江苏水稻品种稻瘟病主效抗性基因鉴定及应用评价

福建农业学报３０（５）：４５２～４５８，２０１５　Ｆｕｊｉａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　文章编号：１００８—０３８４（２０１５）０５—４５２—０７　刘辉，孟德龙，查日扬，等．江苏水稻品种稻瘟病主效抗性基因鉴定及应用评价口］．福建农业学报，２０１５，３０（５）：４５２—４５８・　ＬＩＵ　Ｈ．ＭＥＮＧＤ－Ｌ。ＺＨＡＲ—Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄＥｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｎＢｌａｓｔＲｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｏｆＲｉｃｅＶａｒｉｅｔｉｅｓｉｎ　Ｊｉａｎｇｓｕ　ＥＪ］．ＦｕｊｉａｎＪｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．２０１５，３０（５）：４５２　４５８．　江苏水稻品种稻瘟病主效抗性基因鉴定及应用评价　刘　辉　～，孟德龙　，查日扬。，徐大勇卜　（１．江苏省连云港市农业科学院，江苏连云港２２２０００；２．扬州大学农学院，江苏扬州　２２５００９；　３．江苏省连云港市黄淮农作物育种研究所，江苏　连云港　２２２０００）　摘要：以２８个抗稻瘟病单基因系和７４０个水稻品种为材料，在江苏省连云港市的水稻种植区进行稻瘟病抗性的田　间鉴定。结果表明，２８个单基因系中藤板５号（Ｐｉｉ）、砦１号（Ｐｉｚ￣）、Ｆ－８０—１（Ｐｉｋ）、Ｆ－１２４—１（Ｐｉｔａ）、Ｆ－９８—１（Ｐｉｋｍ）、Ｆ－１２８—　１（Ｐｉｔａ。）、Ｃ１０１１　ＡＣＣ［Ｐｉｉ（ｔ）］、ｃ１Ｏ１Ａ５１［　２（ｆ）］和ｃ１Ｏ４ＰＫＴ［　３（￡）］等表现较高的抗性，供试材料中高抗、抗、中抗、　中感、感和高感的品种数分别是９７、２３０、２００、９３、４８和５５个。从中选出Ｐｉｉ、Ｐｉｋｈ、Ｐｉｌ、Ｐｉ２、Ｐｉｔａ、Ｐｉｋ、Ｐｉｋｍ、Ｐｉｋｐ　和Ｐｉｂ，并增加了广谱高抗基因Ｐｉ９，对其中的１９５个高抗、高感和重要品种进行抗性基因功能标记分析，结果表明，含　有Ｐｉｉ、Ｐｉｋｈ、Ｐｉｔａ、Ｐｉｂ、Ｐｉ２和Ｐｉｋ的品种数分别有２８、４Ｏ、５２、１１０、１１和２个，未检测到含有Ｐｉｌ、Ｐｉｋｍ、Ｐｉｋｐ和　Ｐｉ９的品种。除Ｐｉｂ外，其他３个检测到的基因基本都存在于抗性或高抗品种中。　关键词：水稻；田间鉴定：单基因系；Ｐｉｉｉ／Ｐｉｋｈ／Ｐｉｌ／Ｐｉ２／Ｐｉｔａ／Ｐｉｋ／Ｐｉｋｍ／Ｐｉｋｐ／Ｐｉｂ／Ｐｉ９；稻瘟病　中图分类号：Ｓ　５１１　文献标识码：Ａ　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｎ　Ｂｌａｓｔ　Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｏｆ　Ｒｉｃｅ　Ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ｉｎ　Ｊｉａｎｇｓｕ　ＬＩＵ　Ｈｕｉ　～，ＭＥＮＧ　Ｄｅ—ｌｏｎｇ　。ＺＨＡ　Ｒｉ—ｙａｎｇ。。ＸＵ　Ｄａ—ｙｏｎｇ　（１．ＬｉａｎｙｕｎｇａｎｇＡｃａｄｅｍｙ　ｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌｉａｎｙｕｎｇａｎｇ，Ｊｉａｎｇｓｕ　２２２０００，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｙａｎｇｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ　２２５００９，Ｃｈｉｎａ；　３．Ｈｕａｎｇｈｕａｉ　Ｃｒｏｐ　Ｂｒｅｅｄｉｎｇ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｌｉａｎｙｕｎｇａｎｇ，Ｊｉａｎｇｓｕ　２２２０００，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｗｅｎｔｙ－ｅｉｇｈｔ　ｍｏｎｏｇｅｎｉｃ　ｌｉｎｅｓ　ａｎｄ　７４０　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ｏｆ　ｒｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｅｘａｍｉｎｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅｉｒ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｓ　ｔｏ　ｂｌａｓｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｉｅｌｄｓ　ｉｎ　Ｌｉａｎｙｕｎｇａｎｇ，Ｊｉａｎｇｓｕ．Ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　２８　ｍｏｎｏｇｅｎｉｃ　ｓａｍｐｌｅｓ，Ｆｕｊｉｓａｋａ　５（Ｐｉｉ），Ｔａｒｉｄｅ　１（Ｐｉｚ　），Ｆ　８０　１　（Ｐｉｋ），Ｆ－１２４—１（Ｐｉｔａ），Ｆ一９８—１（Ｐｉｋｍ），Ｆ－１２８—１（Ｐｉｔａ　），Ｃ１０１ＬＡＣＣ　ｒＰｉｌ（ｔ）］，Ｃ１０１Ａ５１［Ｐｉ２（ｔ）］ａｎｄ　Ｃ１０４ＰＫＴ［Ｐｉ３（　）］ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ　ｈｉｇｈ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｓ　ｔｏ　ｂｌａｓｔ．Ｎｉｇｈｔｙ—ｓｅｖｅｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　７４０　ｃｕｌｔｉｖａｒｓ　ｗｅｒｅ　ｆｏｕｎｄ　ｔｏ　ｂｅ　ｈｉｇｈｌｙ　ｒｅｓｉｓｔａｎｔ，２３０　ｒｅｓｉｓｔａｎｔ，２００　ｍｏｄｅｒａｔｅ　ｒｅｓｉｓｔａｎｔ，９３　ｍｏｄｅｒａｔｅｌｙ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ，４８　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ，ａｎｄ　５５　ｈｉｇｈｌｙ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｂｌａｓｔ．Ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅｓｅ　ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｇｅｎｅｓ，１　９　５　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｉｔｈ　ｈｉｇｈ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｏｒ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｂｌａｓｔ　ｗｅｒｅ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ．Ｔｈｅ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｃｕｌｔｉｖａｒｓ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅｉｒ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｗｉｔｈ　１０　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｏｎｅｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｇｅｎｅｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｌｏｃｕｓ　ｏｆ　Ｐｉｉｗａｓ　ｆｏｕｎｄ　ｉｎ　２８　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ，　Ｐｉｋｈｉｎ　４０，Ｐｉｔａｉｎ　５２，Ｐｉｂ　ｉｎ　１１０，Ｐｉ２　ｉｎ　１１，ａｎｄ　Ｐｉｋ　ｉｎ　２．Ｏｎ　ｔｈｅ　ｏｔｈｅｒ　ｈａｎｄ，ｎｏ　ｌｏｃｕｓ　ｏｆ　Ｐｉｌ，Ｐｉｋｍ，Ｐｉｋｐ　ｏｒＰｉ９ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅｓｅ　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｒｉｃｅ；ｆｉｅｌｄ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ；ｍｏｎｏｇｅｎｉｃ　ｇｅｎｅ　ｌｉｎｅ；Ｐｉｉｉ／Ｐｉｋｈ／ＰｉｌＰｉ２／Ｐｉｔａ／Ｐｉｋ／Ｐｉｋｍ／Ｐｉｋｐ／Ｐｉｂ／Ｐｉ９；ｂｌａｓｔ　水稻是中国乃至世界上最重要的粮食作物之　一全的方法。因此，研究水稻抗稻瘟病机制，对持续　有效地控制稻瘟病有重要意义。　水稻中存在着一类编码ＮＢＳ—ＬＲＲ蛋白　（ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ—ｂｉｎｄｉｎｇ　ｓｉｔｅ—ｌｅｕｃｉｎｅ—ｒｉｃｈ　ｒｅｐｅａｔｓ）的主　。稻瘟病是危害水稻最严重病害之一，每年可造　成生产上高达１ｏ　～３０　巨大损失　。长期生产　实践表明，利用水稻自身抗病免疫系统，培育抗病　水稻品种，是防治稻瘟病最经济有效、对环境最安　效抗稻瘟病基因。这类抗病基因介导的抗性表现强　收稿日期：２０１５—０２　１２初稿；２０１５—０４—１４修改稿　作者简介：刘辉（１９７９一），男，助理研究员，在读博士生，主要从事水稻新品种选育与应用推广（Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｓｆｌ８１８１８＠１　６３．ｃｏｒｎ）　＊通讯作者：徐大勇（１９６４一），男，博士，硕士生导师，主要从事水稻遗传与分子育种研究（Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｕｄａｙｏｎｇ０３０３＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ）　基金项目：江苏省普通高校研究生科研创新计划（ＣＸＺＺ１２　０９０５）　第５期　刘　辉等：江苏水稻品种稻瘟病主效抗性基因鉴定及应用评价４５３　烈，传统意义上称之为垂直抗性。在育种应用上，　抗性基因可操作性强、效果明显，因此人们在很早　以前就开始开展主效抗性基因的鉴定及其应用研　究。截至目前，至少已有８５个抗稻瘟病基因得到　鉴定　，其中至少有１９个主效基因已经被克隆　。　但另一方面，这些基因在生产中的分布及利用情况　尚不清楚。　Ｐｉｚ和Ｐｉｋ是水稻中目前报道含有广谱高抗稻　瘟病最多的２个位点，它们分别包含Ｐｉ２、Ｐｉ９、　Ｐｉｚ－ｔ和Ｐ　１、Ｐｉｋ－ｈ／Ｐｉ５４、Ｐｉｋ－ｍ、Ｐｉｋ－ｐ等复等　位基因　］。另外，Ｐｉｔａ和Ｐｉｂ对我国很多稻区也　表现出很高水平的抗性ｌ６１］。但这些位点或基因在　国内品种资源中的分布及利用上还缺乏完善的研　究，限制了它们在育种中应用。　从理论上说，单基因系的鉴定与选育是基于　寄主抗性基因和病原无毒基因互作进行的，如能将　单基因系的抗性鉴定用于水稻品种抗性遗传背景的　研究，并结合抗性基因的分子鉴定，这将对提高水　稻品种的抗性基因鉴定效率具有重要意义。　为研究连云港市主要抗病基因的分布及利用情　况，本研究选取了７４０份该市具有代表性的亲本材　料进行田问抗性鉴定，利用４套单基因鉴定系来评　估本地的主要抗性基因；并在此基础上，依据抗性　基因的连锁标记或功能标记，对其中的高抗和高感　的材料进行了分析，从而确定本地的抗性基因，以　期为抗病品种的应用及抗病基因的布局提供参考。　１材料与方法　１．１试验材料　供试水稻材料共７６８个，包括２８个抗稻瘟病　单基因系、６９４个连云港市农科院育种骨干亲本、　４２个由江苏金万禾农业科技有限公司育成的苗头　品种、４个优势品种。２８个单基因系和品种中，１３　个日本育成，４个由国际水稻所育成，１１个由中国　农业科学院等单位育成。上述单基因系种子由江苏　农业科学院植物保护所提供。感病对照种分别是苏　御糯、Ｃｏ３９和丽江新团黑谷，单基因系和品种的　基因型及抗性表现见表１。　１．２试验方法　１．２．１　材料种植及抗性鉴定　田间抗性鉴定病谱　设在连云港市赣榆县塔山镇稻瘟病田间自然鉴定　点，试验时间为２０１３年６～１０月，试验设３个重　复，每个材料种植２８株，分２行，按２Ｏ　ｃｍ×２Ｏ　ｃｍ种植。待感病对照完全发病后开始调查，本研　究对照穗颈瘟发病较为充分，试验数据主要按穗颈　瘟分级。按０、１、３、５、７和９分级，分别调查每　个重复中每个材料１Ｏ株的总病穗率，病级划分按　国际水稻所相应标准。　