更年期女性帕金森病动物模型的建立与评价

第ｌ５卷第２期　２００８年４月　莆田学院学报　中图分类号：Ｑ４２６；Ｒ７４２．５　ＶＯ１．１５　Ｎｏ．２　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｕｔ　ｉａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ａｐｒ．２００８　文章编号：１６７２－４１４３（２００８）０２．００４５．０４　文献标识码：Ａ　更年期女性帕金森病动物模型的建立与评价　刘黎星，叶维建　（莆田学院基础医学部人体解剖学教研室，福建莆田３５１１００）　摘　要：通过建立去卵巢帕金森病小鼠模型，应用免疫组织化学染色、逆转录．聚合酶链式反应及高效液相色　谱法等多项技术对小鼠黑质多巴胺神经元数目、基因表达水平及纹状体多巴胺及其代谢物含量进行考察并评　价。实验结果表明模型组小鼠上述检测指标较对照组均明显减少（Ｐ＜Ｏ．０１）。发现本模型具有更年期女性帕金森　病的基本的病理特点，可应用于临床研究。　‘　关键词：更年期；帕金森病；ＭＰＴＰ；雌激素；动物模型　Ｔｈｅ　Ａｎｉｍａｌ　Ｍｏｄｅｌ’Ｓ　Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ａｎｄ　Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓ　Ｄｉｓｅａｓｅ　ｉｎ　Ｃｌｉｍａｃｔｅｒｉｃ　Ｗ０ｍｅｎ　ＬＩＵ　Ｌｉ—ｘｉｎｇ，ＹＥ　Ｗｅｉ－ｊｉａｎ　（Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ｐｕｔｉａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｐｕｔｉａｎ　Ｆｕｊｉａｎ　３５　１　１　００，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｂｙ　ｔｈｅ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　ｏｖａｒｉｅｃｔｏｍｉｚｅｄ　ｍｉｃｅ　ｏｆ　Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ，ｔｈｅｎ　ｕｓｉｎｇ　ｉｍｍｕｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓ时　（ＩＣｅ）ｍｅｔｈｏｄ、ｓｅｍｉ－ｑｕａｎｔｉｔｉｖｅ　ｒｅｖｅｒｓｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｆＲＴ—ＰＣＲ）ａｎｄ　ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ—ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ（ＨＰＬＣ—ＥＣＤ），ｗｅ　ｃｈｅｃｋ　ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒｓ　ｏｆ　ＤＡ　ｎｅｕｒｏｎｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＳＮ，ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ＤＡ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｓｔｒ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｓｔ　ｉｍｐｌｙ　ｈａｔｔ　ｔｈｉｓ　ｍｏｄｅｌ　ｈａｓ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｂｉｏｌｏｇｙ　ｆｅａｔｕｒｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｉｎ　ｃｌｉｍａｃｔｅｒｉｃ　ｗｏｍｅｎ．