工作曲线法

工作曲线法是先配制一系列标准有色溶液，用最大吸收波长的单色光分别测出它们的吸光度。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制出标准曲线或工作曲线，见下图。在测定被测物质溶液的浓度时，用与绘制标准曲线时相同的操作方法和条件测出该溶液的吸光度，再从标准曲线上查出相应的浓度或含量。

示例：

测定溶液中磷的含量（实验十七），需要以下步骤：

1.配制标准系列

比色管： 1 2 3 4 5 6 样品1 样品2 样品3 标准溶液ml 0 2 4 6 8 10 10(样液） 10 10 c=5ug/ml

显色剂ml 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 定容ml 25 25 25 25 25 25 25 25 25

计算浓度 根据公式 c标*v标=c25*v25

c25=c标*v1标/v25 （样品溶液的浓度不计算） 第一支浓度为零（空白溶液），第二支比色管浓度=5ug/ml*2ml/25ml,

c(ug/ml) 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 (做标准曲线横坐标使用)

2. 绘制光吸收曲线

取标准溶液中的第一支和第二支，到分光光度计上测定在不同波长下的吸光度A值，记录数据。（第一支为参比溶液，用于调仪器零点）

λ（nm) λ1 λ2 λ3 λ4 λ5 λ6 λ7 λ8 λ9 λ10 A A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 A9 A10

以波长λ为横坐标，以A为纵坐标，做光吸收曲线，在曲线上查出A值最大的点所对应的横坐标上的波长，即为最大吸收波长。

3. 绘制标准曲线

将仪器的波长调整到最大吸收波长处，以第一支空白液为 参比溶液，分别测定2-6比色管中溶液的吸光度A值。

以A为纵坐标，以溶液浓度c为横坐标，做图，得一直线。

4. 求样品浓度

（1）在相同的条件下，测定出三个样品溶液的吸光度A值。 （2）在标准曲线的纵坐标处找出相应的A样值。

（3）从A样处画一条平行于横坐标的直线，至与标准曲线相交。 （4）从相交处往下画垂直于横坐标的线，相交于横坐标， 这一点所对应的浓度读数即为样品溶液的浓度。

A A样 c样

c(ug/ml)

5.转换成原液的浓度

从图上查出来的浓度，是用10.00ml原液配成的25.00溶液的浓度。最后要得到原溶液的浓度。

根据公式：c原液*v原液= c样*v样

c原液 = c样*v样/v原液= c样*25ml*10ml