高抗氧化活性乳酸菌的筛选

２０１３年第４期　１２月出版　食品工程　Ｆ０ＯＤ　ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ　４３　高抗氧化活性乳酸菌的筛选冰　Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ　ｌａｃｔｉｃ　ａｃｉｄ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｗｉｔｈ　ｈｉｇｈ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　任大勇”孟思宇　翁璐超　宁长春ＲＥＮ　Ｄａ－ｙｏｎｇ　杨嫦娥１３０１１８）　李　豪　（吉林农业大学食品科学与工程学院，吉林长春Ｍｅｎｇ　Ｓｉ—ｙｕ　ＷＥＮＧ　Ｌｕ－ｃｈａｏ　ＮＩＮＧ　Ｃｈａｎｇ－ｃｈｕｎ　ＹＡＮＧ　Ｃｈａｎｇ－ｅ　ＬＩ　Ｈａｏ　（ＣｏＵｅｇｅ　ｏｆｆｏｏｄ　ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ。Ｊｉｈｎ　ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＪｉｈｎＣｈａｎｇｃｈｕｎ　１３０１１８，Ｃｈｉｎａ）　摘要　比较了１５株乳酸茵的抗氧化能力，旨在筛选出高抗氧化活性的乳酸茵，为天然抗氧化剂的开发及　乳酸茵在功能性食品中的应用提供理论依据。通过羟自由基清除试验、超氧阴离子自由基清除试验以及还原　能力评价试验，系统评价了１５株受试乳酸茵的菌体及其胞外分泌物的抗氧化能力。结果表明，抗氧化活性　具有显著的茵株特异性。茵株Ｌ１４（植物乳杆茵）在上述３种评价体系中均表现出最强的抗氧化能力，其次　是茵株ＬＩ５（唾液乳杆茵），表明这两株乳酸茵在减轻机体氧化损伤方面具有一定的应用价值。　关键词乳酸茵；益生茵；自由基；抗氧化活性　Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｔｌｌｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｃａｐａｃｉｔｙ　ｏｆ　１５　ｓｔｒａｉｎｓ　ｏｆ　ｌａｃｔｉｃ　ａｃｉｄ　ｂａｃｔｅｒｉａ（ＬＡＢ）ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｓｃｒｅｅｎ　ＬＡＢ　ｗｉｔｈ　ｈｉｓｈ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ａ　ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　ｂａｓｉｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｎａｔｕｒａｌ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｆｏｏｄ　ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＬＡＢ．Ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ．ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ａｎｉｏｎ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｓ－　ｓａｙ　ａｎｄ　ｒｅｄｕｏｉｎｇ　ｃａｐａｃｉｔｙ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃａｌｌｙ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｎｔａｉｏｘｉｄａｎｔ　ｃａｐａｃｉｔｙ　ｏｆ　ＬＡＢ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｅｘｔｒａｅｅｌｌｕｌａｒ　ｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｎｔａｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｈａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｓｔｒａｉｎ－ｓｐｅｃｉｉｃ．