Ａｌｌ　ｔｈｉｓ　ｒｅｓｕｌｓ　ｔｃｏｕｌｄ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｅｖｉｄｅｎｃｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ＰＤ　ｍｏｄｅ１．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｃｌｉｍａｃｔｅｒｉｃ　ｐｅｉｒｏｄ；Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ；ＭＰＴＰ；ｅｓｔｒｏｇｅｎ；ａｎｉｍａｌ　ｍｏｄｅｌ　帕金森病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）是一种常　见的中枢神经系统退行性疾病，由于严重危害老　年人的身体健康，影响生活质量。已成为国际急待　攻克病因及治疗的老年性疾病，并列为我国“九　五”攻关项目的四种老年病之一。其病理改变主要　是中脑黑质（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａ　ｎｉｇｒａ，ＳＮ）致密带（ＳＮＣ）多　疗（ｅｓｔｒｏｇｅｎ　ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ　ｔｈｅｒａｐｙ，ＥＲＴ）可以缓解　更年期妇女ＰＤ患者早期的运动障碍，并可降低　ＰＤ的发病率。然而，长期应用ＥＲＴ会增加乳腺　癌、子宫内膜癌及中风等的发病率，ＥＲＴ的副作用　限制了其在临床的长期应用。因此开发雌激素替　代品成为当前研究的热点。而对这类药物开发研　巴胺（ｄｏｐａｍｉｎｅ，ＤＡ）能神经元死亡。　大量的流行病学研究表明：ＰＤ的发病率具有　明显的性别差异，男性高于女　”。更年期妇女雌　激素水平下降会增加ＰＤ的发病率。雌激素替代治　收稿日期：２００７—０９—１６　究的基础在于建立一种基本符合更年期女性ＰＤ　病理特点的动物模型。　本研究采用成年雌性Ｃ５７ＢＬ小鼠，制备去卵　巢ＰＤ小鼠模型，应用免疫组织化学法检测中脑黑　基金项目：福建省科技厅资助省属高校项目（２００７Ｆ５０８６）　作者简介：刘黎星（１９７４一），女，福建莆田人，讲师，硕士。　维普资讯 http://www.cqvip.com

莆　田　学　院质多巴胺神经元的数量，并应用逆转录一聚合酶　链式反应（ＲＴ—ＰＣＲ）技术和高效液相色谱法　（ＨＰＬＣ）检测小鼠黑质ＴＨｍＲＮＡ表达水平及纹状　学　报　２００８年４月　（４０ｘ１０）计数视野内阳性细胞数。每个视野数两　遍，取平均数作为该视野内的阳性细胞数，顺序为　自上而下，由左至右，不完全位于视野内的细胞不　计数。最后把各视野内的细胞数再取平均数。　体（Ｓｔｒ）ＤＡ及其代谢产物释放量的改变。从而从　整体、细胞和基因等多个层次对更年期女性帕金　森病的这一动物模型作出评价。　１材料与方法　１．１　实验动物和药品　健康雌性Ｃ５７ＢＬ小鼠３６只，１０—１２周龄，体　重２０￣２ｇ．由北京维通利华动物实验中心提供。置　于室温１９￣２℃．１２：１２小时昼夜循环光照条件下　生活，自由饮水、取食。动物于实验前适应实验室　环境一周。　ＭＰｒＰ、ＴＨ抗体、ＤＡ、ＤＯＰＡＣ、ＨＶＡ、ＤＭＳｏ　均为Ｓｉｇｍａ公司产品。　