纯化工艺层析柱(XK)装填标准操作规程

修订原因与内容 执行日期 II编制I

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XXXXXXXXX有限公 司 层析柱（XK）装填标准操作规程 文件编号 文件状态 第2页共5页 |[ 01版第0次修订 | 1 *SOP文件的更改 1. 目的

1.1. 2. 范围

2. 1. 适用于XXXXXXXX有限公司的XK16、XK26、XK50层析柱。 3. 职责

3.1.

4. 设备与耗材

规范层析柱装填的标准操作流程。

分管主任、操作人员对本规程实施负责，QA质控员负责监督检查。

设备与耗材 AKTA avant 规格 / / 2L / / / 数量 1台 装柱器 烧杯 0. 4mol/L氧化钠溶液 0. 8mol/L氯化钠溶液 20%乙博溶液 5.操作程序 5. 1.

一个 3个 1L 100ml 500ml 实验准备：

5. 1. 1.估算装柱的柱体积，然后乘以压缩因子1. 1计算需要取的沉降后

的填料体积，取出填料装入烧杯中，将填料中的乙醇溶液用纯化水

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XXXXXXXXX有限公 司 层析柱（XK）装填标准操作规程 /注射用水等体积置换三次。

文件编号 文件状态 第3页共5页 |[ 01版第0次修订 | 1 5.1.2.将XK16/XK26/XK50层析柱的各部件淸洗干净，组装好后连接到 层析系统，将柱

前报警压力设置为0.45MPa，使用0. 4MPa的恒压 模式进行保压测试，30min内压降小于0.05MPa、未出现明显漏液 方可投入使用。

5. 1.3.配制好对应体积的氯化钠、乙醇溶液。 5. 2. 实验步骤：

5. 2. 1.保压测试结束后，确认层析柱下柱头膜内无气泡，若有气泡则取 岀柱头，取

下柱头膜，使用upFlou-lml/min的方式慢慢将液体填 满柱头，然后将柱头膜安上，并再次确认该柱头有无气泡。

5. 2. 2.将装柱器安装到层析柱上，调好层析柱水平，确保层析柱竖直。 5. 2. 3.计算层析柱和装柱器的总体积，按该体积向填料中加入纯化水/ 注射用水

（可以稍少一点，用润洗装填料烧杯的纯化水/注射用水 补上），使填料混旋液的体积等于层析柱和装柱器的总体积。

5. 2. 4.将填料混旋液充分混合均匀，并小心倒入到层析柱中，润洗烧杯 一并倒入层

析柱中（注意液体不能溢出）。

5. 2. 5.轻轻将装柱器的盖子旋上，为保证装柱器内的气泡残留尽可能少, 在旋紧盖

子前可以DownFlou-lml/min的方式，使液体充分填满装 柱器，然后暂停系统，旋紧盖子。

5. 2. 6.以DownFlow的方式进行恒流操作，各填料恒流的线性速度见下 表。当填料

高度在lOniin内不发生变化时，说明恒流结束，准备恒 压操作。若恒流结束后填料高度停留在装柱器而未降至层析柱时， 可以先使用0. 2VPa的恒压模式将填料压至距离层析柱玻璃顶端 2cm左右。

填料名称 Superdex200 Sephacryl 线性流速（cm/h） 90 30 ||编制| 批准

XXXXXXXXX有限公 司 文件编号 文件状态 第4页共5页 01版第0次修订 层析柱（XK）装填标准操作规程 CapioQ/DEAE Mabselect Sure 750 300

Blue Sepharose 5. 2. 7,使用软管将装柱器内的液体吸出，填料上端保留约2cm高的液体， 取

下装柱器，连接好上柱头，若柱头有气泡按5. 2.1 （此时方向为

DownFlow）的方式进行排气泡操作。

5. 2. 8.连接好柱头后，缓慢将柱头旋至液面以下，注意将柱头下的气泡 排

除，旋紧0型圈，使用0. 4MPa的压力进行恒压操作，当填料高 度在

lOmin内不发生变化时，稍微旋松0型圈，将上柱头下移到胶 而下0.5cm,并慢慢向下旋至不动时，旋紧0型圈。

5. 2. 9,使用DownFlow—Iml/min向下正冲两个柱体积，然后 upFlow—iml/min

向上反冲两个柱体积。

5. 3. 柱效测试

5. 3. 1,设置流速Iml/min,使用0. 4mol/L氯化钠溶液平衡系统及层析柱, 当电

导率稳定后（电导曲线走平至少lOmin），使用0.8mol/L氯化 钠润洗系统（柱位Bypass,流速30ml/min）,电导曲线走平后进行 上样，上样体积

＜1%柱体积，流速为Iml/min,上样结束后，使用 0.4mol/L氯化钠溶液润

洗系统（柱位Bypass,流速30ml/min）, 电导曲线走平后设置流速

Iml/min,同时执行“Injectionmark” 和“DownFlow” ，当电导峰完全洗

脱出来后（电导基线走平），结 束程序。

5.3.2.积分：在Evalution里打开柱效测试结果文件，点开“Peak Table” 勾选

“HETP”、“Asymmetry” 后，点击积分 “Integral”， 输入层析柱高

度，选中“Cond”，进行积分。对应填料的柱效合 格标准见下表： 填料名称

编制| xx I审核I xx I批准I XX

| 理论塔板数 | 对称性

XXXXXXXXX有限公 司 文件编号 文件状态 第5页共5页 01版第0次修订 层析柱（XK）装填标准操作规程 Superdex200 Sephacryl CaptoQ/DEAE Mabselect Sure >6000 >9000 >3700 >3900 0.7-13 0.7-1.3 0.8-1.8 0.8-1.8 Blue Sepharose