影响牛胚胎移植妊娠率的因素分析

３６　甘肃畜牧兽医　２０１０年３（总２１２）期　影响牛胚胎移植妊娠率的因素分析　刘双文．陈秋梅　（黑龙江省密山市畜牧局，黑龙江密山１５８３００）　中国图书分类号：Ｓ　８２３．３　６文献标识码：Ｃ文章编号：１００６－－７９９Ｘ（２０１０）ｏ３—００３６—０３　奶牛胚胎移植技术是目前国内奶牛繁殖　率。Ｌｉｎｄｎｅｒ把胚胎分为四个等级。优级胚：　领域中比较先进的生物技术，作为一项成熟的　形态正常，呈球形，裂球大小和色泽一致的胚　高新技术已广泛应用于家畜的繁育中，成为提　胎；良级胚：形态有轻微的缺点，如有少数退　高良种繁殖效率、迅速扩散优良基因的重要手　化的裂球、形状不太规范和极少量空泡；一般　段。但胚胎移植技术在生产中还存在诸多不　胚：有被挤压突出的裂球，少量的空泡，但没　足，突出表现为妊娠率较低，一般仅为４０％一　有其他严重的问题；低质胚：有许多退化、死　６ｏ％，成为制约胚胎移植工作的主要瓶颈，影　亡的裂球，细胞体积不均一，较多的空泡，但　响其产业化发展。影响牛胚胎移植率的因素　整体看胚胎仍然活着（李同豹等，２００３）。就　是多方面的，本文将从无菌化操作、胚胎质量、　生产而言，体外受精（ⅣＦ或ＩＶＰ）胚移植成　受体牛的选择及其同期性、室外操作水平和受　功率低于体内胚，但因其生产成本较低，多年　体牛的饲养管理几方面加以概述。　来一直是研究的主要方向。从标准来看，生　１无菌化操作　产方式不同，胚胎质量和发育潜能不同，移植　胚胎移植技术需要较严格的无菌化操　受胎率不同，提高胚胎质量是提高胚胎移植　作。无论是对供、受体的污染，还是对胚胎的　妊娠率的有效措施之一（李清昌等，２００３）。　污染都会对移植妊娠率造成一定的影响。严　３胚胎发育时期　格执行胚胎移植工作中的卫生消毒制度，对　不同的移植方法对胚胎发育时期的要求　胚胎采集、冲洗、冷冻、解冻过程中所使用的　是不一样的，手术方法移植时，把受精卵到　器械、培养液等必须通过相应的方法进行消　ｌ６一细胞的胚胎移植到输卵管中，而１６一细　毒。室外操作者把直肠粪便清除后，用清洁　胞到囊胚期的胚胎要移植到子宫内。从不同　的清水冲洗母牛的外阴部，然后用酒精棉消　时期收集到的胚胎发育情况看，发情后第７　毒，用消毒过的卫生纸擦干。室内操作者应　（６～８）天大多数胚胎处在桑椹期或囊胚时　严格遵守无菌操作规程，利用无菌的洗涤液　期，因此，胚胎发育时期或胚龄决定了移植时　进行适当的胚胎洗涤，有效去除附着在透明　间与移植部位。而目前采用的非手术直肠把　带上的病原菌（用胰蛋白酶处理透明带完整　握采胚和移植方法，是超排处理后的供体，通　的体内细胞对去除或灭活某些病毒非常有　常在第７天采集胚胎；受体牛的移植时间在　效）。要增强无菌意识，加强无菌控制（刘廷　发情后第７天。不同发育时期的胚胎移植妊　玉等，２００５）。　娠率也不同，胚胎发育阶段与受体牛发情期　２胚胎质量　相吻合是非常重要的。通过体外受精（ＩＶＦ／　胚胎质量的好坏直接影响着移植成功　ＩＶＰ）生产的胚胎，在桑椹一囊胚期时移植最　Ｖｏ１．４ｏ．Ｎｏ３　生产技术　３７　为理想，相比之下，晚期囊胚一孵化囊胚的移　植妊娠率要低（和协超等，２００１）。　