１．２实验动物造模与给药　成年健康雌鼠，随机分为正常组、ＯＶＸ组、ＰＤ　模型组，每组１２只，其中后两组动物以８　水合　氯醛腹腔注射麻醉后，行双侧卵巢摘除术　（ｏｖａｒｉｅｃｔｏｍｉｚｅｄ，ＯＶＸ），以去除内源性的雌激素。　ＯＶＸ术后２周，给予模型组小鼠腹腔注射ＭＰＴＰ　（３０ｍｇ／ｋｇ）０．１ｍＬ，连续５ｄ。于每次注射药物后均　观察小鼠行为变化。于末次注射ＭＰＴＰ　２４ｈ后将　各组动物再随机分为两组，每组各６只，其中一组　灌注固定，行ＴＨ免疫组化染色；另一组小鼠处死　后在冰上分离出纹状体和黑质。　１．３免疫组织化学法　小鼠深度麻醉后迅速开胸暴露心脏，经左心　室快速灌注生理盐水和４％多聚甲醛，断头取出全　脑，浸泡固定６ｈ，再依次放入２０％和３０％的蔗糖　溶液中．待脑组织下沉后修整中脑组织块．以前囟　后２．５　ｍｍ开始进行冠状连续冰冻切片．片厚１６　ｍ，进行ＴＨ免疫组织化学染色。　切片的染色过程严格按ＡＢＣ试剂盒说明书　操作，过程包括：抗原修复，非免疫血清封闭，抗体　孵育，ＤＡＢ显色。一抗的工作浓度为１：３０００．以　ＰＢＳ缓冲液代替一抗作为阴性对照。　ＴＨ染色阳性的神经元计数方法：在ＳＮ密集　阳性细胞的中央部分取４个互不重叠的高倍视野　１．４半定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ）　小鼠断头取脑，分离黑质，提取总ＲＮＡ经紫　外分光光度计定量后，参照试剂盒说明书建立２０　Ｌ　ＲＴ反应体系：取３　ｇ总ＲＮＡ加入ＭｇＣｌ２　５　ｍｍｏｌ　４　Ｌ、１０ｘ逆转录反应缓冲液２　Ｌ，ｄＮＴＰ各　１　ｍｍｏｌ　２　Ｌ，ＡＭＶ逆转录酶１５Ｕ　０．５　Ｌ，ＲＮａｓｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　０．５ｐ，Ｌ，Ｏｌｉｇ（ｄＴ）ｌ５引物１　Ｌ，加无ＲＮａｓｅ　水至２０　Ｌ，４２℃反应１　ｈ，９９℃加热５ｍｉｎ，然后　快速冷却到４℃。建立２５　ＬＰＣＲ反应体系：在３　ｇ　ＲＴ产物中加入ＭｇＣｌ２　２５ｍｍｏｌ　１．５　Ｌ，１０ｘ逆转　录反应缓冲液２．５　Ｌ，ｄＮＴＰ各１　ｍｍｏｌ　２　Ｌ，上下　游引物各１　Ｌ，ＴａｑＤＮＡ聚合酶０．２　Ｌ，加无　ＲＮａｓｅ水至２５　Ｌ。上游引物序列５’ＡＡＡ　ＡＴＣ　ＣＡＣ　ＣＡＣ　ＴＴＡ　ＧＡＧ　ＡＣＣ３’；下游引物５’ＴＡＧ　ＣＣＡ　ＣＡＧ　ＴＡＣ　ＣＧＴ　ＴＣＣ３’。执行以下程序：９４℃　５　ｍｉｎ，２８个循环（９４℃３０　ｓ、５２℃３０　ｓ、７２℃ｌ　ｍｉｎ），７２℃１０　ｍｉｎ。以ＧＡＰＤＨ为内参照，上游引　物为５’ＧＡＣ　ＣＡＣ　ＡＧＴ　ＣＣＡ　ＴＧＣ　ＣＡＴ　ＣＡＣ３’．下　游引物为５’ＧＣＴ　ＧＴＴ　ＧＡＡ　ＧＴＣ　ＧＣＡ　０ＧＡ　ＧＡＣ３’。９　Ｌ的ＰＣＲ产物经含有０．５￣ｇ／ｍＬ溴化　乙淀的２％琼脂糖凝胶电脉观察，并经１００ｂｐ　ｍａｒｋｅｒ进行分析比较。ＰＣＲ产物经数据分析装置　（Ａｌｐｈａｉｍａｇｅｒ　２２００）观察影像并进行密度分析。　１．５　高效液相色谱电化学检测法（ＨＰＬＣ—ＥＣＤ　法）测定Ｓｔｒ内ＤＡ及其代谢产物的含量　应用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法进行Ｓｔｒ内ＤＡ　及其代谢产物含量的测定。小鼠断头取脑，取出两　侧Ｓ打，称重，加入１００￣Ｌ冰冷的样品预处理Ａ液。　超声匀浆１０　Ｓ后，冰浴静置１　ｈ，取匀浆液在转速　１２０００ｒ／ｍｉｎ下离心２０ｍｉｎ；移出８０　Ｌ上清液加入　样品预处理Ｂ液４０　Ｌ涡旋混匀后第二次离心，取　上清液行ＨＰＬＣ分析。设定最大柱压为１７２３７ｋＰａ　（２５００ｐｓｉ），流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ。ＥＣＤ设定电压　０．６５Ｖ，每一样品检测３０ｍｉｎ每次进样２０　Ｌ，根　据色谱峰面积从标准曲线上求出相应含量（　ｍｇ　组织湿重）。样品预处理液：Ａ液为０．４ｍｏｌ　ＨＣ１０４：　维普资讯 http://www.cqvip.com

