色金鸡菊花朵进行了大量的深加工研究，包括两色金鸡菊饮品、两色金鸡菊汤、两色金鸡菊酒、两色金鸡菊粉以及含金鸡菊粉的液态和固态的各类产品等。[0010]发明人参照《GB 15193.5-2014食品安全国家标准哺乳动物红细胞微核试验》和《保健食品功能学评价程序》等的遗传毒性评价方法，对两色金鸡菊进行了提取物制备和动物抗遗传毒性的功效活性研究。

[0011]发明人发现两色金鸡菊的花朵具有抗遗传损伤的作用。两色金鸡菊菊花可以直接鲜用，也可以直接食用其干燥后的花朵。[0012]两色金鸡菊提取物的制备方法是：可以取两色金鸡菊干花，加水煮沸三次，合并煎液，滤液浓缩干燥或喷雾干燥后，制细粉，即得。两色金鸡菊提取物为棕色的细粉，有两色金鸡菊特有的气味。

[0013]发明人发现，以两色金鸡菊提取物进行口服给药有明显的效果，能够有效地拮抗

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遗传毒性。

[0014]以两色金鸡菊提取物进行服用时，可以加工成以粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊和液体药剂等形式。两色金鸡菊提取物可以适当的使用配料如赋形剂、粘合剂、渗透剂、润滑剂等配合使用。

[0015]两色金鸡菊在饮用的情况下，通常为成年人5-25克/天，优选为15克/天。[0016]本发明的优点是：两色金鸡菊的抗遗传损伤的保护作用在国内和国际上都是首次发现。两色金鸡菊可以作为抗遗传损伤的天然药食同源植物。[0017]两色金鸡菊饮用和食用的口感好，独特的香气怡人，市场认同性比较高，市场的接受度高，市场前景良好。具体实施方式

[0018]下面提供的实施例用于进一步阐明本发明，而不构成对本发明范围的限制。[0019]实施例1.材料

[0020]实施例所用两色金鸡菊为本公司的保健种植基地收获，干花为我们自制。其它的药品、试剂和实验动物，都能方便地市购。[0021]实施例2.制备方法例

[0022]取两色金鸡菊花朵的干花1000g，加水2500ml煮沸，共三次，每次15分钟，合并煎液，滤过，滤液浓缩或喷雾干燥，得棕色粉末。[0023]实施例3.制剂实施例，[0024](1)取1kg实施例2的制备方法获得两色金鸡菊花提取物，分装，每袋500mg。[0025](2)取实施例2的制备方法获得的两色金鸡菊提取物1000g，玉米淀粉10g，压片制成片剂。[0026](3)实施例2的制备方法获得的两色金鸡菊提取物溶于水，可以直接配制成口服液。[0027](4)实施例2的制备方法获得的两色金鸡菊提取物可以作为原料，与奶茶的其他原料配制特色奶茶。

[0028]实施例4.两色金鸡菊抗遗传毒性的效果实验[0029]1实验动物[0030]ICR小鼠，清洁级，由实验动物中心提供。动物使用许可证号：SYKX(京)2011-0039，饲养环境温度22-24℃,相对湿度50％-60％，12h光/暗周期(光07:00-19:00)。动物用垫料、饲料由实验动物中心提供，实验期间动物自由进食和饮水。[0031]2药品和试剂[0032]2.1药品

[0033]两色金鸡菊干花由本公司北京种植基地提供。[0034]遗传毒物环磷酰胺(Cyclophosphamide monohydrate，C7H15Cl2N2O2P，分子量279.10)：江苏恒瑞医药有限公司。[0035]2.2试剂[0036]小牛血清，滤菌，56℃恒温水浴，保温灭活1h，4℃冰箱保存备用。[0037]Giemsa应用液：(由Giemsa染液和磷酸盐缓冲液(PH6.4)组成。两者比例为1:9，混

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合后供染色使用)，北京市通广精细化工公司。[0038]甲醇(Methanol，CH3OH，分子量32.04)，分析纯，北京市通广精细化工公司。[0039]2.3仪器[0040]恒温箱：北京天林恒泰科技有限公司。[0041]ARA520型电子精密天平：美国OHAUS公司。[0042]3实验方法