Ｓｔｆｒａｉｎ　Ｌ１４　（ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌＵＳ　ｐｌｎｔａａｒｕｍ）ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈｅ　ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ　ｎｔａｉｏｘｉｄａｎｔ　ｃａｐａｃｉｔｙ，ｆｏｌｌｏｗｅｄ　ｂｙ　ｓｔｒｉｎ　ａＬ１５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ），ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ　ｈａｔｔ　ｈｅ　ｔｔｗｏ　ｓｔｒｉａｎｓ　ｈａｖｅ　ｃｅｒｔｉａｎ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｖａｌｕｅ　ｉｎ　ａｌｌｅｖｉａｔｉｎｇ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｄａｍａｇｅ．　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　ｌａｃｔｉｃ　ａｃｉｄ　ｂａｃｔｅｒｉａ；ｐｒｏｔｉｏｃｔｉｃｓ；ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　中图分类号：Ｔｓ２５２．５４　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７３—６００４（２０１３）０４—００４３—０３　ＤＯｈ　１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—６０４４．２０１３．４．００１３　自由基是人体细胞氧化的中间产物，对正常细　剂对于清除机体自由基、保护细胞免受损伤具有　　　‘胞具有很强的破坏作用，如损伤生物膜、蛋白质、　重要的意义。乳酸菌（Ｌａｃｔｉｃ　ａｃｉｄ　ｂａｃｔｅｒｉａ，ＬａＢ）作为益生　ＤＮＡ以及线粒体等。研究表明自由基的产生与衰　老、心脑血管疾病及肿瘤的发生密切相关。抗氧　菌的重要来源，是公认安全的食品级微生物，广泛　化剂可以显著降低自由基产生速率，从而延长机　应用于发酵食品中，具有多项保健功能，如调节肠　体的存活时间。因此，开发安全、高效的抗氧化　道菌群结构、增强机体免疫功能等。目前研究表　明，一些乳酸菌还具有较强的抗氧化活性，但这些　料任大勇。男，１９７９年出生，２０１３年毕业于吉林大学食品安全　有抗氧化作用的菌株具有特异性。本研究通过羟自　由基清除试验，超氧阴离子自由基清除试验以及还　专业，博士，讲师。　原能力评价试验，系统评价了１５株受试乳酸菌的　收稿日期：２０１３—０６—２４　＋基金项目：吉林农业大学大学生科技创新基金（ＤＸＳ２０１２）。　修回日期：２０１３－０８—１４　菌体及其胞外分泌物的抗氧化能力，旨在筛选出具　食品工程　２０１３年第４期　ｌ２月出版　培养２４ｈ后，将培养好的发酵液置于１０ｍＬ离　有高抗氧化活性的乳酸菌，为天然抗氧化剂的开发　及乳酸菌在功能性食品中的应用提供理论依据。　心管中，５　０００　ｒ／ａｒｉｎ离心１５　ｍｉｎ，将离心管中上清　液倒人试管中，再用８　ｍＬ蒸馏水将离心管中菌体　洗涤３次于试管中，从该试管中取１　ｍＬ菌液，用　１材料与方法　蒸馏水调节乳酸菌为１　０１０　ｅｆｕ／ｍＬ。