BSA与CTAB相互作用的荧光光谱研究

第４１卷第２４期　２０１３年１２月　广州化工　Ｖｏ１．４１　Ｎｏ．２４　Ｄｅｅｅｍｂｅｒ．２０１３　Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　ＢＳＡ与ＣＴＡＢ相互作用的荧光光谱研究　涂逢樟，俞芸，上官昌汾　龙岩３６４０００）　（龙岩学院化学与材料学院，福建摘　要：在模拟生理条件下，用荧光光谱法研究了十六烷基三甲基溴化铵（ＣＴＡＢ）与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的相互作用。结果　表明：ＢＳＡ分子中色氨酸和酪氨酸残基具有荧光发射性质，以２８０　ｎｍ激发ＢＳＡ，在３４１　ｎｍ处有很强的荧光发射。在加入ＣＴＡＢ后，　发现ＣＴＡＢ—ＢＳＡ强荧光峰的位置蓝移，且荧光强度随着ＣＴＡＢ浓度的增大而明显减弱，说明ＣＴＡＢ对ＢＳＡ有荧光猝灭现象，猝灭　以静态猝灭为主，由Ｓｔｅｒｎ—Ｖｏｌｍｅｒ方程求得ＣＴＡＢ表观猝灭常数Ｋ　＝１．４６９×１０”Ｌ・ｍｏｌ～・Ｓ～。得到了ＣＴＡＢ与牛血清白蛋白　分子间的结合常数和热力学参数。利用已有的计算方法，建立了相应的计算机程序，使计算结果更合理。通过与常见公式计算的结　果进行比较，所建立的方法得到了比较满意的结果。　关键词：荧光光谱；牛血清白蛋白；十六烷基三甲基溴化铵；相互作用　中图分类号：０６１６　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１—９６７７（２０１３）２４—００５５—０４　Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｆｏｒ　Ｂｏｖｉｎｅ　Ｓｅｒｕｍ　Ａｌｂｕｍｉｎ　ｗｉｔｈ　Ｃｅｔｙｌｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ　Ｂｒｏｍｉｄｅ　ｂｙ　Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ　ＴＵ　Ｆｅｎｇ—ｚｈａｎｇ，ＹＵ　Ｙｕｎ，ＳＨＡＮＧＧＵＡＮ　Ｃｈａｎｇ—ｆｅｎ　（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｍａｔｅｒｉａｌ，Ｌｏｎｇｙａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｊｉａｎ　Ｌｏｎｇｙａｎ　３６４０１２，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｅｔｙｌｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ　ｂｒｏｍｉｄｅ（ＣＴＡＢ）ａｎｄ　ｂｏｖｉｎｅ　ｓｅｒｕｍ　ａｌｂｕｍｉｎ（ＢＳＡ）ｗａｓ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｕｎｄｅｒ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｓｉｍｉｌａｒ　ｔｏ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｂｏｄｉｅｓ　ｂｙ　ｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｓｐｅｃｔｒａ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ＣＴＡＢ．ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　ｌｏｃａｔｅｄ　ｉｎ　ＢＳＡ．ｈａｄ　ａ　ｍａｘ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｅｍｉｓｓｉｏｎ　ｐｅａｋ　ａｔ　３４　１　ｎｍ　ｗｉｔｈ　ａｎ　ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　２８０　ＨＥ．Ｉｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ＣＴＡＢ　ｈａｄ　ａ　ｐｏｗｅｒｆｕｌ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｔｏ　ｑｕｅｎｃｈ　ｔｈｅ　ＢＳＡ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｗｉｔｈ　ａ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ａ　ｓｔａｔｉｃ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｒａｔｈｅｒ　ｔｈａｎ　ａ　ｄｙｎａｍｉｃ　ｏｎｅ．Ｔｈｅ　ａｐｐａｒｅｎｔ　ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ　ｃｏｎｓｔａｎｔ　Ｋ。ｗａｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｔｏ　ｂｅ　１．４６９×１０　Ｌ・ｍｏｌ一　・ｓ一　ｂｙ　Ｓｔｅｒｎ—Ｖｏｌｍｅｒ　ｅｑｕａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ａｎｄ　ｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅａｓｏｎａｂｌｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｂｙ　ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ　ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｃａｌｃｕｌａｔｉｎｇ　ｅｑｕａｔｉｏｎ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｂｙ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｂｙ　ｏｔｈｅｒ　ｃａｌｃｕｌａｔｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄｓ．ｉｔ　ｗａｓ　ｐｒｏｖｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｓａｔｉｓｆａｅｔｏｒｙ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｃａｎ　ｂｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｐｒｏｐｏｓｅｄ　ｍｅｔｈｏｄ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ；ｂｏｖｉｎｅ　ｓｅｒｕｍ　ａｌｂｕｍｉｎ；ｃｅｔｙｌｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ　ｂｒｏｍｉｄｅ：ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　在医学研究上，测定血清蛋白量及质的改变，可对疾病的　面活性剂与蛋白质的相互作用。本文用荧光光谱法来研究　诊断、疗效的观察提供有价值的资料及数据。同时，在生命科　ＣＴＡＢ对ＢＳＡ的结构影响，获得有关ＣＴＡＢ与ＢＳＡ相互作用的　学和化学的研究中，需要了解各种类型的蛋白质的结构性能、　结合常数、结合热力学参数及荧光猝灭机理，旨在从分子水平　形态、与其它的物质的结合形式以及反应机理等方面的信　上阐明ＣＴＡＢ与ＢＳＡ作用的驱动力。　息　。牛血清蛋白（ｂｏｖｉｎｅ　ｓｅｒｕｍ　ａｌｂｕｍｉｎｓ，ＢＳＡ）是常用的研　究蛋白，因为它是血浆中含量最丰富的载体蛋白，能与体内许　１　实验部分　多内源性物质及外源性物质作用，且这类蛋白的结构己用ｘ光　测定　。　１．１仪器与试剂　表面活性剂开发半个多世纪以来，作为洗涤剂大量使用。　ＲＦ一５３０１ＰＣ型荧光光谱仪，日本岛津公司；ＴＵ一１９０１双　使用初期就发现对皮肤产生明显的刺激作用，后来逐步认识到　光束紫外可见分光光度计，普析通用仪器有限责任公司（北　在接触过程中对人体安全性的潜在危险　Ｊ。而表面活性剂引起　京）；ｐＨＳ一３Ｃ数字酸度计，杭州东兴设备仪器厂；ＤＫ一￥２２　的皮肤刺激跟表面活性剂与角质层蛋白间的相互作用有关。因　型电热恒温水浴锅，上海精宏实验设备有限公司；微量进样　此，表面活性剂与蛋白质的相互作用在工业、生物、食品、医　器，日本岛津公司。　药和化妆品等行业中具有重要意义　Ｊ。