利用ISSR分子标记分析香蕉品种的遗传多样性

西１２０６　南农业学报　２０１０年２３卷４期　ＶｏＩ．２３　Ｎｏ．４　Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ　Ｃｈｉｎａ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｌｃｕｌｔｕｎｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　文章编号：１００１—４８２９（２０１０）０４—１２０６—０５　利用ＩＳＳＲ分子标记分析香蕉品种的遗传多样性　牟海飞　，林贵美　，邹　瑜　，李小泉　。，李朝生　，韦华芳　。，　吴代东　，张进忠　。，王趣有。，潘永杰。，陈忠良　（１．广西植物组培苗有限公司，广西南宁５３０００７；２．广西作物遗传改良生物技术重点开发实验室，广西南宁５３０００７；３．广西农　业科学院生物技术研究所，广西南宁　５３０００７；４．广西师范大学生命科学学院，广西桂林　５４１００４）　摘要：利用ＩＳＳＲ分子标记技术对威廉斯Ｂ６及其选育亲本等国内外３２个香蕉品种（系）的遗传多态性进行分析。从９８对通用　ＩＳＳＲ引物中筛选出７对多态性引物，共扩增出６４条ＤＮＡ带，其中５ｌ条为多态性带，多态性比例为７９．６９％，平均每个引物扩增的　ＤＮＡ带数为９．１２条。供试香蕉品种问的遗传相异系数范围为０．０３４５一Ｏ．７５００，平均相对遗传相异系数为０．０３０５１。聚类分析结　果表明，所有供试的３２个香蕉品种（系）可分为四个类群，其中巴引１０３、野酸蕉和花蕉（观赏）分别为一类，其余２９个品种（系）聚　为一类。　关键词：香蕉；ＩＳＳＲ分子标记；遗传多样性；聚类分析　中图分类号：Ｓ６６８．１　文献标识码：Ａ　．　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｂａｎａｎａ（Ｍｕｓａ　ｓｐｐ．）　Ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ＩＳＳＲ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｍａｒｋｅｒ　ａｎｇ　・３ＭＯＵ　Ｈａｌ—ｆｅｉ　・　ｔ　，ＬＩＮ　Ｇｕｉ．ｍｅｉ　・３ＺＨＯＵ　Ｙｕ　・　，ＬＩ　Ｘｉａｏ—ｑｕａｒｔ。，　ＬＩ　Ｃｈａｏ—ｓｈｅｎｇ　・３ＷＥＩ　Ｈｕｎ—ｆ，，，，　ＷＵ　Ｄａｉ．ｄｏｎｇ。一，ＺＨＡＮＧ　Ｊｉｎ—ｚｈｏｎｇ’一，ＷＡＮＧ　Ｑｕ．ｙｏｕ　，ＰＡＮ　Ｙｏｎｇ－ｊｉｅ　，ＣＨＥＮ　Ｚｈｏｎｇ—ｌｉａｎｇ２，　（１．Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｐｌａｎｔ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ　Ｌｉｍｉｔｅｄ　Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｎａｎｎｉｎｇ，５３０００７，Ｃｈｉｎａ；２．Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｃｒｏｐ　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ　ａｎｄ　Ｂｉｏｔｅｅｈｎｏｌｏｇｙ　Ｋｅｙ　Ｌａｂ，Ｇｕａｎｇ）ｄ　Ｎａｎｎｉｎｇ　５３０００７，Ｃｈｉｎａ；３　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｉｔｔｕｔｅ．Ｇｕａｎ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉ・　ｅｎｅｅｓ。Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｎａｎｎｉｎｇ　５３０００７，Ｃｈｉｎａ；４．Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ＣｏＨｅｇｅ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，￣ａｎｇｘｉ　Ｇｕｉｌｉｎ　５４１００４，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＩＳＳＲ　ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ｏｆ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　３２　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ｏｆ　ｂａｎａｎａ（Ｍｕｓａ　ｓｐｐ．）Ｗａｓ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ．Ｔｅｓｔ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｉｎｃｌｕｄｅｄ　Ｗｉｌｌｉａｍｓ　１３６　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｐａｒｅｎｔ　７　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ｓｃｒｅｅｎｅｄ　ｆｒｏｍ　９８　ｕｎｉｖｅｒｓａｌ　ｐｒｉｍｅｒｓ，ａｎｄ　８　ｔｏｔａｌ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｂａｎｄｓ　ｗｅｒｏ　ｍｐｌａｉｉｆｅｄ，ａｍｏｎｇ　ｗｈｉｃｈ　５１．（７９．６９％）　ｗｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｅ．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｂａｎｄｓ　ｍｐｌａｉｉｆｅｄ　ｂｙ　ｅａｃｈ　ｐｒｉｍｅｒ　Ｗａｓ　９．１２．Ｔｈｅ　ｄｉｓｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ　ｃｏｅｆｉｃｉｆｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　３２　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ｏｆ　ｂａｎａｎａ（Ｍｕｓａ　ｓｐｐ．）ＷａＳ　ｆｒｏｍ　０．０３４５　ｔｏ　０．７５００　Ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　Ｎｅｉ　ａｎｄ　ｈｉ（１９１３）ｓｍｆｉｓｉｆｅ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ＵＰＧＭＡ　ｃｌｕｓｔｅｒ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ６４　ＤＮＡ　ｂａｎｄｓ　ａｍｐｌｉｉｅｄ　ｂｙ　ｆ７　ｐｒｉｍｅ￣ａ　