第２期　刘黎星，等：更年期女性帕金森病动物模型的建立与评价　４７　４．６ｍＬ　ＨＣ１０４用ｄｄＨ２Ｏ稀释至２００ｍＬ；Ｂ液为２Ｏ　ｍｍｏｌ柠檬酸钾（１．６ｇ），３００ｍＭ磷酸氢二钾（１３．０６　ｇ），２ｍＭ　ＥＤＴＡ・２Ｎａ（０．１８５　ｇ）溶于２５０ｍＬｄｄＨ２０　明ＲＮＡ带完整，没有降解，可作为逆转录反应的　模板．并且以不同引物扩增出的片段长度与设计　的扩增片段长度相一致。用ＴＨ与ＧＡＰＤＨ比值表　示ＴＨ基因的表达水平。　中。实验仪器为美国Ｗａｔｅｒｓ公司６００．７１７．２４６５高　效液相色谱仪。　１．６统计学处理　如表２、图１所示．模型组与正常对照组、　ＯＶＸ组相比ＴＨ基因扩增产物明显减少（Ｐ＜　Ｏ．Ｏ１），差别具有高度的统计意义。　表２　ＭＰＴＰ所致ＰＤ模型小鼠ＳＮ内　ＴＨ基因表达的改变　实验结果以均数±标准误差（ｘ±Ｓ．Ｅ．Ｍ．）表　示．应用ＳＰＳＳ１１．０软件包进行单因素方差分析　（ｏｎｅ．ｗａｙＡＮＯＶＡ）。Ｐ＜Ｏ．０５表明结果有统计学　意义。　２结果　２．１　ＭＰＴＰ所致ＰＤ模型小鼠行为的改变　Ｐ＜０．０１，与正常组比较。　ＴＨ：　Ａ　Ｂ　Ｃ　模型组小鼠在ＭＰＴＰ注射后数分钟可出现阵　发性躯干震颤、竖毛、频繁的窜蹦及爬杆不能等短　４６７ｂｐ　ＧＡＰＤＨ：　Ａ　Ｂ　Ｃ　暂的行为反应，随后出现活动减少，随ＭＰＴＰ注射　次数增加上述表现愈加严重，但次日略见恢复。　２．２　ＭＰＴＰ所致ＰＤ模型小鼠ＳＮ内ＴＨ免疫阳　性神经元数目的改变　３４０ｂｐ　图中：Ａ为正常组；Ｂ为ＯＶＸ组；Ｃ为模型组　图１小鼠ＳＮ内ＴＨ　ｃＤＮＡ扩增产物电泳　应用免疫组织化学技术．观察ＳＮ内ＴＨ免疫　阳性神经元数目的变化。结果显示正常对照组及　ＯＶＸ组ＳＮＣ中ＴＨ免疫阳性细胞数量较多，神经　元突起较多，呈多角形，而相比之下模型组ＳＮＣ　中ＴＨ免疫阳性细胞数量明显减少，突起较少，差　异有高度显著性（Ｐ＜Ｏ．０１）。见表１。　表１　ＭＰＴＰ所致ＰＤ模型小鼠ＳＮ区ＴＨ　免疫阳性神经元数量的改变　２．４　ＭＰＴＰ所致ＰＤ模型小鼠纹状体ＤＡ及其代　谢产物含量的改变　如表３所示，ＭＰＴＰ模型组ＤＡ及其代谢产物　ＤＯＰＡＣ、ＨＶＡ的含量与正常对照组相比下降显著　（Ｐ＜Ｏ．０１）。　３讨论　自从１８１７年英国医师Ｊａｍｅｓ　Ｂ．Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ首　次报道了他称之为震颤麻痹的神经系统疾病以　后，世界各地虽对该病多有报道，但对其病因，发　Ｐ＜０．０１，与正常组比较。．　病机理等知之甚少。直到１９世纪５Ｏ年代，Ｃａｒｌｓｏｎ　等发现啮齿类动物在给予腹腔内注射利血平后，　２．３　ＭＰＴＰ所致ＰＤ模型小鼠黑质ＴＨｍＲＮＡ表　达的改变　表现出了类似人类ＰＤ的症状。这是有报道的最早　的ＰＤ动物模型。虽然这项发现极大地促进了人们　对于ＰＤ的认识，但是该模型不同个体间差别较　提取的ＲＮＡ在甲醛变性凝胶电泳上可以清　晰看到２８ｓ和１８ｓ两条带，其亮度之比为２：１，表　表３　ＭＰＴＰ　ＰＤ模型小鼠Ｓｔｒ区ＤＡ及其代谢产物　含量的改变（脑组织湿重ｎｇ／ｍｇ）　Ｐ＜０．０１，与正常组比较。　维普资讯 http://www.cqvip.com