表１　四套鉴定品种（系）在连云港市发病情况　Ｔａｂｌｅ　１　Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　４　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｉｅｌｄ　单基因系和品种　基因　篓曩　日本单基因系（Ｍｏｎｏｇｅｎｉｅ　ｌｉｎｅｓ　ｏｆ　Ｊａｐａｎ）　新２号（Ｓｈｉｎ　２）Ｐｉ５ｈ　５　爱知旭（Ａｉｃｈｉａｓａｈｉ）Ｐｉｎ　５　Ｋ３　ＰｉｋｈＰｉ　ｈ　３　梅雨明（Ｔｓｕｙｕａｋｅ）Ｐｉｋｍｐｉ　ｈ　１　Ｋ１　Ｐ　￡ｎ　１　福锦（Ｆｕｋｕｎｉｓｈｉｋｉ）Ｐｉｚ　３　ＰｉＮＯ一４　Ｐｉｒａｚ　Ｐｉｓｈ　１　砦１号（Ｔａｒｉｄｅ　１）ｐｉｚｔ　１　Ｋ５９　Ｐｉ　１　Ｋ６Ｏ　ＰｉｋｐＰｉｓｈ　３　草笛（Ｋｕｓａｂｕｅ）Ｐｉｋ　Ｐｉｓｈ　１　藤板５号（Ｆｕｊｉｓａｋａ　５）Ｐｉｉ　１　ＢＬ１　Ｐ　Ｐｉｓｈ　３　中国单基因鉴定品种（Ｍｏｎｏｇｅｎｉｃ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ）　Ｆ一８Ｏ一１　Ｐ　１　Ｆ一１２４—１　Ｐｉｔａ　１　Ｆ一９８—１　Ｐｉｋｍ　１　Ｆ　１２８一ｌ　Ｐｉｔａｚ　１　Ｆ－１２９—１　Ｐｉｋｐ　３　Ｆ　１４５～２　Ｐ　６　５　丽江新团黑谷（ＬＴＨ）　一　９　国际水稻所近等系（Ｎｅａｒ－ｉｓｏｇｅｎｉｅ　ｌｉｎｅｓ　ｏｆ　ＩＲＲＩ）　Ｃ１０１ＬＡＣＣ　Ｐｉ１（　１　Ｃ１０１Ａ５１　Ｐｉ２（ｔ）　１　Ｃ１０４ＰＫＴ　Ｐ格（ｔ）　１　Ｃ１０１ＰＫＴ　Ｐ　４“（ｔ）　１　Ｃ０３９　Ｐ　Ｃ０３９（　）　３　中国鉴定品种（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ）　合江１８（Ｈｅｊｉａｎｇ）Ｐｉａ，Ｐ　—ｉ　５　珍龙１３（Ｚｈｅｎｇｌｏｎｇ　１３）　７　关东５１（Ｋａｎｔｏ　５１）Ｐｉｋ　７　四丰４３（Ｓｉｆｅｎｇ　４３）　７　东农３６３（Ｄｏｎｇｎｏｎｇ　３６３）Ｐｉａ，Ｐｉｋ　７　１．２．２抗性基因筛选　根据１．２．１鉴定结果，并　结合已有对江苏省抗性基因的研究报告ｌ８］，选取　ＰｉｉｔｆＰｉ　ｈｆＰｉ琵ｐ／Ｐｉ琵ｆＰｉ琵ｍ／Ｐｉ－ｔａ／ＰｔｂｆＰｔ９ｆＰｉ２ｆ　Ｐｉｌ等８个基因进行标记鉴定研究（表２），利用这８　个基因已开发的功能标记（表２），对１９５个高抗、高　感和较为重要的材料（品种）进行基因分型（表３）。　４５４　福建农业学报　第３Ｏ卷　１．２．３分子标记鉴定　按Ｍｕｒｒａｙ等的方法提取　水稻基因组ＤＮＡ＿ｌ　３］。用于ＰＣＲ扩增反应的基因、　ＤＮＡ凝胶回收试剂盒回收、纯化后酶切，该过程　按相应试剂盒操作说明。各引物扩增产物视片断大　小分别在２　琼脂糖或８　的非变性聚丙烯酰胺凝　胶上电泳，并用银染法显影，凝胶成像仪中拍照。　引物序列、预期片段大小见表２。引物序列由上海　生工生物工程技术有限公司合成。　Ｐｉｔａ引物的ＰＣＲ体系如下：２×Ｔａｑ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ　１５　Ｉ　，１０　ｍｏｌ・Ｉ　的抗性／敏感性引物各１　２结果与分析　２．１　４套单基因系和近等系鉴定品种中持有相同　抗性基因的不同品种抗・陛差异　Ｌ，基因组ＤＮＡ　ｌ　Ｌ，反应总体积３０　Ｌ，用　ｄｄＨ　Ｏ补足。反应程序如下：９４℃＿下预变性５　ｍｉｎ，９４℃下变性５０　Ｓ，６０℃下退火５Ｏ　Ｓ，７２℃下　从表１可知，中国鉴定品种表现出与另外３套　鉴定系显著不同的抗性表现，这可能是由于这套鉴　定系经过长时问的传代，其中含有的抗性基因存在　丢失的可能。尽管其他３套单基因系或近等系鉴定　延伸１１　ｍｉｎ，３５个循环，最后７２℃下延伸１Ｏ　ｍｉｎ，４。Ｃ下保存。Ｐｉｋｍ／Ｐｉｂ／Ｐｉｇ／Ｐｉ２引物的ＰＣＲ　体系为２５　Ｉ　，２×Ｔａｑ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ　１２．５　Ｌ，ｌ０　／￣ｍｏｌ・Ｉ　的Ｆ／Ｒ引物各１　Ｌ，基因组ＤＮＡ　１　／，Ｌ，用ｄｄＨ　Ｏ补足。反应程序除退火温度根据各　引物有所变动外，其他和Ｐｉｔａ引物相同。Ｐｉｌ／　Ｐｉｋ／Ｐｉｋｐ标记ＰＣＲ产物利用１．２　的琼脂糖凝胶　电泳分离、检测ＰＣＲ扩增产物，目标片段条带经　品种中持有相同主效抗病基因表现出基本相同的抗　性，但有些却表现出不一致的抗性，比如在带有　Ｐｉｚ的福锦和Ｋ５９、带有Ｐｉｂ的ＢＩ　１与Ｆ一１４５—１间　都有明显的差异。换言之，Ｐｉｚ和Ｐｉｂ在不同背景　的鉴定品种（系）问，有不同的抗性水平。　第５期　刘　辉等：江苏水稻品种稻瘟病ｉ￣－ｔ￣性基因鉴定及应用评价４５５　２．２　７４０个鉴定品种的抗性表现　试验中除１７个品种过早熟或晚熟没有得到抗　存在于１１０和５２个品种中，其中Ｐｉｂ在抗性和感　性品种中分布比较随机，但Ｐｉｔａ却极少在高感品　种中出现，它一般都包含在有一定抗性的品种中。　本研究还在ｌ１个高抗品种中检测到Ｐｉ２，这说明　了该基因对本地的稻瘟病具备一定的抗性。另外，　性鉴定的数据外，其他７２３个品种在０、１、３、５、　７和９的品种数分别是９７、２３０、２００、９３、４８和　５５个（表１），由此可知，中抗以上的品种占到了　７２．９　，这表明这些品种具备丰富的抗性资源。　２．３　１９５个品种的主效抗病基因分型　含有Ｐｉｋ的２个品种都是０级抗性，强于其在单基　因系Ｆ一８０—１中的１级抗性，这可能是由于在这两　个品种中还有其他抗病基因的作用，增强了抗性　从表３可以看出，这些材料中都不含有Ｐｉｋｈ／　Ｐｉｋｍ／Ｐｉ９基因，而Ｐｉｂ和Ｐｉｔａ较为广泛的分别　功能。　表３　１９５份水稻育种材料及重要品种的抗性鉴定和基因分型　Ｔａｂｌｅ　３　Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ　ａｎｄ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　１９５　ｂｒｅｅｄｉｎｇ　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ａｎｄ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｃｕｌｔｉｖａｒｓ　ｏｆ　ｒｉｃｅ　品种　病级　基因分型　品种　病级　基因分型　品种　病级　基因分型　ＸｑＯ２６　ｏ　Ｘｑ３６１　０　Ｐｉ－ｔａ　Ｘｑ６５３　０　Ｐｉｎｔａ／Ｐ　６　ＸｑＯ２７　ｏ　Ｘｑ３６２　ｏ　Ｐｉ－ｔａ　Ｘｑ６５５　ｏ　Ｐｉ－ｔａ　ＸｑＯ４４　ｏ　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｉ　Ｘｑ３６４　９　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｋｈ　Ｘｑ６５９　ｏ　Ｐｉ－ｔａ　Ｘｑ０４５　０　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｉ　Ｘｑ３６５　０　Ｐｉｉ　Ｘｑ６６４　９　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｋｈ　Ｘｑ０７６　０　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｉ　Ｘｑ３７７　ｏ　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉ－２／Ｐｉｉ　Ｘｑ６６５　９　Ｘｑ０９４　９　／Ｐｉｉ　Ｘｑ３９２　０　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｉｉ　Ｘｑ６６７　９　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｋｈ　Ｘｑ０９７　０　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｉ　Ｘｑ３９５　０　Ｘｑ６７０　９　Ｐｉ－ｂ　Ｘｑｌ０３　０　Ｐｉ－ｂ　Ｘｑ３９６　ｏ　Ｘｑ６７１　０　Ｐｉ－ｂ　Ｘｑｌ０４　０　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｉ　Ｘｑ４０Ｏ　ｏ　Ｐｉ－ｔａ｜Ｐｉ－ｂ　Ｘｑ６７２　９　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｋｈ　Ｘｑｌ１３　０　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｉ　Ｘｑ４０３　０　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｉｋｈ　Ｘｑ６７５　９　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｋｈ　Ｘｑｌ２０　０　Ｐｉｋｈ　Ｘｑ４０５　０　Ｐｉ－ｂ　Ｘｑ６７６　９　Ｘｑｌ２２　９　Ｐｉｋｈ　Ｘｑ４１２　０　Ｐ？