ＤＮＡ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ　Ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｂａｎａｎａ；ＩＳＳＲ；Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ；Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ　ａｎａｌｙｓｉｓ　香蕉属于芭蕉科（Ｍｕｓａｃｅａｅ）芭蕉属（Ｍｕｓａ），起　源于东南亚地区¨　】。香蕉的主要栽培品种是尖苞　叶蕉（Ｍｕｓａ　ａｃｕｍｉｎａｔａ　Ｃｏｌｌａ，记为Ａ基因组）和长梗　蕉（Ｍｕｓｓ　ｂａｌｂｉｓｉａｎａ　Ｃｏｌｌａ，记为Ｂ基因组）这２个原　始野生蕉种内或种问杂交或变异进化而成的　。　栽培香蕉品种主要是三倍体，还有少量的二倍体和　四倍体　Ｊ。我国目前香蕉分类仍多采用Ｓｉｍｍｏｎｄｓ　和Ｓｈｅｐｈｅｒｄ（１９９５）的分类方法，建立的香蕉表型分　收稿日期：２００９—１２—０８　基金项目：国家科技支撑计财课题（２００ＳＢＡＤ￣８Ｂ０２，２１３０８ＢＡＤＢＳＢＯ１）；　类系统比较混乱，同时，由于香蕉栽培品种经过长期　的引种交流和无性繁殖，导致来源不详、亲缘关系不　明确，同种异名及同名异种现象十分普遍。这不但　阻碍了香蕉种质资源的合理利用，也影响香蕉的品　种改良与育种，进而影响其应用与推广。由于香蕉　品种的基因组型和染色体倍性比较复杂，仅利用形　态特征对其进行分类和鉴定具有一定的局限性，Ｉｓ—　ＳＲ分子标记是针对某高度可变ＤＮＡ区域进行分析　的技术，扩增产物的多态性相对较高　¨。ＩＳＳＲ分　析使用的引物较长，反应的退火温度较高，因此分析　国家香蕉产业技术体系玉林综合试验站；广西农科院科技发展　基金项目（１９９９０３０）　作者简介：牟海飞（１９６８一），男，广西玉林人，农艺师，硕士研究　生，主要从事热带亚热带果树生物技术、品种选育及栽培研究工　作。　结果的稳定性和重复性比较高　。本研究应用Ｉｓ－　ＳＲ分子标记，对广西植物组培苗有限公司引进的威　廉斯ＧＢ６－３、选育的威廉斯Ｂ６等３２份香蕉品种　４期　牟海飞等：利用ＩＳＳＲ分子标记分析香蕉品种的遗传多样性　●　：　４　６　，　９　ｍ　ｎ　Ｈ　１２０７　＂　（系）进行遗传多样性分析　ｍ　为香蕉育种和遗传　，化试剂均为国产分析纯；ＩＳＳＲ引物：ＩＳＳＲ随机引物　由上海生工生物工程技术服务公司合成。　１．２试验时间及地点　改良提供理论依据。　１材料与方法　１．１试验材料　供试材料：广西植物组培苗有限公司提供的３２　份香蕉品种（系）（表１）；生化试剂：Ｔａｑ酶和Ｍａｒｋ一　于２００９年６月２２日取样，选取田间生长健壮、　无病虫危害植株的幼嫩叶片，于一８０　ｃＩ＝保存供ＤＮＡ　提取用。整个试验在广西作物遗传改良生物技术重　点开放实验室完成ｏ　ｅｒ购自大连宝生物工程有限公司，ｄＮＴＰｓ、琼脂糖和　ＳＤＳ购自上海生工生物工程技术服务公司，其他生　１．３试验方法　１．３．１基因组ＤＮＡ的提取香蕉基因组ＤＮＡ的　表１　３２份供试香蕉品种（系）　Ｔｈｂ】ｅ　１　３２　ｔｅｓｔｅｄ　ｂａｎａｎ＆ｖａｒｉｅｔｉｅｓ（１ｉｎｅｓ）　序号　Ｎｏ．　品种（系）　Ｖａｎｅｔｙ（１ｉｎｅ）　基因组类型　Ｇｅｎｏｍｅ　ｔｙｐｅ　Ｍ．ＡＡＡ　ｇｒｏｕｐ　品种（系）来源　Ｏｎ＃ｎ　威廉斯Ｉ］６　Ｗｅｉｌｉａｎｓｉ　Ｂ６　威廉斯ＧＢ６－３　Ｗｅｉｌｉａｎｓｉ　ＧＢ６－３　红巴西Ｈｏｎｇｂａｘｉ　巴西Ｂａｘｉ　广西植物组培苗有限公司一威廉斯ＧＢ６－３变异株　澳大利亚　广西植物组培苗有限公司一巴西品种变异株　巴西　Ｍ．