同时取１　ｍＬ上　１．１材料与试剂　清液作为胞外分泌物样品。　１．１．１菌株　试验中使用的菌种为嗜酸乳杆菌（Ｌ０１～Ｌｏ３）、　保加利亚乳杆菌（Ｌ０４～Ｌｏ６）、嗜热链球菌（Ｌ０７一　Ｌ０８）、干酪乳杆菌（Ｌ０９）＿、鼠李糖乳杆菌（Ｌ１０一　Ｌ１２）、发酵乳杆菌（Ｌ１３）、植物乳杆菌（Ｌ１４）和　唾液乳杆菌（Ｌ１５），所有菌种由吉林农业大学食品　学院毒理学实验室保存。　１．１．２试剂与培养基　邻二氮菲、铁氰化钾、邻苯三酚、过氧化氢、　Ｔｒｉｓ—Ｂａｓｅ、三氯乙酸、三氯化铁、ＰＢＳ磷酸盐缓冲　剂等试剂均为国产分析纯。　ＭＲＳ培养基：１０．０　ｇ蛋白胨、１Ｏ．０　ｇ牛肉浸粉、　５．０　ｇ酵母浸粉、２０．０　ｇ葡萄糖、２．０　ｇ磷酸氢二钾、　２．０　ｇ柠檬酸氢二铵、５．０　ｇＬ酸钠、Ｏ．５８　ｇ硫酸镁、　０９５　ｇ硫酸锰、１．０　ｇ吐温一８０、ｐＨ值６２—６．４（２５　ｃＣ）。　１．２仪器与设备　ＤＨＰ一７８１电热恒温培养箱，湖北省黄石市医疗　机械厂；ＧＬ一２０６一ＩＪ高速冷冻离心机，上海安亭科　学仪器厂制造；立式陈列冷藏柜；７２２Ｅ型可见分　光光度计，上海光谱仪器有限公司；ＺＤＸ一３５ＢＩ型　座式自动型电热压力蒸汽灭菌锅，上海申安医疗器　械厂；ＤＥＬＴＡ３２０一ｐＨ计，梅特勒托利多仪器（上　海）有限公司。　１．３方法　１．３．１乳酸菌的培养　用接种环将乳酸菌菌株接种于ＭＲＳ液体培养　基中，并在３７℃条件下活化培养２４　ｈ，再以１０％　接种量接种于含７　ｍＬ　ＭＲＳ液体培养基的试管中，　３７℃条件下静止培养２４　ｈ。　１．３．２菌体及其胞外分泌物制备　１．３．２．１菌体的制备　培养２４ｈ后，将培养好的发酵液置于１０ｍＬ离　心管中，５　０００　ｒ／ａｒｉｎ离心１５　ｍｉｎ，弃去离心管中液　体，并用蒸馏水洗涤离心管中菌体３次，置于试管　中，用蒸馏水将乳酸菌的菌数调整到１　０１０　ｅｆｕ／ｍＬ，　即为待测样品。　１．３．２．２胞外分泌物的制备　１．３．３乳酸菌抗氧化活性的检测　１．３．３．１清除羟自由基试验　参照参考文献［４］的方法，并略作修改。乳酸菌　接种量为１％，ＭＲＳ培养基中培养１８ｈ，６０００ｄｍｉｎ　离心１０　ｍｉｎ，弃上清液，收集菌体。菌体用ＰＢＳ　（ｐＨ７．２）溶液洗涤２次，再用ＰＢＳ溶液重悬至乳　酸菌数为１０９　ｅｆｕ／ｍＬ。取０．５　ｍＬ的邻二氮杂菲　（６　ｒｅｏｔｏｌ／Ｌ）和０．５　ｍＬ的ＦｅＳＯ４溶液（６　ｒｅｏｔｏｌ／Ｌ）　与１．０ｍＬ的ＰＢＳ溶液（ｐＨ７．２）混匀。再向此体系　中加入０．５　ｍＬ乳酸菌细胞悬浮液（１０９　ｅｆｉｄｍＬ）和　０．５　ｍＬ过氧化氢（质量浓度０．１％），最后用双蒸水　将总体积定容至４．０　ｍＬ。此混合液在３７　ｃＣ下孵育　１　ｈ，于５３６　ｎｍ下读取吸光度。羟自由基的清除率　按下式计算：　羟自由基清除率／％＝害　×１００，　式中：Ｄ（　）广—样品的吸光度；　Ｄ（ｋ）——含邻二氮杂菲、ＦｅＳＯ　和过氧化氢　的对照组的吸光度：　Ｄ（　）　一含邻二氮杂菲和ＦｅＳＯ　的对照组　的吸光度。　１．３．３．２清除超氧阴离子自由基试验　参照参考文献［５］的方法，并略作修改。将过夜培　养的乳酸菌用无菌ＰＢＳ溶液洗涤２次，再重悬于　ＰＢＳ溶液中使乳酸菌数达到１０９　ｅｆｕ／ｍＬ。取５０／ｚＬ乳　酸菌悬浮液、９１０／ｚＬ无菌双蒸水与２　ｍＬ　Ｔｆｉｓ—ＨＥ１　缓冲液（５０　ｍｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ８．２）充分混合。另用双蒸　水代替乳酸菌悬浮液作为空白对照。向上述体系中　加人焦桔酸溶液（４０／ｚＬ，１０　ｒｅｏｔｏｌ／Ｌ），于３２５　ｎｍ　下测定吸光度。每１０　ｍｉｎ检测一次吸光度值，最终　记录最大的吸光度值。乳酸菌对超氧阴离子清除率　是通过对焦桔酸自动氧化抑制率来反映的，可通过　公式计算：　超氧阴离子自由基清除率，％＝　ＡＤ（　）掣×１一　００，’　　０　式中：ＡＤ（　）　为不同时间下的空白组ＯＤ值；　２０１３年第４期　ｌ２月出版　任大勇等：高抗氧化活性乳酸茵的筛选　，４５　△Ｄ（入）——不同时间下样品组ＯＤ值。　