莆　田　学　院学　报　２００８年４月　大，而且其病理改变与人类ＰＤ大不相同圆。所以，　人们开始致力于制作更好的ＰＤ动物模型的研究。　１９６８年Ｕｎｇｅｒｓｔｅｄｔ等人首先报道利用６．羟基多　巴胺（６－Ｈｙｄｒｏｘｙｄｏｐａｍｉｎｅ，６－ＯＨＤＡ）制作成功ＰＤ　动物模型【３１。Ｂｕｍｓ等在１９８３年首次报道了利用　ＭＰＴＰ制成的非人灵长类动物ＰＤ模型【４】。ＭＰＴＰ　是一种神经毒素，具有致幻作用。ＭＰＴＰ选择性地　损伤ＳＮ　ＤＡ能神经元，由它引起的神经化学、动　物行为和组织病理学等改变都与人类的ＰＤ症状　类似。到目前为止，ＭＰＴＰ制备的ＰＤ模型被公认　是最好的（Ｓｃｈｍｉｄｔ　ａｎｄ　Ｆｅｒｇｅｒ　２００１），从而为ＰＤ　的研究提供了一个良好的平台。　近年来，大量的流行病学研究表明ＰＤ的发　病率具有明显的性别差异【”。虽然其原因尚不清　楚，但雌激素水平及其受体表达与黑质纹状体　ＤＡ能神经元退行性变密切相关。雌激素可在垂　体、下丘脑、中脑边缘系统和黑质一纹状体等水平　影响ＤＡ能神经递质系统的功能【　。临床资料显　示更年期女性雌激素水平下降会增加ＰＤ的发病　率．而ＰＤ女性患者在疾病早期应用雌激素替代　疗法，病情可明显减轻。有研究表明，雌激素缺失　３０天即可导致黑质ＤＡ能神经元数目减少３０％　以上【　。本室先前的研究也表明内源性雌激素可对　抗ＭＰ＇Ｉ￣对多巴胺神经元的损害，故本实验根据　上述特点首先对健康雌性动物施行双侧去卵巢的　手术。以去除内源性雌激素的影响，模拟更年期的　生活状态，再利用ＭＰＴＰ腹腔注射以建立更年期　雌性ＰＤ动物模型。ＭＰ＇Ｉ￣为强脂溶性化合物，极　易透过血脑屏障，其经过两步生物转化后形成它　的代谢产物１．甲基－４．苯吡啶离子　（１－ｍｅｔｈｙ１．４－ｐｈｅｎｙｌｐｙｒｉｄｉｎｉｕｍ，ＭＰＰ＋）具有很强的　神经毒性作用，可抑制ＤＡ合成的限速酶．酪氨　酸羟化酶（ｔｙｒｏｓｉｎｅｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ，ＴＨ）的活性而减少　多巴胺的合成，并且通过耗能的主动转运方式进　入线粒体。与线粒体呼吸链的复合物Ｉ结合，阻断　线粒体电子传递系统。通过耗竭ＡＴＰ从而导致能　量代谢障碍，自由基的生成增加，氧化应激及线　粒体功能的损伤最终会导致小鼠黑质多巴胺神　经元凋亡。如同我们在实验中所观察到：免疫组　化和ＲＴ．ＰＣＲ的结果显示小鼠黑质ＴＨ免疫阳性　ＤＡ能神经元数目及ＴＨｍＲＮＡ表达水平在腹腔　注射ＭＰＴＰ后显著降低．而且ＨＰＬＣ的结果也表　明模型组纹状体的ＤＡ及其代谢产物含量也显著　降低。　研究结果表明本模型具有更年期ＰＤ女性所　具有的黑质多巴胺神经元脱失，中枢神经递质多　巴胺及其代谢产物分泌量下降，相关基因表达下　调等病理特征，可为临床雌激素类药物的开发研　制及帕金森病的防治工作奠定坚实的实验基础，　提供可靠的实验依据。　参考文献：　【１】Ｓａｗａｄａ　Ｈ，Ｓｈｉｍｏｈａｍａ　Ｓ．Ｅｓｔｒｏｇｅｎｓ　ａｎｄ　Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ　Ｄｉｓｅａｓｅ：　ｎｏｖｅｌ　ａｐｐｒｏａｃｈ　ｆｏｒ　ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ【Ｊ】．　Ｅｎｄｏｃｉｒｎｅ，２００３，２ｌ（５）：７７—７９．　【２】Ｍａｎｅｕｆ　Ｙ　Ｐ，Ｄｕｔｙ　Ｓ，Ｈｉｌｌｅ　Ｃ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＧＡＢＡ　ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ　ｂｙ　ｄｉａｚｏｘｉｄｅａｎｄ　ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｇｌｏｂｕｓ　ｐｌｌｉｄｕｓ，　ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ【Ｊ】．