ＡＡＡ　ｇｒｏｕｐ　Ｍ．从Ａ　ｇｒｏｕｐ　Ｍ．ＡＡＡ　ｇｒｏｕｐ　Ｍ．ＡＡＡ　ｇｒｏｕｐ　Ｍ．从Ａ　ｇｒｏｕｐ　Ｍ．Ａ从ｇｒｏｕｐ　长果威廉斯Ｂ６・１　Ｃｈａｎｇｇｕｏｗｅｉｌｉａｎｓｉ　Ｂ６—１　那龙矮蕉Ｎａｌｏｎｇａｉｊｉａｏ　大丰１号Ｄａｆｅｎｇ　１　广西植物组堵苗有限公司一威廉斯Ｂ６变异株　广西那龙　广东农科院果树研究所　花蕉（观赏）Ｈｕａｊｉａｏ　Ｂｅｒａｎｇａｎ　云南西双版纳　ＡＡＡ　ｇｒｏｕｐ　Ｍ．ＡＢＢ　ｇｒｏｕｐ　马来西亚　广西隆安　云南西双版纳　广东农科院果树研究所　隆安粉蕉Ｌｏｎｇａｎ　ｄｗａｒｆ　ｂａＩｌａＩｌａ　千层蕉Ｑｉｔｍｃｅｎｇｊｉａｏ　广粉１号Ｇｕａｎｇｆｅｎ　１　Ｍ．ＡＢＢ　ｇｒｏｕｐ　Ｍ．ＡＢＢ　ｇｒｏｕｐ　抗枯５号Ｋ￣ｇｋｕ　５　野酸蕉Ｙｅｓｕａｎｊｉａｏ　Ｍ．ＡＡＡ　ｇｒｏｕｐ　Ｍ．ＡＢＢ　ｇｒｏｕｐ　Ｍ．ＡＢＢ　ｇｒｏｕｐ　Ｍ．ＡＡＡ　ｇｒｏｕｐ　Ｍ．Ａ从ｇｒｏｕｐ　广东农科院果树研究所　云南西双版纳　巴西　巴西　巴西　巴粉１０１　Ｂａｆｅｎ１０１　巴引１０１　Ｂａｙｉｎ　１０１　巴引１０２　Ｂ　ｎ　１０２　巴引１０３　ａａｙｌｎ１０３　Ｍ．从Ａ　ｇｒｏｕｐ　Ｍ．ＡＢＢ　ｇｒｏｕｐ　Ｍ．ＡＡＢ　ｇｒｏｕｐ　Ｍ．ＡＡＢ　ｇｒｏｕｐ　巴西　巴西　巴西　巴粉１０２　Ｂａｆｅｎ　１０２　巴龙芽蕉４０１　Ｂａｌｏｎｇｙａｊｉａｏ　４０１　牛角蕉Ｐｉｓａｎｇ　ｔａｎｄｕｋ　巴引４０１　Ｂａｙｉｎ　４０１　马来西亚　巴西　Ｍ．ＡＡＡ　ｇｒｏｕｐ　Ｍ．ＡＡＡ　ｇｒｏｕｐ　Ｍ．ＡＢＢ　ｇｒｏｕｐ　Ｍ．ＡＡＡ　ｇｒｏｕｐ　矮脚顿地雷Ａｉｊｉａｏｄｕｎｄｉｌｅｉ　巴大蕉一１０１　Ｂａｄａｊｉａｏ－１０１　巴引４０２　Ｂ　ｎ　４０２　抗枯ｌ号Ｋａｒｌｇｋｕ　ｌ　广东ｌ号Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ１　红香蕉Ｒｅｄ　ｂａｎａｎａ　皇帝蕉Ｈｕａｎ￣ｌｉｊｉａｏ　广东湛江　巴西　巴西　Ｍ．Ａ从ｇｒｏｕｐ　广东农科院果树研究所　广东农科院果树研究所　马来西亚　海南澄迈　Ｍ．从Ａ　ｇｒｏｕｐ　Ｍ．从Ａ　ｇｒｏｕｐ　Ｍ．ＡＡ　ｇｒｏｕｐ　Ｍ．Ａ从ｇｒｏｕｐ　长果威廉斯１ｔ６－２　Ｃｈａｎｇｇｕｏｗｅｉｌｉａｎｓｉ　１１６－２　玉林黄肉大蕉Ｙｕｌｉｎｈｕａｎｇｒｏｕｄａｊｉａｏ　玉林白肉大蕉Ｙｕｌｉｎｂａｉｒｏｕｄａｊｉａｏ　广西植物组培苗有限公司一威廉斯Ｂ６变异株　广西玉林　广西玉林　Ｍ．ＡＢＢ　ｇｒｏｕｐ　Ｍ．ＡＢＢ　ｇｒｏｕｐ　１２０８　西南农业学报　２３卷　１．３．３数据统计与分析相同迁移位上有清晰的　扩增带记为１、无带记为０，得到的ＩＳＳＲ数据矩阵用　ＤＰＳ　ｖ８．０１软件进一步进行分析。　２结果与分析　２．１香蕉基因组ＤＮＡ的检测　图１　香蕉基因组ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳检测　Ｆｉｇ．１　Ａｇａｒｏｓｅ　ｇｅｌ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　ｏｆ　Ｍｕｓａ　ｓｐｐ．ｇｅｎｏｍｉｅ　ＤＮＡ　用改良ＳＤＳ法提取得到的总ＤＮＡ样品的Ａ拗／　Ａ　鼬值为１．７６～１．８７，琼脂糖凝胶电泳检测的ＤＮＡ　为一条清晰完整的带，没有明显的拖尾，也没有　ＲＮＡ带（图１），说明提取的ＤＮＡ片段大小较一致，　纯度较高，可直接用于ＩＳＳＲ标记分析。　２．２　ＩＳＳＲ引物筛选及香蕉遗传多样性　从９８对ＩＳＳＲ引物中筛选出能扩增出清晰、稳　定性和重复性好且相对条数较多带纹的７对引物　提取采用ＳＤＳ方法　川，并稍作改动。