乳腺癌HER-2基因扩增与HER-2／neu蛋白表达的一致性及其与临床病理特

重庆医学２０１７年第４６卷增刊（Ⅱ）　４７　・论　著・　乳腺癌ＨＥＲ一２基因扩增与ＨＥＲ一２／ｎｅｕ蛋白表达的一致性及其与　临床病理特征的相关性研究　何春燕，曹丽芳，齐彬，周平安，张翔　（广东省农垦中心医院病理科摘要：目的５２４００２）　研究乳腺癌ＨＥＲ－２基因扩增与ＨＥＲ一２／ｎｅｕ蛋白表达的一致性及其与临床病理特征的相关性。方法　对该　院病理科２０１３年９月至２０１６年９月接受ＦＩＳＨ检测的浸润性乳腺癌患者８２例的临床资料进行统计分析。结果　ＩＨＣ和ＦＩＳＨ　检测（一／＋）、（＋＋）、（＋＋＋）一致率分别为１２．５　（２／１６）、５０．０　（２３／４６）、５８．８　（１０／１７）（Ｐ＜Ｏ．０５）；肿瘤大小和ＨＥＲ一２／ｎｅｕ　蛋白表达呈显著的正相关关系（Ｐ＜Ｏ．０５）；ＥＲ、ＰＲ、ＥＲ／ＰＲ和ＨＥＲ－２基因扩增之间的差异均显著（Ｐ＜Ｏ．０５）；ＥＲ表达和ＨＥＲ一２　基因扩增与ＨＥＲ一２／ｎｅｕ蛋白表达均呈显著的负相关关系（Ｐ＜０．０５），ＰＲ表达、ＥＲ／ＰＲ状态和ＨＥＲ－２基因扩增呈显著的负相关　关系（Ｐ＜Ｏ．０５）。结论　乳腺癌ＨＥＲ－２基因扩增与ＨＥＲ一２／ｎｅｕ蛋白表达存在一致性，其与肿瘤直径、ＥＲ、ＰＲ、ＥＲ／ＰＲ等临床病　理特征具有一定的相关性，值得临床充分重视。　关键词：乳腺癌；ＨＥＲ一２基因扩增；ＨＥＲ一２／ｎｅｕ蛋白表达；一致性；临床病理特征；相关性　Ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ　ｏｆ　ＨＥＲ＿‘２　ｇｅｎｅ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ＨＥＲ・・２／ｎｅｕ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ　ｗｉｔｈ　ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　Ｈｅ　Ｃｈｕｎｙａｎ，Ｃａｏ　Ｌｉｆａｎｇ，Ｑｉ　Ｂｉｎ，Ｚｈｏｕ　Ｐｉｎｇａｎ，Ｚｈａｎｇ　Ｘｉａｎｇ　（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｎｏｎｇｋｅｎ　Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｚｈａｎｊｉａｎｇ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　５２４００２，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ　ｏｆ　ＨＥＲ－２　ｇｅｎｅ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ＨＥＲ一２／ｎｅｕ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｃｏｒｒｅ—　ｌａｔｉｏｎｓ　ｗｉｔｈ　ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｄａｔａ　ｏｆ　８２　ｃａｓｅｓ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｉｎｖａｓｉｖｅ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＦＩＳＨ　ｉｎ　ｏｕｒ　ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｆｒｏｍ　Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ　２０１３　ｔｏ　Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ　２０１６　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ＩＨＣ　ａｎｄ　ＦＩＳＨ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ（一／＋），（＋＋），（＋＋＋）ｗｅｒｅ　１２．５　（２／１６），５０　（２３／４６），５８．８　（１０／１７）（Ｐ　ｄ０．０５）；ｔｈｅ　ＨＥＲ一２／ｎｅｕ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｕｍｏｒ　ｓｉｚｅ　ｓｈｏｗｅｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ（Ｐ＜０．０５）；ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｂｅ—　ｔｗｅｅｎ　ＥＲ，ＰＲ，ＥＲ／ＰＲ　ａｎｄ　ＨＥＲ－２　ｇｅｎｅｓ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０５）；ｔｈｅ　ＥＲ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ＨＥＲ＿２　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ＨＥＲ一２／ｎｅｕ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ（Ｐ＜Ｏ．０５），ｔｈｅ　ＰＲ，ＥＲ／ＰＲ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ａｎｄ　ＨＥＲ－２　ｇｅｎｅ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｓｈｏｗｅｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ（Ｐ＜Ｏ．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　ＨＥＲ一２　ｇｅｎｅ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ＨＥＲ－２／ｎｅｕ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｒｅ　ｃｏｎｓｉｓｔ—　ｅｎｔ，ｗｈｉｃｈ　ｈａｖｅ　ｓｏｍｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ　ｗｉｔｈ　ｔｕｍｏｒ　ｄｉａｍｅｔｅｒ，ＥＲ，ＰＲ　ａｎｄ　ＥＲ／ＰＲ　ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌ０ｇｉｃａ１　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ，ｓｏ　ｉｓ　ｗｏｒｔｈｖ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｓ　ｆｕｌｌ　ａｔｔｅｎｔｉｏｎ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ；ＨＥＲ一２　