１．３．３．３还原能力的检测方法　本试验对１５株菌种的胞外分泌物的超氧阴离　子清除能力进行了研究，结果见表２。　－３）　参照参考文献［６］的方法，并略作修改。将在　表２乳酸茵胞外分泌物的超氧阴离子自由基清除率（ｎ－ＭＲＳ培养基中培养１８　ｈ的乳酸菌５　０００　ｒ／ｍｉｎ离心　菌株　清除率　菌株　清除率　菌株　清除率　％　％　％　１５　ｍｉｎ，保留上清液研究其还原能力。取０．５　ｍＬ上　清液加入０．５　ｍＬ磷酸缓冲溶液（０．０１　ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ　６．６）及０．５　ｍＬ铁氰化钾（质量浓度１％），５０℃加　热２０ｍｉｎ。冷却后加人０．５ｍＬ三氯乙酸（质量浓度　１０％），３　０００　ｒ／ａｒｉｎ离心５　ｒａｉｎ，取上清液１．０　ｍＬ，　加入１．０　ｍＬ双蒸水及１．０　ｍＬ三氯化铁（质量浓度　０．１％），均匀，１０　ａｒｉｎ后测７００　ｌｆｌｎ处的吸光度值，　吸光度值与还原能力成正比。　２结果与讨论　２．１　乳酸菌对羟自由基清除能力的比较　本试验采用的邻二氮菲一Ｆｅ　作为氧化还原指　示剂，可以通过吸光度的变化来反映体系氧化程　度。吸光度与氧化程度成反比，吸光度越小说明乳　酸菌的抗氧化能力越强。　本试验对１５株菌株的菌体的羟自由基清除能　力进行了研究，结果见表１。　表１乳酸菌菌体羟自由基清除率（ｎ＝３）　菌株　清除率　菌株　清除率　菌株　清除率　％　％　％　ＬＤ１　４８．３３±０．４１　Ｌ０６　４０．７６±Ｏ．６０　Ｌ１１　４９．８２±０．５７　Ｌ０２　３０．９０±０．５２　ＬＯ７　３１．１５±Ｏ．４４　Ｌ１２　４３．７７±Ｏ．６１　Ｌ０３　４４．１２±０。５４　Ｌ０８　５１．２ｌ±０．７５　Ｌｌ３　３９．８８±Ｏ．３９　ＬＩ　６２．１２±Ｏ．６８　Ｌ０９　ｌ１．０３±０．３０　Ｌｌ４　９２．７４±０．８９　Ｌ０５　４０．４１±０．５５　Ｌ１Ｏ　３１．６７±０．３２　Ｌｌ５　７７．３１±０．８４　由表１可知，不同乳酸菌对羟自由基的清除能　力差异很大。其中，菌株Ｌ１４的菌体具有最高的清　除羟自由基能力，清除率为９２．７４％；菌株Ｌ１５次　之，清除率为７７．３１％；菌株Ｌ０９的羟自由基清除　率最低，仅为１１．０３％；其他菌株菌体的羟自由基清　除能力一般，羟自由基清除率在３０．９０％～６２．１２％之　间。分析其原因可能是不同乳酸菌清除羟自由基的　活性物质不同或活性物质含量不同。　２．２乳酸菌对超氧阴离子自由基清除能力的比较　本试验采用的邻苯三酚试剂在碱性条件下氧化　产生超氧阴离子及有色中间产物，加入抗氧化成分　后会减少有色中间产物的生成，所以可以通过反应　体系颜色变化的程度来评价待测物质的抗氧化能力。　Ｌ０１　５４－３３±０．８８　ＵＤ６　４８．３２±０．６３　Ｌ１１　５７．８３±Ｏ－３７　ＬＯ２　５６．７２±０．６７　ＬＯ７　６２．９０±０．８９　Ｌ１２　６０．Ｏ３±０．４９　ＬＤ３　５５．１７士０．７４　ＬＤ８　５４．２９＿±０．８４　Ｌ１３　５７．１４±０．５０　ＩＪ０４　４０．１６±Ｏ．６６　Ｌ０９　５６．１２±０．６９　Ｌ１４　８０．４１±０．６ｌ　Ｌ０５　７１．４９±０．５８　Ｌ１０　５９．６５±０．７７　Ｌ１５　６２．８６±Ｏ．７２　由表２可知，乳酸菌株Ｌ０４和Ｌ０６胞外分泌物　对超氧阴离子的清除率小于５Ｏ％；菌株Ｌ１４的胞外　分泌物对超氧阴离子自由基的清除率最高，达到　８０．４１％；菌株Ｌ０５次之，清除率为７１．４９％；其余　菌株胞外分泌物的超氧阴离子自由基清除率在　５４．２９％～６２．８６％。　２．３乳酸茵原能力的比较　本试验采用的铁氰化钾试剂在弱酸性环境下可　还原生成黄血盐，进而与三氯化铁作用生成普鲁士　蓝，其在７００　ｉｔｍ波长下具有最大吸光值。因而用　普鲁士蓝的生成量来反映体系还原能力。Ｄ（删越　大，表明待测物质的还原能力越强。　