胚状体苗与器官发生苗的区别

胚状体苗

器官发生苗

1.最初形成多来自单个细胞，双向极性，两个1.最初形成多来自多细胞，单向极性，单个分生中心，较早分化出茎端和根端(方向相反) 分生中心

2.胚状体维管组织与外植体维管组织不相连 2.不定芽和不定根与愈伤组织的维管组织相

连

3.具有典型的胚胎形态发生过程 3.无胚胎形态，分生中心直接分化器官 4.形成的幼苗具有子叶 4.不定芽的苗无子叶 5.胚状体发育的苗，根和芽齐全，不经历诱导5.一般先长芽后诱导生根，或先长根后长芽 生根阶段

各种再生类型的特点比较 外植体来源 嫩枝节段或芽 茎尖、茎段②丛生芽增殖型 或初代培养的芽 除芽外的离体组织 活的体细胞 兰科植物茎尖 再生类型 特 点 一次成苗，培养过程简单，适用范围广，移栽容易成活，再生后代遗传性状稳定，但初期繁殖较慢。 与无菌短枝型相似，繁殖速度较快，成苗量大，再生后代遗传性状稳定。 ①无菌短枝型 多数经历“外植体→愈伤组织→不定芽→生根→完整植株”的过程，繁殖系数高，多次继代后愈伤组织的再生能力下降或消失，再生后代易发生变异。 胚状体数量多、结构完整、易成苗和繁殖速度快，有的胚状体存在一定变异。 原球茎具有完整的结构，易成苗和繁殖速度快，再生后代变异几率小。 ③器官发生型 ④胚状体发生型 ⑤原球茎发生型

试管苗与实生苗生境的比较

生 境 光 照 温 度 相对湿度 养分 丰富 气体 菌态 试管弱，易调控 适宜且恒高湿 苗 定 光下CO2低，有害气体无菌 量高 野生强，波动大 波动性大 较低，波动大 较贫各种气体成分较恒定 有菌 苗 瘠 试管苗与实生苗形态结构与功能上的差异

苗的类型 试管苗

叶片及其功能

根系及其功能

角质层薄，水孔多，气孔的生理活性差，保水能根系不发达，吸水能力力差；此外，叶绿体的光合性能也差。 差。 角质层较厚，水孔少，气孔的生理活性强；叶绿体的光合性能好。

组培苗观察的内容与方法

根系发达，吸水能力强。

野生苗

观察项目 外植体接种后的变化 愈伤组织诱导 不定芽生长与分化 生根情况 观察内容 外植体的颜色、形态变化；灭菌效果；外植体成活率。 观察方法 目视观察 愈伤组织形成的时间；长势； 长相：颜色、形态、质地、大小、位置；组织细胞有无变异；诱导率(或出愈率)。 不定芽开始分化时间；长势；长相：数量、颜色、形态、大小、位置、苗高；组织细胞有无变异；分化率和增殖率、增殖系数等。 开始生根时间；长势：生长状态，根系发达程度； 长相：根长、根数、根粗、根色、位置；生根率。 目视；照相；显微观察；计算 目视；照相；显微观察；计算 目视观察；计算 目视观察；计算 目视观察；实际计算 驯化移栽 存在问题 试管苗长势；有无变异；计算驯化移栽成活率。 污染类型及污染率；褐化及褐变率；玻璃化及玻璃化苗发生率；其他问题等。 组培苗观察记录表

观察记录时间 污染类型 污 染 率 出 愈 率 分 化 率 增 殖 率 生 根 率 移栽成活率 生长分化情况 处理建议 接种人或小组： 外植体： 接种瓶数： 每瓶接种数： 接种时间：

诱导培养基： 分化培养基 增殖培养基 生根培养基：

初始培养阶段的常见问题及调控措施

常见问题 培养物长期培养几乎无反应 产生原因 基本培养基不适宜，生长素不调控措施 更换基本培养基或调整培养基成分，尤当或用量不足，温度不适宜。 其是调整盐离子浓度，增加生长素用量，试用2,4-D，调整培养温度。 培养物呈水渍状、表面杀菌剂过量，消毒时间过变色、坏死、茎断面附近干枯 愈伤组织过于致长，外植体选用不当（部位或时期）。 细胞分裂素用量过多，糖浓度调换其他杀菌剂或降低浓度，缩短消毒时间，试用其他部位，生长初期取材。 减少细胞分裂素用量，调整细胞分裂素与生长素比例，降低糖浓度。 密、平滑或突起，过高，生长素过量。 粗厚，生长缓慢 愈伤组织生长过旺、疏松，后期水浸状 侧芽不萌发,皮层过于膨大,皮孔长出愈伤组织 培养基和材料变褐 枝条过嫩,生长素、细胞分裂素用量过多。 激素过量，温度偏高，无机盐含量不当。 减少激素用量，适当降低培养温度，调整无机盐（尤其是铵盐）含量，适当提高琼脂用量增加培养基硬度。 减少激素用量，采用较老化枝条。 产生原因及调控措施见下次课内容 增殖培养阶段的常见问题及调控措施

常见问题 苗分化数量少、速度慢、分枝少、个别苗生长细高 苗分化过多，生长慢，有畸形苗，节间极短，苗丛密集，微型化 分化率低,畸形,培养时间产生原因 细胞分裂素用量不足，温度偏高，光照不足。 细胞分裂素用量过多，温度不适宜。 调控措施 增加细胞分裂素用量，适当降低温度，改善光照，改单芽继代为团块（丛芽）继代 减少或停用细胞分裂素一段时间，调节温度。 生长素用量偏高,温度偏高。 减少生长素用量，适当降温。 长时苗再次愈伤组织化 叶增厚变脆 生长素用量偏高，或兼有细胞分裂素用量偏高。 幼苗淡绿，部分失绿 无机盐含量不足，PH值不适宜，铁、锰、镁等缺少或比例失调，光照、温度不适。 幼苗生长无力、发黄、落 瓶内气体状况恶化，PH值变化过大，久不转接导致糖叶、有黄叶、死苗夹于丛已耗尽，营养元素亏缺失调，生芽苗中 温度不适，激素配比不当。 再生苗的叶缘、叶面偶有不定芽的分化 细胞分裂素用量偏高，或表明该种植物不适于该种再生方式。 丛生苗过于细弱，不适于生根或移栽 细胞分裂素浓度过高或赤霉素使用不当，温度过高，光减少细胞分裂素用量，不用赤霉素，延长光照时间，增强光照，及时转接，降低接种密度，更换适当减少细胞分裂素用量，或分阶段地利用这一再生方式。 及时转接、降低接种密度，调整激素配比和营养元素浓度，改善瓶内气体状况，控制温度。 针对营养元素亏缺情况调整培养基，调好PH值，调控温度、光照。 适当减少激素用量，避免叶片接触培养基。 照短，光强不足，久不转移，封瓶纸的种类。 生长空间窄。 生根阶段的常见问题及调控措施

常见问题 培养物久不生根，基部切口没有适宜的愈伤组织 产生原因 生长素种类、用量不适宜；生根部位通气不良；生根程序不当；PH值不适，无机盐浓度及配比不当。 调控措施 改进培养程序，选用适宜的生长素或增加生长素用量，适当降低无机盐浓度，改用滤纸桥液体培养生根等。 愈伤组织生长过快、过大，根茎部肿胀或畸形，几条根并联或愈合。

生长素种类不适，用量过高，或伴有细胞分裂素用量过高，生根诱导培养程序不对。 调换生长素种类或几种生长素配合使用，降低使用浓度，附加VB2或PG等减少愈伤组织，改变生根培养程序等。