而溴化十六烷基三甲基　牛血清白蛋白，厦门鹭隆生物公司，Ｓｉｇｍａ分装；十六烷基　铵（ｃｅｔｙｈｒｉｍｅｔｈｙｌ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｂｒｏｍｉｄｅ，ＣＴＡＢ）是人们经常研究的　三甲基溴化铵（分析纯），汕头西陇化工厂；磷酸氢钠、磷酸二　一种阳离子表面活性剂　。　，故选其作为表面活性剂来研究表　氢钠、盐酸、氯化钠及氢氧化钠等其它试剂均为分析纯，实验　基金项目：龙岩学院第二批教育教学改革立项项目（岩学院教［２００９］４０号）资助。　作者简介：涂逢樟（１９７７一），男，硕士，讲师，主要从事荧光、毛细管电泳、色质联用的研究。　广州化工　２０１３年１２月　用水为二次蒸馏水。　称取６８　ｍｇ牛血清白蛋白，溶于５０　ｍＬ二次蒸馏水中，配　灭。动态猝灭的作用过程遵循Ｓｔｅｍ—Ｖｏｌｍｅｒ方程　Ｊ：　成浓度为２．０×１０。ｍｏｌ／Ｌ的储备液，置于４℃冰箱中保存。　称取９．１　ｍｇ　ＣＴＡＢ，加入少量重蒸乙醇预溶解，移人　５０　ｍＬ容量瓶中，用重蒸水稀释至刻度，即得浓度为５．０×　１０　ｍｏＬ／Ｌ　ＣＴＡＢ溶液。　准确移取９．６０　ｍＬ浓度为０．０６７　ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＨ　ＰＯ　溶液和准　Ｆ０／Ｆ＝１＋Ｋ　［Ｑ］＝１＋ｋ。Ｔ０［Ｑ］　（２）　式中：Ｆ。和Ｆ——不存在和存在猝灭剂时ＢＳＡ的荧光强度　Ｋ　——动态猝灭常数　ｋ　——双分子猝灭过程速率常数　Ｔ　——无猝灭剂存在下荧光分子的平均寿命，生物　大分子荧光寿命约为１０　Ｓ　１３　３　［Ｑ］——猝灭剂的浓度　确移取４０．４０　ｍＬ浓度为０．０６７　ｍｏｌ／Ｌ　Ｎａ２ＨＰＯ４溶液，两者混合　均匀即得５０．００　ｍＬ　ｐＨ　７．４０等渗磷酸盐缓冲溶液（ＰＢＳ）。　由猝灭曲线的斜率即可求得猝灭常数，ＣＴＡＢ的猝灭常数　及线性相关系数ｒ列于表１。各类猝灭剂对生物大分子的最大　扩散碰撞猝灭常数为２．０×１０　Ｌ・ｍｏｌ～・ｓ　＿１　，显然ＣＴＡＢ　１．２实验过程　移取５Ｏ　浓度为２×１０　ｍｏｌ／Ｌ的ＢＳＡ于１　ｃｎｌ石英吸收　池中，加入２．４５　ｍＬ　ｐＨ７．４０等渗磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）。用微量　进样器进行荧光滴定，每次加入１—５　ｔｘＬ　ＣＴＡＢ溶液。混合均　匀并静置１５　ｒａｉｎ后，以２８０　ｎｍ为激发波长（入射和发射狭缝分　别为３和５　ｎｍ），在荧光光度计上记录２９０～４５０　ｎｍ波长范围　内的发射光谱。　２结果与讨论　２．１　ＣＴＡＢ对ＢＳＡ的荧光猝灭作用　图１给出了ＣＴＡＢ浓度对ＢＳＡ荧光光谱的影响，可见随着　ＣＴＡＢ浓度的增加，ＢＳＡ在３４１　ｎｍ处荧光发射峰强度明显减弱，　而且峰位发生明显的蓝移，表明色氨酸疏水性增强　Ｊ。ＣＴＭＡＢ　的作用位点位于血清白蛋白亚域ⅡＡ和ⅢＡ的疏水腔中，而位　于亚结构域ⅡＡ的色氨酸残基，其荧光强度易受小分子配体的　影响。因此，将ＣＴＭＡＢ加入到ＢＳＡ后，荧光强度明显降低。　随着ＣＴＡＢ浓度的增加，ＢＳＡ中的位点渐渐“饱和”，导致溶　液中的荧光猝灭渐趋“饱和”。实验表明，当Ｃ　ＴＡＢ：ＣＢｓＡ　＞Ｉ２０：１　后，ＣＴＡＢ基本不再具有进一步的猝灭作用，如图１中曲线ｈ　和曲线ｉ所示。　Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ／ｎｍ　ｅ（ＢＳＡ）＝Ｏ　４，，ｘｍｏｌ／１　；ｃ（ｃＴＡＢ），（　ｍ０ｌ，Ｉ　）：　ａ　Ｏ；ｈ　０　４；ｃ．０　８；ｄ．１　２；ｅｌ　６；ｆ　２　Ｏ；ｇ　２　４；ｈ　８．０；ｉ１０．０　ｐＨ＝７　４０．Ｔ＝１９　ｏｃ　图１　ＣＴＡＢ浓度对ＢＳＡ荧光光谱的影响　Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　ＣＴＡＢ—ＢＳＡ　除静态和动态猝灭外，引起物质荧光强度降低的原因还有　“内滤光效应”。Ｓｔｅｉｎｅｒ等　提出，如果吸收值不超过０．３　时，内滤光效应可用如下公式进行校正：　Ｆ。　＝Ｆ。ｂ　×ｅ　＋Ａｅｍ）／２　（１）　式中：Ｆ…和Ｆ曲。——校正后和观察到的荧光强度　Ａ　和Ａ　——药物在激发和发射波长处的吸光度　本文采用式（１）对内滤光予以校正。　２．２猝灭类型和机理　小分子对蛋白质荧光的猝灭主要分为动态猝灭和静态猝　对ＢＳＡ猝灭过程的速率常数（１．