ｂ／Ｐｉｋｈ／Ｐｉｉ　Ｘｑ６７７　９　Ｐｉ　ｂ／Ｐｉｋｈ　Ｘｑｌ３１　０　Ｘｑ４１４　０　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉ－２／Ｐｉｋｈ／Ｐｉｉ　Ｘｑ６８６　９　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｋｈ　Ｘｑｌ３４　０　Ｐｉｉ　Ｘｑ４２Ｏ　ｏ　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｋｈ　Ｘｑ６８７　９　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｋｈ　Ｘｑ１３５　０　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｉ　Ｘｑ４２３　ｏ　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｉ－ｂ　Ｘｑ６８８　９　Ｐｉ－ｂ　Ｘｑ１３６　ｏ　Ｐｉ－ｔａ｛Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｉ　Ｘｑ４２４　０　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｉ　Ｘｑ６９２　０　Ｐｉ－ｔａ　Ｘｑ１４７　ｏ　Ｐｉ－ｔａ／Ｐ　６　Ｘｑ４２６　９　Ｐ￣ｂ／Ｐｉｋｈ　ＫＦ０１　３　Ｘｑ１５２　０　Ｘｑ４２９　０　Ｐｉ－ｔａ｜Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｋｈ　ＫＦ０２　Ｉ　Ｐｂ－ｔａ／Ｐｉ－２／Ｐｉｋｈ　Ｘｑ１５５　９　Ｐｉ－ｂ　Ｘｑ４３１　０　Ｐｉ－ｂ｜Ｐｉｋｈ　ＫＦ０３　１　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｉ　Ｘｑ１５８　９　Ｐｉｉ　Ｘｑ４３４　０　ｐ／－２　ＫＦ０４　１　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｉｉ　Ｘｑｌ６２　９　Ｐ｝ｂｆ　Ｐｉｋｈ　Ｘｑ４３７　０　Ｐｉ－ｂ　ＫＦ０５　３　Ｐ壬－ｂ　Ｐ毫｛　Ｘｑ１６５　ｏ　Ｐ　ｔａ　７Ｐ｝ｂｆＰ　２　Ｘｑ４３８　０　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｂｂ／Ｐｉ－２　ＫＦ０６　１　Ｐｉ－ｔａ／Ｐ｝６　Ｘｑ１７Ｏ　９　Ｐ｝６　Ｘｑ４４１　ｏ　ＫＦ０７　１　Ｐ　６　Ｘｑｌ７１　９　Ｐｉｋｈ　Ｘｑ４４６　９　ＫＦ０８　１　Ｐｉ－ｔａ　Ｘｑ１８２　９　Ｐｉｋｈ　Ｘｑ４４８　０　ＫＦ０９　９　／Ｐｉｉ　Ｘｑ１８４　ｏ　Ｐｉ－ｔａ　Ｘｑ４５１　０　Ｐｉ－ｂ　ＫＦ１０　１　Ｐｉ－ｔａ／Ｐ　６　Ｘｑ１８７　９　Ｘｑ９５２　９　Ｐｉｋｈ　ＫＦ１１　１　Ｐ｝６　Ｘｑ１９ｉ　９　Ｐｉ－ｂ　Ｘｑ４５４　９　Ｐｉ－ｂ　ＫＦ１２　３　Ｐ｝６／Ｐ　ｉ　Ｘｑｌ９３　９　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｋｈ　Ｘｑ４５９　９　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｋｈ　ＫＦ１３　５　Ｐ｝６　Ｘｑｌ９４　９　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｋｈ　Ｘｑ４６５　ｏ　ＫＦ１４　５　Ｐ　６／Ｐ　Ｘｑ１９９　９　Ｐ　６　Ｘｑ４８Ｏ　ｏ　ＫＦ１５　５　Ｘｑ２０６　９　Ｐｉ－ｂ　Ｘｑ４８１　０　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｋｈ　ＫＦ１６　３　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｉ　Ｘｑ２１０　９　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｋｈ　Ｘｑ４８２　０　ｐ／－２　ＫＦ１７　１　Ｐ｝６　Ｘｑ２１３　９　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｋｈ　Ｘｑ４８９　０　Ｐｉ－ｂ　ＫＦ１８　３　Ｐ打　Ｘｑ２１４　９　Ｐｉ－ｂ　Ｘｑ４９６　９　ＫＦ１９　１　Ｐ｝６　４５６　（续上表）　品种　Ｘｑ２２２　Ｘｑ２２５　Ｘｑ２２８　福建农业学报　第３０卷　病级　９　９　９　基因分型　Ｐｉ－ｂ　Ｐｉ－ｂ　Ｐｉｋｈ　品种　Ｘｑ５００　Ｘｑ５０２　Ｘｑ５０４　病级　０　０　０　基因分型　Ｐｉ－ｂ　Ｐｉ－ｋ／Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｉ　Ｐｉ－ｔａｆＰ　２　品种　ＫＦ２０　ＫＦ２１　ＫＦ２２　病级　０　１　３　基因分型　Ｐｉｎｔａ／Ｐｉ－ｂ　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｉ－ｂ　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｋｈ　Ｘｑ２４１　Ｘｑ２４６　Ｘｑ２５０　Ｘｑ２５４　Ｘｑ２６０　Ｘｑ２７１　Ｘｑ２７２　９　０　９　０　０　９　９　Ｐ　６　Ｐｉ－ｋ／Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｉ　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｋｈ　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｉ－ｂ　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｋｈ／Ｐｉｉ　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｋｈ／Ｐｉｉ　Ｐｉ－ｂ　ＸｑＳ０６　Ｘｑ５０８　Ｘｑ５１２　Ｘｑ５１８　