１５株受试乳酸菌胞外分泌物的还原能力检测结　果见表３。　表３乳酸菌菌株胞外分泌物的还原能力（ｎ＝３）　菌株　Ｄ　７００）　菌株　皿删　菌株　日删　ＩＪ０１　０．１Ｏ４±０．０４　Ｌ０６　０．４０２±０．０５　Ｌｌ１　０．２３４±０．Ｏ３　Ｌ０２　Ｏ．２Ｏ６±０．Ｏ６　ＩＪＤ７　０．３３８±０．Ｏ２　Ｌ１２　Ｏ－３Ｏ６±Ｏ．Ｏ３　ＬＯ３　０．２０８±０．４０　Ｌ０８　０．４１０±０．Ｏ２　Ｌ１３　０．２７７±０．Ｏ３　ＵＤ４　０．３９０±０．０６　ＬＯ９　０．３７０±０．４０　Ｌ１４　０．６１８±０．０７　Ｌ０５　０．３７２±０．０５　ＬｌＯ　０．２２５±０．Ｏ２　Ｌ１５　０．５５７±Ｏ．Ｏ７　结果表明所有受试乳酸菌均表现出一定的还原　能力，但结果具有菌株特异性。其中，菌株Ｌ１４的　胞外分泌物还原能力最强，　删为０．６１８；菌株Ｌ１５　的还原能力次之，　删为０．５５７；菌株Ｌ０１的还原　能力最低，　㈣仅为０．１０４；其余菌株测定的　删　的范围在０．２０６—０．４０２。　３结论　近年来，乳酸菌（包括活菌体、无细胞抽提物　及胞外分泌物）的抗氧化逐渐成为研究热点。有研　究表明，评价某物质的抗氧化活（＇Ｆｔ￣ｔｇ　５６页）　Ｌ＝　ｊｂ　　Ｉ！ｌ　］　］　］　］　］　］　５６　食品工程　２０１３年第４期　１２月出版　参考文献　剂，２００４（１）：５４—６Ｏ．　【１０　Ｊ　ＫＯＹＡＭＡ　Ｅ，ＫＩＴＡＺＡＷＡ　Ｋ，ＯＨＯＲＩＹ。ｅｔ　ａ１．Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｌｙｃｏｓｉｄｉｃ　ｓｗｅｅｔｅｎｅｒｓ，ｓｔｅｖｉａ　ｍｉｘｔｕｒｅ　ａｎｄ　丁宁，郝再彬，陈秀山，等．甜叶菊及其糖苷的研究与发　展［Ｊ］．上海农业科技，２００５（４）：１１—１３．　倪军明，李军平．甜菊糖工业发展现状与前景［Ｊ］．广州食　品工业科技，２００４（３）：１５６—１５８．　ｅｎｚｙｍａｔｉｃａｌｌｙ　ｍｏｄｉｉｆｅｄ　ｓｔｅｖｉａ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｉｃｌａ　Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２００３（４１）：　３５９－３７４．　胡献丽，董文宾，郑丹，等．甜菊及甜菊糖研究进展［Ｊ］．食　品研究与开发。２００５（１）：３６—３８．　［１１］沈小婉．色谱法在食品分析中的应用［Ｍ］．北京：北京大　学出版社，１９９２：１７６—２２３．　张亚雄，胡为民，仇敏，等．甜菊糖中Ａ３甙的分离提纯　［Ｊ］．氨基酸和生物资源，１９９７（４）：４３—４４．　黄应森．中国甜菊和甜菊糖甙的分型研究ＥＪ］．中国糖料，　１９９９（４）：２６—２９．　王仲礼．日本高倍甜度甜味剂的市场动向［Ｊ］．江苏调味　副食品，２００４（１）：２８—３０．　［１２］张树政．酶制剂工业下［Ｍ］．北京：科学出版社，１９８４：　５４２－５５５．　［１３］刘爱萍．甜菊苷不良味质的酶法改善及共在乳制品中应　用的研究［Ｄ］．黑龙江：东北农业大学，２０００：１－５２．　［１４］史作清，朱伯儒，施荣富，等．　一葡萄糖基甜菊糖的酶　促合成反应研究［Ｊ］．高等学校化学学报。１９９６（１１）：　１　８００一ｌ　８０３．　张杨，陈天红，孙君坦，等．甜叶菊糖的组分分离与味质　改进研究进展［Ｊ］．化学通报，１９９８（６）：１１—１６．　ＧＥＵＮＳ　ＪＡＮ　Ｍ　Ｃ．Ｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００３　［１５］吴有炜．试验设计与数据处理［Ｍ］．苏州：苏州大学出版　社。２００２：８５—１０ｏ．　（６４）：９１３—９２１．　朱海霞，郑建仙．甜菊糖的酶法改性［Ｊ］．中国食品添加　（上接第４５页）　性时不宜只采用１种评价方法，因此本试验采用３　种方法通过体外试验评价了１５株乳酸菌的抗氧化　能力。　