４新鲜胚胎与冷冻胚胎　牛胚胎冷冻方法的研究报道很多，不同方　法冷冻的胚胎移植妊娠率也不一样。第一类　是常规的冷冻方法，胚胎按一定程序冻存，移　植时需要除去防冻剂，操作较复杂，需要一定　的设备，在基层和农户的农场中使用不太方　便，其移植成功率在４ｏ％一４５％。第二类是　一步法，这种方法冷冻的胚胎解冻后可直接移　植，基层使用和推广较为方便，移植成功率也　是４ｏ％一４５％。第三类是玻璃化冷冻方法：　这种方法冷冻时快捷方便，不需要冷冻仪，但　是，移植时需要除去防冻剂，移植成功率也在　４０％－５０％（Ｋａｓａｉ，ｅｔ　ａｌ；Ｖａｊｔａ，ｅｔ　ａｌ，１９９８）。　国内对３种冷冻方法进行比较，其移植妊娠率　分别为４８．３％、４４．７％和４１．５％，３种方法的　移植妊娠率差异不大（李树静等，２０００）。目　前，鲜胚的移植成功率一般可达到５０％左右。　鲜胚的移植成功率比冻胚的移植成功率高出　１０％（１０％～３０％），但是，在鲜胚移植时，受体　牛的组织、同步化等需要投入人力物力，实用　性方面不如冷冻胚。　５受体牛的选择及其同期性　受体牛的选择直接关系到胚胎移植妊娠　率的高低。选择受体牛的总体要求是身体健　康、营养状况良好和繁殖性能正常。受体牛　选择的标准可具体分为以下几条：经检疫无　传染性疾病（特别是布病）；无繁殖机能疾病　（如卵巢囊肿、子宫炎、久配不孕等）；直肠检　查子宫弹性厚薄正常，卵巢具有活性；身体健　康，膘情在七成以上；青年牛达到１６月龄以　上，经产牛产后６０ｄ以上，并具有二次正常　的发情周期，产犊性能和泌乳性能良好（但　受体牛在胚胎移植前至少一个月不能哺乳犊　牛）；人工授精两次或胚胎移植两次不孕者　不使用；无流产史，上胎无难产、助产情况　（吉１３嘎拉，２００５）。除了对受体牛选择外，　最应注意的是它的发情周期性问题，要使胚　胎发育阶段与受体牛发情周期相一致。在胚　胎移植时，以母牛接受爬跨站立发情的当天　作为发情的第０天，在第７（６—８）天进行胚　胎移植。为保证胚胎移植前后生理阶段的一　致性，提高胚胎移植的妊娠率，在技术上必须　在同期性上选择合适的受体牛，通过对受体　牛的发情观察及直检卵巢黄体的状态，根据　受体牛的黄体１３龄来挑选与之相符的同一发　育阶段的胚胎。在准备鲜胚移植受体牛时，　受体牛第二次ＰＧ注射应在供体牛注射ＰＧ　的前一天进行，受体牛发情早于供体牛比晚　于供体牛时的移植妊娠率高，其原因是发情　早于供体牛的受体黄体功能更完善的缘故。　６室外操作水平　操作者的经验和技巧也是影响胚胎移植　妊娠率的主要因素之一。操作者对黄体的检　查和判断对胚胎移植妊娠率是至关重要的。　直肠检查时可感觉到典型的功能黄体是一个　坚实的、有弹性的、表面光滑的肉样结构，直　径一般为１０　ｃｍ左右，突出卵巢的高度为０．３　—０．６　ｅｍ。在胚胎移植中常常将黄体分为　Ａ、Ｂ、Ｃ三级（铃木达行，１９９６）：直径在　１．５　ｃｍ以上，硬度与弹性较好为Ａ级黄体；　直径在１．０～１．５　ｃｍ之间，硬度与弹性较好　为Ｂ级黄体；直径在１．０　ｃｍ以下，硬度与弹　性可以，或体积即使较大但硬度过硬、弹性较　差为ｃ级黄体。一些直径在１．０　ｃｍ以下，硬　度又很硬，直肠检查时感觉似花生粒的组织，　往往不是功能性黄体，而是前一周期留下的　白体。