Ｘｑ５２０　Ｘｑ５３７　Ｘｑ５４１　０　９　０　０　０　０　０　Ｐｉ－ｂ　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｋｈ　Ｐｉ－ｔａ　Ｐｉ－ｔａ　Ｐ￣ｔａ／Ｐｉ－２　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｉｋｈ　Ｐｉ－ｂ　ＫＦ２４　ＫＦ２５　ＫＦ２６　ＫＦ２７　ＫＦ２８　ＫＦ２９　ＫＦ３Ｏ　３　３　１　１　７　９　１　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｉ－ｂ　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｋｈ　Ｐ｝６　Ｐｉ　ｂ／Ｐｉｋｈ　Ｘｑ２７９　０　Ｘｑ５５１　０　Ｐｉ－ｂ　ＫＦ３１　７　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｉ　Ｘｑ２８２　Ｘｑ２８６　Ｘｑ３０４　０　９　０　Ｐｉ－ｂ　Ｘｑ５５４　Ｘｑ５７１　Ｘｑ５７５　０　０　０　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｉ－ｂ　Ｐｉ－ｔａ　ＫＦ３２　ＫＦ３３　ＫＦ３４　１　９　９　Ｐｉ－ｔａ　Ｐ｝６　Ｐｉ－ｂ　Ｘｑ３１１　Ｘｑ３１９　０　０　Ｐｉ－ｂ　Ｘｑ５７６　Ｘｑ５８１　０　０　Ｐ￣ｂ／Ｐｉｋｈ　Ｐｉ－ｂ　ＫＦ３５　ＫＦ３６　１　１　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｉｋｈ　Ｐｉ－ｔａ　Ｘｑ３２３　Ｘｑ３２７　０　９　Ｐｉ－ｂ　Ｐｉ－ｂ　Ｘｑ５８４　Ｘｑ５９０　０　０　Ｐｂｂ　ＫＦ３７　ＫＦ３８　９　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｉｋｈ　Ｐｎ　Ｘｑ３２９　Ｘｑ３３０　０　０　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｉ－ｂ　Ｐｉ－ｔａ　Ｘｑ５９１　Ｘｑ５９８　０　０　Ｐｉ－ｂ　Ｐｉ－ｔａ　ＫＦ３９　ＫＦ４０　３　３　Ｘｑ３３１　Ｘｑ３３４　０　９　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｉ　Ｐｉ－ｂ　Ｘｑ６０６　Ｘｑ６０８　０　０　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｉ－ｂ／Ｐｉｋｈ　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｉ－ｂ／Ｐ￣２　ＫＦ４１　ＫＦ４２　９　１　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｉ－ｂ　Ｘｑ３４２　０　Ｐ￣ｋｔａ　Ｘｑ６２２　０　Ｐｉ－ｂ　连粳ｌ１　ｌ　Ｘｑ３４５　Ｘｑ３４６　Ｘｑ３４８　０　０　０　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｉｉ　Ｐｉ－ｂ／Ｐｉ－２　Ｘｑ６３１　Ｘｑ６３３　Ｘｑ６３６　０　０　０　Ｐｉ－ｔａ｜Ｐｉｋｈ　Ｐ￣ｂ　Ｐｉ－ｂ　连粳６号　Ｔｌ０　ＨＯ３４４８　１　ｌ　９　Ｘｑ３５６　Ｘｑ３５９　０　０　Ｐｉ－ｂ　Ｘｑ６４８　Ｘｑ６５１　０　０　Ｐｉ－ｔａ／Ｐｂｂ　Ｈ０１２６　２ｔｌ　３　１　３　讨　论　３．１抗病育种的现状及对策　因＿１　］，这不利于选育出来的品种广泛推广　应用。因此，当前抗病育种应注重以下的研究工　作：（１）进一步发掘并精细定位新的稻瘟病抗性基　因，开发与之连锁的分子标记；（２）寻找含有广谱　高抗多抗的中间类型育种材料，通过改良使其快速　成为水稻抗病育种的骨干亲本；（３）了解新品种推　近年来，随着多个稻瘟病抗性基因的定位克隆　及分子标记的开发，国内外已通过分子标记辅助选　择技术，选育出了多个优质、高抗的水稻品种，产　生了一定的社会经济效益　。然而，目前分子　广地区的稻瘟病菌的群体结构，选择合适的稻瘟病　抗性基因。　鉴于以上情况，本研究利用４套单基因鉴定品　标记辅助选择育种还存在着以下一些主要问题：　（１）部分广谱高抗的抗性基因包含在较原始的野生　稻中，连锁累赘情况比较严重，难以在育种中直接　应用；（２）单个抗性基因的品种大多会在推广几年　种（系）以确定当地稻瘟病菌的主效抗性基因，再　应用这些抗性基因的功能标记对１９５份不同类型的　抗性材料进行抗性背景分析。由于该试验设计充分　考虑到了上述提到的当前抗病育种的３个主要问　题，因此，研究结果将为新的抗性基因的挖掘及当　后因抗性明显降低而失去应用价值，虽然聚合多个　抗病基因有利于广谱持久抗性，但当前多基因聚合　育种工作量大和周期长，远不能满足推广应用的需　要；（３）目前国内外在抗性基因的选择范围上比较　狭窄，仅限于Ｐｉｌ、Ｐｉ２和Ｐｉ９等少数几个基　地抗性基因的选择提供重要的种质资源和参考　价值。　第５期　刘　辉等：江苏水稻品种稻瘟病主效抗性基因鉴定及应用评价４５７　３．２鉴定品种（系）的选择　伴随着稻瘟病病菌生理小种研究的过程，已有　１Ｏ多套鉴别体系被选育　。早期的鉴定品种遗传　背景各不相同，甚至有些遗传背景还存在其他抗性　基因＿２卜孙　；因此，很难将这些鉴定品种的主效基　因与对病原菌的抗性对应。为克服早期各套鉴定品　种（系）的局限性，中国农业科学院以普感品种丽　江新团黑谷为轮回亲本，创制了一套国际适用的鉴　别稻瘟病菌生理小种的６个水稻近等基因系，这是　一套经过验证确认为真正单基因的水稻近等基因　系　，但由于这套鉴定系建立时间较早，其包含　的抗病基因已不能满足当前研究的需要。虽然近年　来日本通过与ＩＲＲＩ合作，也用中国的普感品种丽　江新团黑谷作为轮回亲本，育成２４个单基因系。　但由于这套单基因系回交次数偏少，各系统间的遗　传背景仍存在较大差异，没有达到与丽江新团黑谷　遗传背景基本相同的近等基因系水平［２　。综上可　知，目前我们还缺少一套包括已经发现的全部抗病　基因的鉴定系，因此，本研究以中国单基因鉴定系　为主，结合其他３套鉴定品种（系），将它们有机　组合起来；虽然相对于当前已发现或克隆的抗性基　因来说，还不是一套“完整”的鉴定系，但已基本　包含了大部分的广谱高抗基因，能够较充分反应主　要抗病基因在该地区的抗性情况。　３．３鉴定品种（系）和育种材料的抗病反应与抗　性基因的关系　已有研究表明，水稻抗性基因与稻瘟病菌的无　毒基因之间的互作符合基因对基因学说　。因此，　从严格意义上来说，同一主效抗病基因的单基因系　应该具备同样的抗性，然而在本试验中，我们发现　同一主效抗病基因却在不同鉴别品种和单基因系上　的反应不完全一致，并且类似情况也出现在含有相　同抗性基因的鉴定材料中。对于在日本单基因系中　表现抗病的基因，却在中国的鉴定品种或近等基因　品系上是致病的情况（表１）；其原因可能是日本　单基因系鉴别品种中除了主效抗病基因外，还持有　未知的抗病基因或调控基因，但中国近等基因系和　鉴定品种中的主效抗病基因，由于其遗传背景是丽　江新团黑谷或长期种植的地方品种，因此，可消除　未知抗病基因的影响，鉴定品种的抗性反应更加明　确。