ｇｅｎｅ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ＨＥＲ一２／ｎｅｕ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ；ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ；ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒ—　ｉｓｔｉｃｓ；ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　为了将科学依据提供给临床对乳腺癌的治疗工作，从而切　实有效地改善患者预后，本研究对乳腺癌ＨＥＲ－２基因扩增与　ＨＥＲ－２／ｎｅｕ蛋白表达的一致性及其与临床病理特征的相关性　进行了研究，现报道如下。　１资料与方法　１．２．２荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）技术　采用ＨＥＲ＿２基因扩增试　剂盒进行ＦＩＳＨ检测，取下新鲜标本后１　ｈ内在１Ｏ　中性福尔　马林中放置，将其固定起来，时长为６　ｈ至２　ｄ，用量大于组织　块的１Ｏ倍。切片后３“ｍ，在干净处理的涂胶玻片中放置，在　６５℃的温度下烘烤过夜。常规脱蜡复水，用高压锅进行３　ｍｉｎ　１．１一般资料收集本院病理科２０１３年９月至２０１６年９月　的抗原修复，断开电源后进行４　ｍｉｎ的保持，在３７℃的温度下　采用２×ＳＳＣ液５　ｍｉｎ　２次，在３７℃的温度下在５／ｌｇ／ｍＬ胃蛋　接受ＦＩＳＨ检测的浸润性乳腺癌患者８２例，所有患者的标本　均经病理学证实为浸润性乳腺癌，均具有完整的病理特征及　ＩＨＣ资料，均知情同意。年龄２６～６５岁，平均（４５．３士１Ｏ．２）　岁。在病理类型方面，７８例患者为浸润性导管癌，４例患者为　浸润性小叶癌。石蜡切片分别检测ＦＩｓＨ和ＩＨＣ。购买上海　白酶溶液＋０．Ｏ１　ｍｏｌ／ＬＨＣＬ中进行１Ｏ～１８　ｍｉｎ的消化，在　３７℃的温度下采用２×ＳＳＣ液５　ｍｉｎ　２次，对玻片进行自然干　燥前用乙醇梯度脱水。将１０／￣Ｌ探针混合液滴加其中将组织　覆盖住，将盖玻片盖上后将其封固起来，在此过程中将封片胶　充分利用起来，在杂交仪中放置，在８３℃的温度下进行８　ｍｉｎ　的杂交，在４２℃的温度下进行１６　ｈ的杂交。将切片取出后将　封片胶去掉，在室温下使盖玻片自然脱落，途径为采用２×ＳＳＣ　液进行浸泡，在４６℃的温度下分别在２×ＳＳＣ液、０．１　ＮＰ４０　基因公司生产的ＩＨＣ抗体，ＥＲ、ＰＲ、ＨＥＲ一２／ｎｅｕ、Ｋｉ－６７克隆号　分别为ＳＰＩ、ＳＰ２、ＧＡ０４８５２９、ＭＩＢ－Ｉ。购买北京金普嘉公司生　产的ＦＩＳＨ检测基因扩增试剂盒。　１．２方法　１．２．１免疫组织化学（ＩＨＣ）法　运用ＥｎＶｉｓｉｏｎ法进行ＩＨＣ　中１０　ｍｉｎ、５　ｍｉｎ，在室温下在７Ｏ　乙醇中４　ｍｉｎ，在暗处对玻　片进行自然干燥，然后将１Ｏ　Ｌ　ＤＡＰＩ滴加其中，在杂交区覆　盖，同时将盖玻片盖上，在暗处进行１Ｏ～２０　ｍｉｎ的放置，然后　检测，ＥＲ、ＰＲ、ＨＥＲ－２蛋白阳性表达的标准为细胞核、细胞膜　呈棕色　］。　４８　重庆医学２０１７年第４６卷增刊（ＩＩ）　２．１　ＩＨＣ和ＦＩＳＨ检测ＨＥＲ一２基因扩增与ＨＥＲ＿２／ｎｅｕ蛋白　表达的一致性分析ＩＨＣ和ＦＩＳＨ检测（一／＋）、（＋＋）、（＋＋　在荧光显微镜下对其进行观察［２］。　１．３结果判定　１．３．１　ＩＨＣ结果判定在ＥＲ、ＰＲ判定方面，显微镜下对１００　＋）一致率分别为１２．５％（２／１６）、５０．０　（２３／４６）、５８．