在判断黄体时操作者一定要区分清　楚，Ａ、Ｂ级黄体的胚胎移植妊娠率没有差异　（陈支鹤等，１９９１），ｃ级黄体的受胎率要差　一些。有些营养很差的母牛甚至造成发情后　不能及时排卵，形成黄体化卵泡，操作者应当　要区分清楚，具有黄体化卵泡的受体母牛进　３８　甘肃畜牧兽医　２０１０年３（总２１２）期　青贮饲料无公害制作的技术要点　王兆祥　（甘肃省通渭县马营镇畜牧兽医站，甘肃通渭７４３３０６）　中国图书分类号：Ｓ　８１６．５　３文献标识码：Ｃ文章编号：１００６－－７９９Ｘｆ２ｏ１Ｏ）ｏ３—ＯＤ３８—ｏ２　青贮饲料是将青绿饲料在适当含水量和　含糖量的条件下，致密地装填到密闭的设备　行胚胎移植也是不能受胎的（奥田洁，　育、产后泌乳、初生移植牛体重等诸多方面，　１９８８）。操作者手法要迅速轻柔，尽快将胚　最终导致胚胎移植妊娠率不理想。受体牛选　胎移植到受体牛的黄体子宫角的上１／３～１／　好后，最好单独组群饲养，保证环境相对稳　２处，熟练操作者完成这一过程只需Ｉ一　定，避免应激反应。设立有足够空间的运动　２ｍｉｎ。一些青年母牛的子宫颈很细，偶尔会　场，保证受体牛必要的运动，按受体牛的饲养　发生完全闭锁，此时可以先用扩宫棒将子宫　标准进行饲养，保证受体牛的正常营养需要　颈疏通后，再用卡苏移植枪进行移植。在胚　量。运动场要设饮水槽，保证足够的新鲜清　胎移植中，要避免对一些移植不进的受体牛　洁饮水，严禁饲喂发霉变质、冰冻饲料。受体　长时间操作，这样会容易对子宫内膜造成创　牛在移植前４５ｄ开始补饲，保持日增重０．３０　伤，引起子宫平滑肌不利的逆蠕动，促进子宫　—０．４０ｋｇ。此外，最好每天补饲１　ｋｇ左右的　分泌孕产素，引起孕酮分泌减少，出现不适宜　胡萝ｂ或注射维生素Ａ、Ｄ、Ｅ针剂，并补充　怀孕的反应；同时，损伤子宫内膜后，造成上　硒、锌等微量元素。移植实践表明，用奶牛做　皮细胞脱落出血，引起子宫自净活动增强，在　受体的移植妊娠率要高于黄牛，这主要是由　排除各种组织碎片的同时也排除未着床的胚　于营养状况和饲养管理条件的影响。在受体　胎，出血后的血清和白细胞对胚胎也有杀伤　牛胚胎移植的早期，即胚胎完全着床后，一定　和毒害作用，造成妊娠率的大大降低。因此，　要注意饲养管理，此时胚胎最容易发生早期　室外操作者要正确区分好功能性黄体，在胚　死亡而流产。另外，研究表明，胚胎移植牛的　胎移植中要稳、准、快，尽快将胚胎移植到准　流产率比正常怀孕牛流产率高１０％一２０％　确部位，减少对胚胎和受体牛的不良刺激　（荒木武纪，１９９４）。受体牛在产前３个月要　（Ｙａｍａｓｈｉｎａ，１９８９）。　补充足量的维生素、微量元素，适当限制能量　７受体牛的饲养管理　摄人，既要保证胎牛的正常发育，又要避免难　除了以上因素的影响，胚胎移植妊娠率　产。总之，胚胎移植工作技术性很强，环节　高低还与受体牛的饲养管理、营养因素密切　多，影响因素复杂。要想提高胚胎移植妊娠　相关。必须保证受体牛获得足够的营养物　率就必须严格按操作规程执行，选择与黄体　质，包括粗蛋白（ｃＰ）、总消化物（ＴＤＮ）、矿物　日龄相适应的胚胎，严格选择受体牛，准确区　质和维生素等。任何一种营养物质的缺乏都　分黄体级别，加强受体牛的饲养管理，防止　直接影响到受体牛发情周期、后期胎牛的发　流产。