同理也可解释不同抗病等级的品种含有共同的　鉴定基因和相同抗病等级的品种包含不同的鉴定基　因，这些品种的抗病反应可能多数都是由多个不同　的抗性基因互作的结果。　本试验在１９５份检测的材料中都没有检测到　Ｐｉｌ、Ｐｉｋｈ、Ｐｉｋｍ和Ｐｉ９基因，根据这些基因在　鉴定品种中的表现并结合已有的研究结果，它们对　本地的稻瘟病菌有广谱的抗性，因此，在以后的抗　病育种中，可考虑适当引入这些抗性基因。另外，　对于那些未检测到含有目标基因的品种，一定还含　有其他的主效抗性基因，它们将与已检测到高抗基　因的品种一起，为抗性基因的挖掘及育种应用提供　种质资源。　参考文献：　［１］ＤＥＡＮ　Ｒ　Ａ，ＴＡＬＢＯＴ　Ｎ　Ｊ，ＥＢＢＯＬＥ　Ｄ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｇｅｎｏｍｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｉｃｅ　ｂｌａｓｔ　ｆｕｎｇｕｓ　Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ　ｇｒｉｓｅａ［Ｊ］．　Ｎａｔｕｒｅ，２００５，４３４：９８０—９８６．　Ｅ２３　ＬＩｕ　Ｊ　Ｌ，ＷＡＮＧ　Ｘ　Ｊ，ＭＩＴＣＨＥＬＬ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｃｅｎｔ　ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ａｎｄ　ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｉｃｅ—　Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ　ｏｒｙｚａｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｐｌａｎｔ　Ｐａｔｈｏｌ，２０１０，　１１（３）：４１９—４２７．　［３］ＬＩＵ　Ｗ，Ｌ１ｕ　Ｊ，ＮＩＮＧ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｃｅｎｔ　ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ　ＰＡＭＰ—ａｎｄ　Ｅｆｆｅｃｔｏｒ＿ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ　ｉｍｍｕｎｉｔｙ　ａｇａｉｎｓｔ　ｔｈｅ　ｒｉｃｅ　ｂｌａｓｔ　ｆｕｎｇｕｓ　Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ　ｏｒｙｚａｅ，Ｍｏｌ　Ｅ　Ｊ］．Ｐｌａｎｔ，　２０１３，（６）：６０５—６２０．　［４］ＺＨＡＩ　Ｃ，ＬＩＮ　Ｆ，ＤＯＮＧ　Ｚ　Ｑ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉ０ｎ　ｏｆ　Ｐｉｋ。ａ　ｒｉｃｅ　ｂｌａｓｔ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｇｅｎｅ　ｗｈｉｃｈ　ｅｍｅｒｇｅｄ　ａｆｔｅｒ　ｒｉｃｅ　ｄｏｍｅｓｔｉｃａｔｉｏｎ　ＥＪ］．Ｎｅｗ　Ｐｈｙｔｏｌｏｇｉｓｔ，２０１１，　１８９（１）：３２１—３３４．　［５］ＺＨＵ　Ｘ　Ｙ，ＣＨＥＮ　Ｓ，ＹＡＮＧ　Ｊ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐ１５０（￡），ｆｌ　ｎｅｗ　ｍｅｍｂｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｉｃｅ　ｂｌａｓｔ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　Ｐｉ２／Ｐｉ９　ｍｕｌｔｉｇｅｎｅ　ｆａｍｉｌｙ　ＥＪ］．Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２０１２，　１２４（７）：１２９５—１３０４．　［６］ＬＥＥ　Ｓ　Ｈ，ＪＩＡ　Ｙ　Ｌ，ＪＩＡ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｒｉｃｅ　Ｂｌａｓｔ　Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　Ｇｅｎｅ　Ｐｉ－ｔａ　ｉｎ　Ｉｎｖａｓｉｖｅ　Ｗｅｅｄｙ　Ｒｉｃｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＵＳＡ［Ｊ］．ＰＬｏＳ　ＯＮＥ，２０１１，６（１Ｏ）：ｅ２６２６０．　Ｅ７］ＫＯＩＤＥ　Ｙ，ＫＡＷＡＳＡＫＩ　Ａ，ＴＥＬＥＢＡＮｃ０一ＹＡＮｏＲＩＡ　Ｍ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｐｙｒａｍｉｄｅｄ　ｌｉｎｅｓ　ｗｉｔｈ　ｔｗｏ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｇｅｎｅｓ，　Ｐｉｓｈ　ａｎｄ　Ｐｉｂ，ｆｏｒ　ｂｌａｓｔ　ｄｉｓｅａｓｅ（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ　ｏｒｙｚａｅ　Ｂ．　Ｃｏｕｃｈ）ｉｎ　ｒｉｃｅ（Ｏｒｙｚａ　ｓａｔｉｖａ　Ｌ．）ＥＪ］．Ｐｌａｎｔ　Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，２０１０，　１２９（６）：６７０—６７５．　［８３　ＨｕＡ　Ｌ　ｘ，ｗｕ　Ｊ　Ｚ，ＣＨＥＮ　Ｃ　Ｘ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｉｌ，　ａｎ　ａｌｌｅｌｅ　ａｔ　ｔｈｅ　Ｐｉｋ　ｌＯＣＵＳ　ｗｈｉｃｈ　ｃｏｎｆｅｒｓ　ｂｒｏａｄ　ｓｐｅｃｔｒｕｍ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｔｏ　ｒｉｃｅ　ｂｌａｓｔ［Ｊ］．Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，　２Ｏ１２，１２５：１０４７—１Ｏ５５．　［９］ｃＯｓＴＡＮｚ０　Ｓ，ＪＩＡ　Ｙ．Ｓ　ｅｑｕｅｎｃｅ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ａｔ　ｔｈｅ　ｒｉｃｅ　ｂｌａｓｔ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｇｅｎｅ　Ｐｉ—ｋｍ　ｌｏｃｕｓ：Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ａｌｌｅｌｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｍａｒｋｅｒｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１０，１７８（６）：　５２３—５３Ｏ．　