幽门螺杆菌感染对胃癌组织中Fas 基因蛋白表达的影响

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幽门螺杆菌感染对胃癌组织中Fas基因蛋白表达的影响

王要军,权启镇,孙自勤,张　霞,江学良,尹格平

(济南军区总医院,山东济南250031)

摘要:目的　研究幽门螺杆菌(Hp)感染对胃癌组织细胞凋亡的影响,探讨Hp在胃癌发生、发展中的作用。方法　用Warrthin2Starry染色法检测胃癌组织中Hp,以流式细胞学方法测定胃癌组织Fas基因蛋白的表达。结果　正常胃组织中Fas表达阳性率为12.05%±3.59%,胃癌组织中Fas表达明显低于正常胃粘膜,Hp阳性癌组织低于阴性癌组织;Fas基因表达不与肿瘤的分化程度有关。结论　Hp在胃癌的发生发展过程中对细胞的增殖影响较小,主要通过减弱细胞凋亡而起作用。关键词:胃肿瘤;凋亡;Fas基因;幽门螺杆菌

中图分类号:R377　　文献标识码:A　　文章编号:100524529(2001)0620415202

ExpressionofFasGeneProteinAffectedbyHelicobacterpylori

inHumanGastricCancerTissue

WANGYao2jun,QUANQi2zhen,SUNZi2qin,ZHANGXia,JIANGXue2liang,YINGe2ping(DeptofGastroenterology,GeneralHospitalofJinanMilitaryRegion,Jinan250031,China)

Abstract:OBJECTIVEToexploretheroleofHelicobacterpylori(Hp)inpathogenesisofgastriccancer,westudiedtheexpressionofFasgeneproteininhumangastriccanceraffectedbyHp.METHODSHpingastrictis2suewasdetectedbyusingWarrthin2Starrymethod,andFasgeneproteinexpressioninthetissuewasmeasuredwithflowcytometry.RESULTSExpressionrateofFasinnormalcontrolgastricmucosawas12.05%±3.59%.Theexpressionrateincancertissuewaslowerthaninnormalcontrolgroup.AndtheexpressionrateinHpposi2tivecancertissuewaslowerthaninHpnegativeone.CONCLUSIONSHpcandecreasetheapoptosisincancertissue,bywhichHpplaysanimportantroleinpathogenesisofgastriccancer.Keywords:Gastricneoplasm;Apoptosis;Fasgene;Helicobacterpylori

　　幽门螺杆菌(Hp)感染途径为经口感染,也可经胃镜检查、洗胃、插胃管等操作造成医源性感染。Hp感染与胃癌有着极其密切的关系,但Hp是否直接致癌以及与胃癌的确切关系尚有争论1,2,细菌凋亡的异常参与了许多肿瘤的发生、发展过程3,本文试图观察Hp对胃癌组织中细胞凋亡的影响,探讨Hp在胃癌发生、发展的作用。1　材料与方法

1.1　材料　35例胃癌组织为我院胃镜活检标本,

1.2　方法

1.2.1　Hp检测方法　活检标本经10%中性甲醛

除常规送病理检查外,每例取癌组织两块和癌旁组织两块,进行Hp检测。取癌组织3块进行Fas基因蛋白检测。另选11例健康查体者胃粘膜作为正常对照。FITC标记的鼠抗人Fas单克隆抗体为Im2munotech产品,流式细胞仪FACScan为美国BD公司产品。

收稿日期:2000206207;　修订日期:2001204223

固定、石蜡包埋、常规石蜡切片,用Warrthin2Starry染色检测Hp。

1.2.2　Fas基因表达检测方法　制备单细胞悬液:取活检组织置100目及260目铜󰃗尼龙网上,以镊子夹持摩擦,同时PBS洗下搓下的细胞,放入试管内1500Χ󰃗min离心5min,去上清PBS洗两次,备用;免疫反应:调整细胞数为109󰃗ml,分2管,每管加20Λl细胞悬液,其中一管加鼠抗人Fas2FITC标记抗体,另一管加羊抗鼠IgG12FITC作阴性对照,室温避光30min,上机待测;流式细胞仪检测:上机前用标准荧光微球调整仪器,使变异系数在2.0%以内,上机后收集1000个细胞,荧光强度以对数放大,光散射数据存软盘。测试完成后在Macintosh650型计算机上用CellQuestPlot软件(BD公司产)分析数据,由Hp1200c󰃗ps打印结果。Fas基因

θ±s表示,检验用F检验。表达值用x

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.11No.62001ChinJNosocomiolVol

2　结　果

35例胃癌组织中,Hp(-)18例,Hp(+)17例,

中、高分化18例,低分化17例,Hp(-)高分化10

例,低分化8例,Hp(+)高分化8例,低分化9例。正常胃粘膜组织Hp均阴性。不同组织中Fas表达结果见表1。

θ±s,%)表1　不同组织中Fas表达结果(x

组　织

　　正常

　　Hp(-)癌　　Hp(+)癌　　中高分化癌　　低分化癌

　　Hp(-)高分化　　Hp(-)低分化　　Hp(+)高分化　　Hp(+)低分化

n

大量临床流行病学资料显示,Hp感染与胃癌的发生密切相关,胃癌高发病率的日本、哥伦比亚、苏格兰等国家和地区Hp感染率亦高,美国、新西兰等低胃癌发病率国家Hp感染率亦低。我国上海农村人群与城市人群的调查资料也显示,Hp感染率与胃癌发病率呈正比,但也有相反的流行病学资料5。近年来很多学者致力于寻示Hp致癌的根据,以期最终确定Hp为胃癌可能的病因或与其他因素作为共同病因。Hp是否致癌也是目前争论的焦点6,7。本文结果显示各种胃癌组织中Fas基因表达均低于正常组织,Hp阳性者低于Hp阴性者。提示胃癌组织中细胞凋亡减弱,而Hp感染能导致Fas基因表达减弱,致使凋亡减弱更加明显。这也间接提示Hp不是直接致癌因素(因为无Hp感染者凋亡亦减弱),而可能是促癌因素。另外Fas基因表达也和细胞分化程度有关。我们以前的研究结果证实Hp不影响胃粘膜细胞的增殖2,综合分析我们认为Hp可能只使细胞的凋亡减弱而不影响细胞的增殖,通过此种机制促进胃癌的发生。参考文献:

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Fas12.06±3.598.25±3.305.42±2.718.00±3.405.67±2.858.83±3.757.52±2.716.97±2.784.04±1.84

111817181710889

　　与正常组比较,除Hp(-)高分化组外,其余各组Fas基因表达均低于正常组(P<0.01),Hp阳性癌低于阴性组(P<0.01),高、中分化组与低分化组相差显著(P<0.05)。Hp(-)者中高分化与低分化者无显著差异。Hp(+)者中高分化与低分化者相差显著(P<0.05)。3　讨　论

新

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细胞凋亡又称为细胞程序性死亡,是一种生理性细胞自杀现象,其生理功能在于维持细胞正常数量在组织和器官中的生长与死亡之间的动态平衡。凋亡与细胞增殖是保持肌体相对稳定的对立统一体,它们共同决定组织器官的增生与退化。细胞基因调控异常,使细胞过度增殖或凋亡减弱是肿瘤的重要发生机制。Fas基因蛋白是新发现的一种发出凋亡信息的细胞表面蛋白,它位于人类第10号染色体上臂,含有235个氨基酸,Fas基因发生突变时可引起人类的各种疾病包括恶性肿瘤。有人认为Fas基因是一种抑癌基因4。

3

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