Ｅｘｐ　Ｎｅｕｒｏｌ，１９９６，１３９（１）：１２－　ｌ６．　【３】Ｕｎｇｅｒｓｔｅｄｔ　Ｕ．６－Ｈｕｄｒｏｘｙｄｏｐａｒｎｉｎｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｅｎｔｒａｌ　ｍｏｎｏａｍｉｎｅ　ｎｅｕｒｏｎｓ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｐｈａｒｍｃ，１　９６８，　５（１）：１０７一ｌ１０．　【４】Ｂｕｍｓ　Ｒ　Ｓ，Ｃｈｉｕｅｈ　Ｃ　Ｃ，Ｍａｒｋｅｙ　Ｓ　Ｐ，ｅｔ　ａ１．Ａ　Ｐｒｉｍａｔｅ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ：　ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ　ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ　ｎｅｕｒｏｎｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐａｒｓ　ｃｏｍｐａｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｕｂｓｔａｎｔｉａ　ｎｉｇｒａ　ｂｙ　ＭＰＴＰ【Ｊ】．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ，ｌ９８３，８０（１４）：４５４６－－４５５０．　【５】Ｍｉｌｌｅｒ　Ｄ　Ｂ，Ａｌｉ　Ｓ　Ｆ，０’ＣａＨａｇｈａｎ　Ｊ　Ｐ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｉｍｐａｃｔ　ｏｆ　ｇｅｎｄｅｒ　ａｎｄ　ｅｓｔｒｏｇｅｎ　ｏｎ　ｓｔｒｉａｔａｌ　ｄｏｐａｍｉｎｅ　ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙ【Ｊ】．Ａｎｎ　ＮＹ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ，１９９８，８４４（７）：　ｌ５３一ｌ５６．　【６】Ｄｌｕｚｅｎ　Ｄ　Ｅ，Ｄｉｓｓｈｏｎ　Ｋ　Ａ，ＭｃｄｅｒｍｏＲ　Ｊ　Ｌ．Ｅｓｔｒｏｇｅｎ　ａｓ　ａ　ｍｏｄｕｌａｔｏｒ　ｏｆ　ｓｔｒｉａｔａｌ　ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ　ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙ　【Ｊ】．Ｅｄｓ，１９９８，５５（２）：１４９－１９２．　【７】Ｌｅｒａｎｔｈ　Ｃ，Ｒｏｔｈ　Ｒ　Ｈ，Ｅｌｓｗｏｒｔｈ　Ｊ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｅｓｒｔｏｇｅｎ　ｉｓ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｆｏｒ　ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ　ｎｉｇｒｏｓｔｒｉａｔａｌ　ｄｏｐａｍｉｎｅ　ｎｅｕｒｏｎｓ　ｎｉ　ｐｒｉｍａｔｅｓ：　ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　Ｐａｒｋｉｎｓｏｆｆｓ　ｄｉｓｅａｓｅ　ａｎｄ　ｍｅｍｏｒｙ［Ｊ］．Ｎｅｒｕｏｓｃｉ，２０００，２０（９）：８６０４—８６０９．　［责任编辑林锋】