８　（１０／　１７）（Ｐ＜Ｏ．０５），见表１。　表１　ＩＨＣ和ＦＩＳＨ检测ＨＥＲ一２基因扩增与ＨＥＲ一２／ｎｅｕ　蛋白表达的一致性分析　个细胞进行计数，依据任意５个高倍镜视野中和染色程度及阳　性细胞所占比例，着色细胞占计数细胞的百分率≤５％、６　～　２５　、２６　～５Ｏ　、＞５ｏ　分别评定为０、１、２、３分。将其和染　色强度有机结合起来，无着色、浅黄色、棕黄色、棕褐色分别评　定为０、１、２、３分。最后得分为二者乘积。同一视野如果具有不　同的染色强度，则将最后得分设定为平均值。１分、２～３分、４　～６分、＞６分分别诊断为阴性（一）、弱阳性（＋）、中等阳性（＋　捣　匏　＋）、强阳性（＋＋＋）［３３；在ＨＥＲ＿２／ｎｅｕ判定方面，无着色，任　何比例的浸润性细胞呈不完整、微弱的细胞膜着色，＞１０　的　浸润癌细胞呈完整但不均匀、微弱到中等强度的细胞膜棕黄着　色或＜３０　的浸润癌细胞呈完整、强的细胞膜棕褐着色，＞　３Ｏ％的浸润癌细胞呈完整、强的细胞膜棕褐着色分别评定为　（一）、（＋）、（＋＋）、（＋＋＋）＿４　；在Ｋｉ－６７判定方面，增殖指数　＜５０　、≥５０　分别评定为低表达、高表达Ｉｓ］。　ｌ＿３．２　ＦＩＳＨ结果判定簇状扩增的判定标准为浸润癌区肿　２．２　ＩＨＣ和ＦＩＳＨ检测结果和ＥＲ、ＰＲ、ＥＲ／ＰＲ、Ｋｉ一６７及临床　病理特征的相关性分析肿瘤直径和ＨＥＲ＿２／ｎｅｕ蛋白表达呈　Ｍ　瘤细胞ＨＥＲ一２呈团状、簇状，具有显著红信号；或对３０个细胞　进行计数，将ＨＥＲ一２红信号／着丝粒率绿信号计算出来，Ｒａｔｉｏ　＜１．８、１．８－２．２、＞２．２分别评定为阴性、不确定、阳性，不确定　时对１００个细胞进行计数＿６］。　显著的正相关关系（Ｐ＜０．０５），和ＨＥＲ＿２基因扩增无相关性　（Ｐ＞０．０５）；ＥＲ、ＰＲ、ＥＲ／ＰＲ和ＨＥＲ一２基因扩增之间的差异　均显著（Ｐ＜０．０５），和ＨＥＲ－２／ｎｅｕ蛋白表达之间的差异均不　显著（Ｐ＞０．０５）；ＥＲ表达和ＨＥＲ＿２基因扩增与ＨＥＲ－２／ｎｅｕ　蛋白表达均呈显著的负相关关系（Ｐ＜０．０５），ＰＲ表达、ＥＲ／ＰＲ　７　６　ｎ　状态和ＨＥＲ一２基因扩增呈显著的负相关关系（Ｐ＜０．０５），和　１．４统计学处理　统计分析所得数据时应用软件ＳＰＳＳ１１．５，　用Ｋａｐｐａ检验两种不同方法检测结果的一致性，用Ｓｐｅａｒｍａｎ　２等级相关分析、ｙ　检验及秩和检验ＨＥＲ一２基因扩增与ＨＥＲ一　２／ｎｅｕ蛋白表达与临床病理特征的相关性，检验标准ａ一０．０５。　２　结　果　ＨＥＲ＿２／ｎｅｕ蛋白表达无相关性（Ｐ＞０．０５）；年龄、组织学分级、　淋巴结转移、Ｋｉ一６７增殖指数和ＨＥＲ一２基因扩增与ＨＥＲ＿２／　ｎｅｕ蛋白表达均无相关性（Ｐ＞０．０５），见表２。　加表２　ＩＨＣ和ＦＩＳＨ检测结果和ＥＲ、ＰＲ、ＥＲ／ＰＲ、Ｋｉ一６７及临床病理特征的相关性分析（　）　７　Ｃ　５　４　８年龄（岁）　肿瘤直径（ｃｍ）　组织学分级　淋巴结转移　＞０．０５　＜Ｏ．０５　＋＋＋　ＰＲ　＋　重庆医学２０１７年第４６卷增刊（Ⅱ）　续表２　ＩＨＣ和ＦＩＳＨ检测结果和ＥＲ、ＰＲ、ＥＲ／ＰＲ、Ｋｉ一６７及临床病理特征的相关性分析（　）　４９　ＥＲ／ＰＲ　¨　一　十　卅　卅　Ⅻ　６　９　４　Ｏ　８　Ｋｉ一６７增殖指数（　）　＞０．０５　３讨　论　Ｅ３３杜江，刘小超，唐文婷，等．乳腺癌ＨＥＲ２基因荧光原位杂　交及其临床病理关系［Ｊ］．临床与实验病理学杂志，２０１０，　２６（１）：４８—５０．　人表皮生长因子受体一２（ＨＥＲ＿２）基因属于一种原癌基因，　对ＨＥＲ－２／ｎｅｕ蛋白进行编码，在人染色体１７ｑ２１上定位＿］，乳　３　Ｏ　＂　３　１　９　毖　８　７腺癌的生长、侵袭、转移、治疗及预后均受到ＨＥＲ一２基因扩增　与ＨＥＲ－２／ｎｅｕ蛋白表达的直接而深刻的影响［８］。