［１Ｏ］ＺＨＡＮＧ　Ｙ，ＷＡＮＧ　Ｓ　Ｂ，ＬＩＵ　Ｘ，Ｄｅｎｇ．Ａｌｌｅｌｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｉｃｅ　ｂｌａｓｔ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　Ｐｉ—ｔａ［Ｊ］．　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，２０１３，２２（６）：４４—４９．　［１１］ＱＵ　Ｓ　Ｈ，ＬＩＵ　Ｇ　Ｆ，ＺＨＯＵ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　Ｂｒｏａｄ—Ｓｐｅｃｔｒｕｍ　Ｂｌａｓｔ　Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　Ｇｅｎｅ　Ｐｉ９　Ｅｎｃｏｄｅｓ　ａ　Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ－Ｂｉｎｄｉｎｇ　Ｓｉｔｅ－　Ｌｅｕｃｉｎｅ—Ｒｉｃｈ　Ｒｅｐｅａｔ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　ａｎｄ　Ｉｓ　ａ　Ｍｅｍｂｅｒ　ｏｆ　ｆｌ　Ｍｕｈｉｇｅｎｅ　４５８　福建农业学报　第３Ｏ卷　Ｆａｍｉｌｙ　ｉｎ　Ｒｉｃｅ　ＥＪ］．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００６，１７２（３）：１９０１—１９１４．　［１２］高利军，高汉亮，颜群，等．４个抗稻瘟病基因分子标记的建　立及在水稻亲本中的分布［ｃ］／／中国科技部，中国农业部，　湖南省人民政府．第１届中国杂交水稻大会论文集．长沙：　杂交水稻编辑部，２００９：２９４—２９８．　［１　３３　ＭＵＲＲＡＹ　Ｈ　Ｇ，ＴＨＯＭＰＳＯＮ　Ｗ　Ｆ．Ｒａｐｉｄ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｉｇｈｅｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ＤＮＡ　ＥＪ］．Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９８０，（８）：４３２１．　ｒ１４３　ＹＩＮ　Ｄ　Ｓ，ＸＩＡ　Ｍ　Ｙ，ＬＩ　Ｊ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．Ｒｉｃｅ　ｂｌａｓｔ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｇｅｎｅｓ　Ｐｉ９　ＳＴＳ　ｔａｇ　ｃｈａｉｎ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｒｋｅｒ　ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ　Ｅ１］．Ｃｈｉｎａ　ｒｉｃｅ　ｓｃｉｅｎｃｅ，　２０１１，２５（１）：２５—３０．　Ｅ１５］ＪＩＮ　Ｓ　Ｊ，ＬＩＵ　Ｗ　Ｇ，ＺＨＵ　Ｘ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｕｓｉｎｇ　ｍａｒｋｅｒ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ｔｏ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｗｉｎ　ｍｉｎ　ＧＩ￣８Ｓ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ　ｒｉｃｅ　ｂｌａｓｔ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ口］．Ｃｈｉｎａ　ｒｉｃｅ　ｓｃｉｅｎｃｅ，２００７，２１（６）：５９９—６０４．　［１６］ＬＩＵ　Ｓ　Ｐ，ＬＩ　Ｘ，ＷＡＮＧ　ｃ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｕｓｉｎｇ　ｍａｒｋｅｒ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　Ｊａｎｅ　ｓｈａｎｙｏｕ９７　ｂｌａｓｔ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ，２００３，４５（１１）：１３４６—１３５０．　［１７］ＫＯＵＤＥ　Ｙ，ＥＢＲＯＮ　Ｌ　Ａ，ＫＡＴＯ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ａ　ｓｅｔ　ｏｆ　ｎｅａｒ－　ｉｓｏｇｅｎｉｃ　ｌｉｎｅｓ　ｆｏｒ　ｂｌａｓｔ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｇｅｎｅｓ　ｗｉｔｈｅ　ａｎ　ｉｎｄｉｃａ—ｔｙｐｅ　ｒａｉｎｆｅｄ　ｌｏｗｌａｎｄ　ｅｌｉｔｅ　ｒｉｃｅ（Ｏｒｙｚａ　ｓａｔｉｖａ　Ｌ．）ｇｅｎｅｔｉｃ　ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ［Ｊ］．Ｆｉｅｌｄ　Ｃｒｏｐｓ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１１，１２３（１）：　ｌ９—２７．　ｒ１８］ＨＩＴＴＡＬＭＡＮＩ　Ｓ，ＰＡＲＣＯ　Ａ，ＭＥＷ　Ｔ　Ｖ，ｅｔ　ａ１．Ｆｉｎｅ　ｍａｐｐｉｎｇ　ａｎｄ　ＤＮＡ　ｍａｒｋｅｒ　ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｐｙｒａｍｉｄｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ　ｍａｊｏｒ　ｇｅｎｅｓ　ｆｏｒ　ｂｌａｓｔ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｉｎ　ｒｉｃｅ［Ｊ］．Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｇｅｎｅｔｉｅｓ，２０００，１００（７）：１１２１—１１２８．　［１９］ＣＨＥＮ　Ｈ　Ｑ，ＣＨＥＮ　ｚ　Ｘ，ＮＩ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｕｓｉｎｇ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｒｋｅｒ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｔｈｒｅｅ　ｇｅｎｃｔｉｅａｌｌｙ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｇｏｌｄ　２３Ｂ　ｂｌａｓｔ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｔｏ　ｒｉｃｅ　ｂｌａｓｔ［Ｊ］．