取适量嫩叶　加入液氮快速研磨成粉末，装入１．５　ｍＬ离心管，加　入５００　ｌ　ＤＮＡ抽提缓冲液，摇匀，６５℃水浴４５　ｍｉｎ。加入２００　ｌ　５　Ｍ　ＫＡｃ（ｐＨ　５．２）充分混匀，冰浴　１５　ｍｉｎ。４℃下１０　０００　ｒ／ｍｉｎ离心１５　ｍｉｎ。上清加　入等体积酚／氯仿（１：１）、氯仿各抽提一次，１２　０００　ｒ／ｍｉｎ离心８　ｍｉｎ。上清加人１／１０体积３　Ｍ　ＮａＡｃ　（ｐＨ４．８）和２倍体积无水乙醇沉淀ＤＮＡ，于一２０℃　放置３０　ｍｉｎ。４℃下１０　０００　ｒ／ｒａｉｎ离心１０　ｒａｉｎ，留取　沉淀物，用７０％乙醇漂洗１～２次，晾干后加入适量　ＴＥ溶解。加入ＲＮａｓｅＡ至终浓度５Ｏ～７０　ｇ／ｍＬ，并　（表２）。７对引物共检测到６４条ＤＮＡ带，其中５１　条为多态带，多态性比例为７９．６９％，每条引物产生　的带数在６～１１条之间。以上数据表明香蕉品种　（系）在分子水平上的遗传多样性比较丰富。其中　引物８４７对香蕉各品种基因组ＤＮＡ的扩增结果见　置于３７℃水浴３０　ｍｉｎ，用０．８％的琼脂糖凝胶检　图２。从电泳图上可以看出，香蕉３２个品种（系）的　ＩＳＳＲ扩增产物电泳图的条带清晰，多态性较好，显　示出较好的遗传多样性。　２．３香蕉品种的聚类分析　测，４℃保存备用。　１．３．２　ＩＳＳＲ引物筛选从３２个香蕉品种（系）中　选取６个ＤＮＡ模板，对９８个通用ＩＳＳＲ引物进行筛　选。２Ｏ　ｌ反应体系含２　ｌ　１０×ＰＣＲ　Ｂｕｆｆｅｒ、０．２　ｍｍｏｌ／Ｌ　ｄＮＴＰ、０．５　ｍｏｌ／，Ｌ　Ｐｒｉｍｅｒ、３　ｒｉｇ／　ｌ　ＤＮＡ模　板和０．０５　Ｕ／　Ｉ　Ｔａｑ酶。反应条件为９４℃５　ｍｉｎ，　根据扩增结果建立ＩＳＳＲ表型数据矩阵后，采用　ＤＰＳ　ｖ８．０１版软件分析，得到香蕉３２个品种（系）间　的聚类分析树状图（图３）。从图上可以看出，在遗　然后９４　ｑＣ　４０　ｓ，Ｔｍ值退火４０　Ｓ，７２　９０　ｓ，４０个循　传距离为０．００—０．１６之间，威廉斯Ｂ６、威廉斯ＧＢ６－　环，最后７２℃７　ｒａｉｎ，４℃保存。ＰＣＲ扩增产物用　３、抗枯５号、矮脚顿地雷、抗枯１号、广东１号、长果　２．０％的琼脂糖凝胶电泳检测，凝胶成像系统摄相　威廉斯１３６－２、红巴西、那龙矮蕉、巴引１０１、长果威廉　并保存图像，选出扩增条带清晰、反应稳定、信号强、　斯Ｂ６—１、大丰１号和巴西构成一个聚类群，这ｌ３个　背景清晰的引物用于３２份香蕉品种ＤＮＡ样品的　品种（系）的基因组类型均为Ｍ．ＡＡＡ　ｇｒｏｕｐ，这个类　ＩＳＳＲ．ＰＣＲ反应。　群内的香蕉品种（系）多数为生产中的主栽品种或　表２选用的７对ＩＳＳＲ引物及其扩增结果统计　Ｔａｂｌｅ　２　Ｓｅｖｅｎ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ＩＳＳＲ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ａｍｐｌｉｉｅｆｄ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ｂａｎｄｓ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ｐｒｉｍｅｒ　４期　牟海飞等：利用１ＳＳＲ分子标记分析香蕉品种的遗传多样性　１２０９　２０００ｂｐ　１０００ｂｐ　７５０ｂｐ　５００ｂｐ　２５０ｂｐ　１００ｂｐ　图２引物８４７对３２个香蕉品种（系）的扩增产物电泳图　Ｆｉｇ．