ｕｃｅｄ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｉｎ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｙｓｔｅｍｓ［Ｊ］．Ｔｒｎｓａｉｔ　Ｍｅｔａｌ　Ｃｈｅｍ，２０１２，３７（２）：１２７—１３４．　［２］任大勇，李昌，秦艳青，等．乳酸茵益生功能及作用机制　研究进展［Ｊ］．中国兽药杂志，２０１１，４５（２）：４７—５０．　［３］Ｕ　Ｓ，ＺＨＡＯＹ，ＺＨＡＮＧＬ，ｅｔａ１．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆｌａｃｔｏ—　ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｌａｎｔａｍｍ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｒａｄｉｉｔｏｎａｌ　ｃｈｉｎｅｓｅ　试验结果表明，乳酸菌抗氧化能力具有显著的　菌株特异性，甚至同一菌株发挥其抗氧化功能的主　要成分也不相同。其原因可能是由于起抗氧化作用　的活性物质本质或浓度不同；同时，由于不同的菌　株其还原能力及清除羟自由基、超氧阴离子自由基　的能力不同，导致其抗氧化机制有所差异。除乳酸　菌活菌体具有抗氧化功效外，某些菌株的胞外分泌　ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ　ｆｏｏｄｓ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍ，２０１２，１３５（３）：１９１４—１９１９．　［４］金鸣，蔡亚欣，李金荣．邻二氮菲一Ｆ　氧化法检测　Ｈ２０：／Ｆｅ～　产生的羟自由基［Ｊ］．生物化学与生物物理　进展，１９９６，２３（６）：５５３—５５５．　物也具有类似作用，说明其中含有抗氧化成分。总　体而言，在受试的１５株乳酸菌中，菌株Ｌ１４（植物　乳杆菌）对羟自由基清除率最高，为９２．７４％，其胞　外分泌物对超氧阴离子自由基清除率也最高为　８０．４１％，并且还原能力也最强（　㈣为０．６１８）。菌　株Ｌ１５（唾液乳杆菌）对羟自由基清除能力及胞外　［５］李婕姝，贾冬英，姚开，等．荸荠皮多糖体外清除自由基　活性的研究［Ｊ］．氨基酸和生物资源，２００８，３Ｏ（４）：７－９．　１６］ＺＯＵ　Ｃ，ＤＵ　Ｙ，ＬＩ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌａｃｑｕｅｒ　ｐｏｌｙｓａｃ－　ｃｈａｒｉｄｅ　ｓｕｌｆａｔｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．　Ｃａｒｂｏｈｙｄ　Ｐｏｌｙｍ，２００８。７３（２）：３２２—３３１．　［７］刘薇，王宏君，赵建，等．邻二氮菲一Ｆｅ一“法测定保健食　分泌物的还原能力次之，羟自由基清除率和日㈣分　别为７７．３１％和０，５５７。因此这两株乳酸菌可用于抗　氧化剂和功能性食品的进一步开发与应用。两株乳　酸菌的抗氧化条件、抗氧化成分和抗氧化机制有待　进一步研究。　参考文献　品的抗氧化能力［Ｊ］．食品科学，２０１０，３１（１８）：３３３—３３７．　［８］王曦，罗霞，许晓燕，等．不同乳酸茵菌株抗氧化能力的　比较研究［Ｊ］．食品科学，２０１０，３１（９）：１９７—２０１．　［９］ＡＭＡＲＥＴｒＩ　Ａ，ＤＩ　ＮＵＮＺＩＯ　Ｍ，ＰＯＭＰＥＩ　Ａ，ｅｔ　１．Ａｎｔａｉｏｘｉｄ—　ｎｔａ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙ　ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ：ｉｎ　ｖｉｒｏ　ａｎｄ　ｔｉｎ　ｖｉｖｏ　ａｃｔｉｖｉｉｔｅｓ［Ｊ］．Ａｐｐｌ　Ｍｉｃｍｂｉｏｌ　Ｂｉｏｔ，２０１３，９７（２）：８０９—８１７．　［１］ＪＯＭＯＶＡ　Ｋ，ＢＡＲＯＳ　Ｓ，ＶＡＬＫＯ　Ｍ．Ｒｅｄｏｘ　ａｃｔｉｖｅ　ｍｅｔａｌｉｎｄ—