Ｃｈｉｎａ　ｒｉｃｅ　ｓｃｉｅｎｃｅ，　２００８，２２（１）：２３—２７．　［２０］ＬＩＵ　Ｗ　Ｇ，ＷＡＮＧ　Ｆ，ＪＩＮ　Ｓ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｕｓｉｎｇ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｒｋｅｒ—ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｐｉｌ　ａｎｄ　ｐｉ２　ｇｅｎｅ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｔｗｏ　ｌｉｎｅｓ　ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｒｉｃｅ　ｂｌａｓｔ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ［Ｊ］．　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｒｏｐ，２８，３４（７）：１１２８—１１３６．　ｒ２１］ＮＡＲＡＹＡＮＡＮ　Ｎ　Ｎ，ＢＡＩＳＡＫＮ　Ｎ，ＣＲＵＺ　Ｖ，ｅｔ　ａ１．　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｂｌａｓｔ　ａｎｄ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｂｌｉｇｈｔ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｉｎ　ｒｉｃｅ　ｅｖ．ＩＲ５０［Ｊ］．Ｃｒｏｐ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００２，４２　（６）：２０７２—２０７９．　［２２］ＺＨＵ　Ｘ　Ｙ，ＹＡＮＧ　Ｑ　Ｙ，ＹＡＮＧ　Ｊ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｔｏ　ｒｉｃｅ　ｂｌａｓｔ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　ｓｉｎｇｌｅ　ｇｅｎｅ　ｏｆ　ｉｎｄｉｃａ　ｒｉｃｅ　ｂｌａｓｔ　ｆｕｎｇｕｓ　ｓｍａｌｌ　ｋｉｎｄ　ｏｆ　ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．　Ａｅｔａ　ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ　ｓｉｎｉｃａ，２００４，３４（４）：３６１—３６８．　［２３］山崎义人，高坂淖尔．稻瘟病与抗病育种［Ｍ］．北京：农业　出版社，１９９０：３５３．　［２４］ＡＴＫＩＮＳ　Ｊ　Ｇ，ＲＯＢＥＲＴ　Ａ　Ｌ，ＡＤＡＩＲ　Ｃ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ａｎ　ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　ｓｅｔ　ｏｆ　ｒｉｃｅ　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ｆｏｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇ　ｒａｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｉｒｉｃｕｌａｒｉａ　ｏｒｙｚａｅ［Ｊ］．Ｐｈｙｔ０ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９６７，５７：２９７—３０１．　［２５］ＹＡＭＡＤＡ　Ｍ，ＫＩＹＯＳＡｗＡ　ｓ，ＹＡＭＡＧＵＣＨＩ　Ｔ，ｅｔ　ａＩ．　Ｐｒｏｐｏｓａｌ　ｏｆ　ａ　ｎｅｗ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇ　ｒａｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ　ｏｒｙｚａｅ　Ｃａｖａｒａ　ｉｎ　Ｊａｐａｎ［Ｊ］．Ａｎｎａｌｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｐｈｙｔｏｐａｔｈ０ｌ０ｇｉｃａ１　Ｓｏｃｉｅｔｙ　ｏｆ　Ｊａｐａｎ，１９７６，４２：２１６—２１９．　［２６］ＭＡＣＫＩＬＬ　Ｄ　Ｊ，ＢＯＮＭＡＮ　Ｊ　Ｍ．Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ　ｏｆ　ｂｌａｓｔ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｉｎｎｅａｒ—ｉｓｏｇｅｎｉｃ　ｌｉｎｅｓ　ｏｆ　ｒｉｃｅ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｐａｔｈ０ｌｏｇｙ，　１９９２，８２：７４６—７４９．　［２７］ＬＩＮＧ　Ｚ　Ｚ，ＭＥＷ　Ｔ　Ｖ，ＷＡＮＧ　Ｊ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｎｅａｒ—ｉｓｏｇｅｎｉｃ　ｌｉｎｅｓ　ａｓ　ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｌａｓｔ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ＥＪ］．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｒｉｃｅ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｎｅｗｓｌｅｔｔｅｒ，１９９５，　２０（１）：１３—１４．　［２８］ＨＩＲＯＳＨＩ　Ｔ，ＭＡＲＹ　Ｊ　Ｔ　Ｙ，ＥＢＲＯＮ　Ｌ　Ａ，ｅｔ　ａ１．　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｍｏｎｏｇｅｎｉｃ　ｌｉｎｅｓ　ｏｆ　ｒｉｃｅ　ｆｏｒ　ｂｌａｓｔ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ＥＪ］．Ｂｒｅｅｄｉｎｇ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０００，５０：２２９—２３４．　［２９］ＦＬＯＲ　Ｈ　Ｈ．Ｔｈｅ　ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｓｙｓｔｅｍｓ　ｉｎ　ｆｌａｘ　ａｎｄ　ｆｌａｘ　ｒｕｓｔ口］．Ａｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９５６，（８）：２９—５４．　（责任编辑：柯文辉）