２　ＰＣＲ　ａｍｐｌｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｐｒｉｍｅｒ　８４７　ｆｏｒ　３２　ｂａｎａｎａ　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　农家零星种植较多的品种。这个类群的品种（系）　与皇帝蕉、巴大蕉一１０１、巴粉１０１、巴引４０１、巴粉１０２　等品种（系）亲缘关系很近，遗传距离大多在０．０８　等【】　采用ＩＳＳＲ分子标记技术对源自中国７个省份　的３８份瓠瓜种质进行遗传多样性分析，ｌ２个ＩＳＳＲ　引物共扩增出９６条多态性带，多态性比例为８３．５　以内。在遗传距离为０．２６处，所有供试的３２个香　蕉品种（系）可分为四个类群，其中巴引１０３、野酸蕉　和花蕉（观赏）分别为一类，其余２９个品种（系）聚　为一类。从３２个香蕉品种（系）的ＩＳＳＲ聚类分析　树状图可以明显看出，野酸蕉和花蕉（观赏）与主栽　品种区亲缘关系较远，遗传距离较大；抗枯１号和广　东１号两品种之间的遗传相异系数最小，为０．　０３４５。运用Ｎｅｉ＆Ｌｉ（１９１３）相异系数方法进行计算，　供试香蕉品种间的遗传相异系数范围为０．０３４５一　％，聚类分析将供试的３８份种质分为４个类群８　组，分类结果与瓠瓜的农艺性状分类和地理分布有　一定的相关性；黄文霞等¨　应用１１个ＩＳＳＲ对国内　外ｌ７个蓖麻材料的亲缘关系进行了分析，其多态性　为６３．３３％，ｌ７份蓖麻材料的遗传相似系数在０．５２　一０．９７之问，且明显分为２个大类群；黄国弟等¨　利用ＩＳＳＲ标记对２２份桂热芒系列品种（系）进行　分析，聚类结果较好的区分开了桂热芒系列品种　（系）的亲缘关系。本试验从９８条ＩＳＳＲ引物中筛　０．７５００，平均相对遗传相异系数为０．０３０５１。　３讨论　选出７条多态性较高、稳定性较好的引物，并建立聚　类分析树状图，聚类结果与香蕉划分为香牙蕉（香　蕉）、大蕉、粉蕉和龙牙蕉４个类型的形态学分类结　果¨　基本一致，同时也能很好地把野生香蕉与栽培　目前，关于利用ＩＳＳＲ技术进行遗传多样性分　析、亲缘关系鉴定等方面的研究报道较多，高山　香蕉明显地区分开来，但仍有部分香蕉品种的聚类　与表型分类有出入，可能由于引种、育种过程中发生　基因组ＤＮＡ变异，另外，ＩＳＳＲ分子标记的局限性及　实验误差也可能是其中的重要原因。　此外，试验中的３２个香蕉品种（系）的基因组　类型共包括ＡＡＡ、ＡＡ、ＡＡＢ和ＡＢＢ　４种，对应于聚　类分析树状图，可看出基因型为ＡＡＡ的香蕉品种散　布于整个树状图，由此可能揭示基因型为ＡＡＡ的香　蕉品种之间也存在较大的遗传差异。　威廉斯Ｂ６是广西植物组培苗有限公司于１９９２　—２００５年间，从澳大利亚引进的香蕉试管种质材料　威廉斯ＧＢ６。３中选育的组培苗变异株，长果威廉斯　Ｂ６．１和长果威廉斯Ｂ６－２均为威廉斯Ｂ６的组培变　异株，其中威廉斯Ｂ６与威廉斯ＧＢ６－３的遗传相异　系数为０．０８４７，长果威廉斯Ｂ６—１、长果威廉斯Ｂ６－２　Ｏ。ｏ０　０．Ｏ８　Ｏ．１５　０。２３　Ｏ．３１　Ｏ‘３９　与威廉斯Ｂ６的遗传相异系数分别为０．１３３３、０．　２０００，长果威廉斯Ｂ６—１与威廉斯Ｂ６－２的遗传相异　系数为０．１４２９，它们因变异而产生遗传距离，亲缘　关系很近。在ＩＳＳＲ分析的基础上，结合威廉斯Ｂ６、　长果威廉斯Ｂ６—１、长果威廉斯Ｂ６－２及威廉斯ＧＢ６—３　图３用７对ＩＳＳＲ引物对３２份香蕉品种（系）聚类分析　的树状图　Ｆｉｇ．３　Ｄｃｎｄｒｏｇｒａｍ　ｏｆ　３２　ｂａｎａｎａ　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ（１ｉｎｅｓ）ｂａｓｅｄ　Ｏｎ　ＩＳＳＲ　ｍａｋｅｒ　ａｎａｌｙｓｉｓ　１２ｌＯ　西南农业学报　２３卷　的农艺性状特点，可以进一步证明威廉斯Ｂ６、长果　威廉斯Ｂ６・ｌ、长果威廉斯Ｂ６－２是在威廉斯ＧＢ６－３　基础上育成的新品种（系）。　