ＨＥＲ－２基　因扩增与ＨＥＲ－２／ｎｅｕ蛋白过度表达提示患者具有较差的内分　泌治疗效果　，而曲妥珠单抗疗效较为显著　］。本研究结果　表明，ＩＨＣ和ＦＩＳＨ检测（一／＋）、（＋＋）、（＋＋＋）一致率分　别为１２．５　（２／１６）、５０．０　（２３／４６）、５８．８　（１０／１７）（Ｐ＜　３　ｌ　３　３　０　Ｕ　５　Ｅ４３王鸿雁，张学斌，蒋伊娜，等．乳腺癌ＨＥＲ一２基因扩增的　临床病理意义ＥＪ］．肿瘤防治研究，２ＯｌＯ，３７（１１）：１２６４—　１３６８．　Ｅ５］李慧慧，马飞，曹碹，等．乳腺癌ＨＥＲ２的表达与临床病理　特征的关系［Ｊ］．中华医学杂志，２Ｏｌ１，９１（２）：７６—８０．　Ｅ６］张醅，徐玮．ＩＨＣ法与ＦＩＳＨ法检测乳腺癌ＨＥＲ一２基因　结果比较［Ｊ］．现代中西医结合杂志，２０１３，２２（１２）：１２６７—　１２６９．　０．０５）；肿瘤大小和ＨＥＲ＿２／ｎｅｕ蛋白表达呈显著的正相关关系　（Ｐ＜Ｏ．０５）；ＥＲ、ＰＲ、ＥＲ／ＰＲ和ＨＥＲ一２基因扩增之间的差异　均显著（Ｐ＜Ｏ．０５）；ＥＲ表达和ＨＥＲ一２基因扩增与ＨＥＲ－２／ｎｅｕ　蛋白表达均呈显著的负相关关系（Ｐ＜Ｏ．０５），ＰＲ表达、ＥＲ／ＰＲ　状态和ＨＥＲ一２基因扩增呈显著的负相关关系（Ｐ＜Ｏ．０５），说　明乳腺癌ＨＥＲ－２基因扩增与ＨＥＲ－２／ｎｅｕ蛋白表达存在一致　性，其与肿瘤直径、ＥＲ、ＰＲ、ＥＲ／ＰＲ等临床病理特征具有一定的　４　Ｏ　６　１　Ｏ　ｍ　３　７　４　５　Ｅ７３李文婷，王莹，张银华，等．年轻女性乳腺癌中ＥＲ、ＰＲ、　ＨＥＲ一２和Ｋｉ一６７的表达与临床病理意义ＥＪ３．重庆医科大　学学报，２Ｏｌ２．３７（９）：７８４—５．　Ｅ８］张继运，沙新海，于明涛．ｃ—ｅｒｂＢ－２、Ｐ５３、Ｋ　６７及ＶＥＧＦ　在乳腺癌中的表达及相关性［Ｊ］．实用癌症杂志，２０１２，２７　（３）：２４２．　相关性，值得临床充分重视。　参考文献　Ｅ９３陈顺平，刘伟，余英豪，等．浸润性乳腺癌ＨＥＲ－２基因扩　增与蛋白表达的关系研究ＥＪ］．中华普通外科杂志，２Ｏｌｌ，　２６（１Ｏ）：８２９—３２．　Ｅ１３杨志慧，李桂梅，曹晓卉，等．ＨＥＲ－２基因在乳腺癌中临床　意义的探讨ＥＪ］．临床与实验病理学杂志，２ｏ１２，２８（８）：　９１５—７．　ＥｌＯ３王文义，王桂枝，张明智．荧光原位分子杂交技术检测乳　腺癌组织中ＨＥＲ一２基因的表达［Ｊ］．医药论坛杂志，　２Ｏ１１，１３（７）：１２３—１２６．　Ｅ２］步宏，陈杰，付丽，等．乳腺癌ＨＥＲ２检测指南（２００９版）　ＥＪ］．中华病理学杂志，２００９，３８（１２）：８３６—４０．　・论　著・　２０１０—２０１　３年丽水市中心医院幽门螺杆菌ＩｇＧ抗体检测结果分析　徐　燕，胡兰娟，郑　颖　（浙江省丽水市中心医院检验科　３２３０００）　摘要：目的　了解近年来丽水市民幽门螺杆菌感染现状。方法采集静脉血用胶体金法检测血清中幽门螺杆菌ＩｇＧ抗体，　共２　０５９例，并对检测结果进行分析。结果　在该院检测的２　０５９例中幽门螺杆菌ＩｇＧ抗体阳性者９７１例，阳性率为４７．１６　，男　女阳性率分别为５２．７６　和４２．４４　，５Ｏ岁前幽门螺杆菌ＩｇＧ抗体阳性率随年龄增长有所增加，５Ｏ岁后随年龄增长有所下降，其　中４１～５０岁年龄组阳性率最高，为４９．７５　，２０１１—２０１３年检测阳性率呈逐年明显下降趋势，分别为５２．２２　、５Ｏ．２６％、４８．５１　和４３．７２　。结论　通过加强宣传教育来提高公众防范意识，同时扩大检测范围，加大防治措施可以降低幽门螺杆茵感染率。　关键词：幽门螺杆菌；感染；阳性率；胶体金法