[0043]3.1受试物制备

[0044]两色金鸡菊花朵的干菊花提取物：按实施例2的方法，配成1ml水溶液相当于干菊花量2g。

[0045]3.2动物分组与处理[0046]ICR小鼠60只，分为6组，每组雌雄各半，体重25～30g。设正常对照组、遗传毒物组、三个受试物剂量组(分别为10g/kg、30g/kg和60g/kg(干菊花/动物体重))和受试物高剂量单独组(60g/kg)。连续7天灌胃。遗传毒物组为环磷酰胺80mg/.kg体重，经口灌胃给药，在第7天给予。第7天受试物和环磷酰胺都采用30小时给予法，即两次灌胃的间隔24h，第二次灌胃6h后，通过颈椎脱臼处死动物。[0047]3.3标本制备

[0048]取小鼠右侧股骨，用剪刀剪去股骨两端，用针筒吸取约0.2ml的小牛血清，从股骨一端刺入(尽量插浅一些)，来回吸取小牛血清，冲洗股骨骨髓腔，制成细胞悬液，用玻片沾取涂片，待涂片自然干燥，放入加有甲醇的带盖浸泡皿中，固定5min，当日固定后保存。次日，采用浸染法用Giemsa应用液染色固定好的图片，染色12min。立即用蒸馏水冲洗，待晾干后，置于阴凉干燥处保存。[0049]3.4阅片

[0050]在低倍镜下选择细胞丰富、结构完整、分散均匀、着色适当的区域，转至油镜下观察。嗜多染红细胞呈灰蓝色，成熟红细胞呈粉红色，典型的微核多为单个、圆形、边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致，呈蓝紫色或紫红色，直径通常为红细胞的1/20～1/5。[0051]采用双盲法阅片，每只小鼠计数1000个嗜多染红细胞(PCE)，观察含有微核的嗜多染红细胞(MNPCE)数，微核率以千分率表示。观察嗜多染红细胞与成熟红细胞的比值(PCE/RBC)，可作为细胞毒性指标之一。3.5数据处理与分析[0052]运用SPSS16.0软件对数据进行处理，采用双侧t检验进行数据分析，实验数据以

表示。

4结果

[0054]环磷酰胺模型组与阴性对照组相比，MNPCE率明显升高，雌雄小鼠均具有差异具有统计学意义(P＜0.01)。与环磷酰胺组相比，两色金鸡菊各剂量组小鼠嗜多染红细胞微核率，雌、雄小鼠差异均具有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)，而且各剂量组小鼠MNPCE率之间存在剂量反应关系，即小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率随两色金鸡菊给药量的增加而降低。与阴性对照组相比，两色金鸡菊高剂量单独组小鼠嗜多染红细胞微核率，雌雄小鼠之间的差异均不具有统计学意义(P>0.05)。见表1。

[0055]表1两色金鸡菊抗环磷酰胺诱导的嗜多染红细胞微核率的影响(平均数±标准差)

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P＜0.01(与阴性组比)*P＜0.05，**P＜0.01(中药组和环磷酰胺组比)

[0058]5结论

[0059]微核是在细胞的有丝分裂后期染色体有规律地进入子细胞形成细胞核时，仍然留在细胞质中的染色体的无着丝粒断片或环。它在末期以后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在细胞的胞质中形成，由于比核小得多故称微核。这种情况的出现，往往是受到染色体断裂剂毒物作用的结果，也可能在受到纺锤体毒物的作用时，主核没有能够形成，代之以一组小核。

[0060]两色金鸡菊抗微核试验发现阴性对照组与两色金鸡菊各剂量组的MNPCE率均在5‰以内，各剂量组与阴性对照组相比，差异无统计学意义，且各剂量组之间不存在剂量反应关系。嗜多染红细胞与成熟红细胞的比值(PCE/RBC)，是观察红细胞系统是否受抑制的指标]，PCE/RBC均>0.10，表明本实验取样时不存在骨髓红细胞系统增殖受抑制的情况，可以排除假阴性的可能。综上所述，两色金鸡菊在剂量达到60g/·kg时，两色金鸡菊对骨髓细胞无染色体断裂作用和纺锤体毒性效应。

[0061]两色金鸡菊抗微核试验发现两色金鸡菊各剂量组与环磷酰胺模型组相比，其MNPCE率均有所下降，差异均具有统计学意义，且随着两色金鸡菊剂量的升高，小鼠MNPCE率下降越明显，各剂量组之间MNPCE率存在剂量反应关系。说明两色金鸡菊有抑制环磷酰胺诱导的骨髓细胞微核的抗遗传毒性的作用。

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