参考文献：　［１］雷武逵．香蕉产业升级配套技术及对策研究［Ｊ］．广西农业科　学，２００８，３９（３）：３９７—４Ｏ０．　ｔｏｖｉｖｉｐａｒｏｕｓｍａｎｇｒｏｖｅＡｅｇｉｃｅｒａｓ　ｃｏｒｎｉｅｕｌａｔｕｍ（Ｍｙｒｔｉｎａｃｅａｅ）ｕｓｉｎｇ　ａｌ－　ｌｏｚｙｍｅ　ａｎｄ　ｉｎｔｅｒ　ｓｉｍｐｌｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅｐｅａｔ（ＩＳＳＲ）ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃ－　ｕｌａｒ　Ｅｃｏｌｏｇｙ，１９９９，８（１２）：２０６１—２０６９．　［９］刘希兰，陈传华，刘广林，等．广西和广东优质常规稻的ＳＳＲ遗　传多样性分析［Ｊ］．广西农业科学，２０１０，４１（４）：３０３—３０６　［１０］黄开健，黄爱花，吴永升，等．不同遗传背景热带、亚热带玉米白　交系配合力和聚类分析［Ｊ］．广西农业科学，２００９，４Ｏ（４）：３２７—　３３１．　［２］尧金燕，彭宏祥，秦献泉，等．广西蕉类种质资源概况及其育种　创新利用前景［Ｊ］．广西农业科学，２００８，３９（４）：５２７—５２９．　［３］秦献泉，彭宏祥，曹辉庆．香蕉种质资源研究与利用进展［Ｊ】．广　西农学报，２００７，２２（６）：５３—５６．　［１１］Ｃｌａｒｋ　Ｍ　Ｓ．Ｐｌａｎｔ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｍａｎｕａｌ［Ｍ］．　Ｂｅｒｌｉｎ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ—Ｖｅｒｌａｇ　Ｔｅｌｏｓ，１９９７．　［１２］高山，许端详，林碧英，等．３８份瓠瓜种质资源遗传多样性的　［４］Ｓｉｍｍｏｎｄｓ　Ｎ　Ｗ．Ｔｈｅ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂａｎａｎａｓ．Ｔｒｏｐｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｓｅ－　ｒｉｅｓ［Ｍ］．Ｌｏｎｄｏｎ：Ｌｏｎｇｍａｎｓ。１９６２．　［５］王绪，邓俭英，方锋学．ＩＳＳＲ分子标记技术及其在园艺作物　中的应用［Ｊ］．广西农业科学，２００７，３８（４）：３７１—３７４．　［６］宣继萍，章镇，房经贵，等．苹果品种ＩＳＳＲ指纹图谱构建［Ｊ］．　果树学报，２００２，１９６：４２１—４２３．　［７］杨耀迥，张述宽，滕辉升，等．应用分子标记辅助选择甜糯双隐基　因型玉米种质［Ｊ］．广西农业科学，２０１０，４１（１）：ｌ一３．　［８］ｃｅＸ　Ｊ，ＳｕｎＭ．Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆａ　ｃｒｙｐ．　ＩＳＳＲ分析［Ｊ］．植物遗传资源学报，２００７，８（４）：３９６—４ＯＯ．　［１３］黄文霞，何觉民，朱宏波．蓖麻种质资源遗传多样性的ＩＳＳＲ分　析［Ｊ］．西北农业学报，２００８，１７（１）：１８２—１８４．　［１４］黄国弟，罗聪，何新华，等．桂热芒系列品种（系）的亲缘关系　分析［Ｊ］．热带亚热带植物学报，２００８，１６（６）：５２１—５２５．　［１５］易干军，于晓英，霍合强，等．粉蕉、大蕉和龙牙蕉的ＡＦＬＰ分类　研究［Ｊ］．园艺学报，２００２，２９（５）：４１３—４１７．　（责任编辑温国采钦洁）