１０５～１．４６９×１０”Ｌ・ｔｏｏｌ～・Ｓ　）　远大于扩散控制的ｋ　，可见猝灭不是由动态碰撞引起的，而是　由于形成了不发荧光的化合物引起的静态猝灭。　同时，动态猝灭和静态猝灭可以通过猝灭常数随温度的变　化来区分。如果温度越高，导致猝灭常数越大，就说明碰撞分　子数越大，是动态猝灭，反之则是静态猝灭”　。从表１数据可　知，随着温度的升高，Ｋ　减小，这也佐证ＣＴＡＢ对ＢＳＡ荧光的　猝灭应该属于静态猝灭。　表１　不同温度下猝灭常数及相关系数ｒ　Ｔａｂｌｅ　１　Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ　ｒ，Ｋ　ａｎｄ　ｋｑ　ａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ　２．３结合常数计算　当荧光物质与猝灭体之间形成不发荧光的复合物时，可利　用许多公式，如Ｌ　ｉｎｅｗｅａｖｅｒ—Ｂｕｒｋ方程［式（３）］　１６］、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ　方程［式（４）］ｍ　、对数方程［式（５）］［】　、改进的Ｓｃａｔｃｈａｒｄ方　程［式（６）和式（７）］㈣及Ｒｏｓｅｎｔｈａｎｌ方程［式（８）］　等来计算　此相互作用的结合常数和结合位点数。　】　１　１　…　而ｊ＿　）　Ｌ　＿ｒ，ｊ　：　（ｎ—ｒ）　（４）　ｌｇ　＝ｌｇＫｏ＋ｎｌｇ［（）　（５）　Ｆｏ百Ｆ　：　Ｆ一　ｎ—Ｆ　…。Ｌ—ｔ　Ｊ］　　（６）、、　　Ｆｏ　１　１　，　、　一／＇ｔ　）　争一（１一　Ｆ）Ｅ　Ｑ　ＩＫｏ＋ｎ　］Ｋｏ＋ｌ　（８）　式中：ｎ和Ｋ　——结合位点数和结合常数　一平均结合数，即为平均每摩尔大分子结合　ＣＴＡＢ小分子的量　［Ｑ　］和［Ｂ。］——体系中ＣＴＡＢ和ＢＳＡ的总浓度　［Ｑ　］——游离ＣＴＡＢ浓度　除式（６）和式（８）外，其余方程式都是应用游离ＣＴＡＢ的浓　度计算结合参数的。由于实验过程中很难获得游离ＣＴＡＢ的浓　度，用总的ＣＴＡＢ浓度代替游离的ＣＴＡＢ浓度又必然会影响计　算结果的准确性。鉴于此，推导了生物大分子和小分子相互作　第４１卷第２４期　用的关系式　：　ｌｇ（　）：ｎｌｇＫｏ＋　ｌｇ（　涂逢樟等：ＢＳＡ与ＣＴＡＢ相互作用的荧光光谱研究　５７　值重新带入到方程式（９）中的括弧内，无限循环下去，直到括　此方法虽然可利用总浓度直接计算，减少误差，但计算步　弧内外的ｎ相同。根据ｌｇ［（Ｆ。一Ｆ）／Ｆ］和ｌｇｔ［Ｑ　］一ｎ［Ｂ　］（Ｆ。　０　一ｎ　）（９）　ｌｇ｛［Ｑ　］＿［Ｂ　］（　—Ｆ）／Ｆ。｝作图，由该曲线的斜率可以得到括　弧外的ｎ值，如果结合位点ｎ不等于１，那么就将括弧外的ｎ　骤复杂。孙艳涛等　利用自编程序进行计算，不仅使计算结果　Ｆ）／Ｆｏ｝的曲线截距，进而可以得到Ｋ　值。常见的计算公式及　更加合理，而且简化了计算过程。首先将ｎｌｇ｛［Ｑ　］一ｎ［Ｂ　］　本文所用方法所得的结果列于表２。表３为利用计算机程序时　（Ｆ。一Ｆ）／Ｆ。｝括弧内的ｎ假设为１，以ｌｇ［（Ｆ。一Ｆ）／Ｆ］对　的具体计算方法。　一表２不同温度下ＢＳＡ与ＣＴＡＢ的结合常数和位点数　Ｔａｂｌｅ　２　Ｂｉｎｄｉｎｇ　ｃｏｎｓｔａｎｔｓ　ａｎｄ　ｓｉｔｅｓ　ｏｆ　ＢＳＡ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｄｒｕｇｓ　ａｔ　２９２　Ｋ　ａｎｄ　３００　Ｋ　２．４作用类型　小分子和蛋白质等生物大分子之间的结合力主要有疏水作　用力、氢键作用力、范德华力和静电引力等。不同物质与蛋白　ＣＴＡＢ与ＢＳＡ结合后的△Ｈ，ＡＳ及ＡＧ的求算结果如表４所　示。从表４可见，ＣＴＡＢ与ＢＳＡ的结合是一个自发过程（ＡＧ＜　０）；ＣＴＡＢ与ＢＳＡ结合的ＡＨ＜０，ＡＳ＜０，可以认为ＣＴＡＢ与　ＢＳＡ分子间主要表现为氢键和范德华力。　表４　不同温度下ＢＳＡ与ＣＴＡＢ结合后的热力学常数　Ｔａｂｌｅ　４　Ｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｏｆ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｆｏｒ　ＢＳＡ　ａｎｄ　ＣＴＡＢ　ａｔ　２９２　Ｋ　ａｎｄ　３００　Ｋ　质结合力的类型是不同的，根据反应前后热力学焓变△Ｈ和熵　变ＡＳ的相对大小，可以判断小分子与蛋白质之间的主要作用　力类型　。△Ｈ＞０，ＡＳ＞０为疏水作用力；ＡＳ＜０，△Ｈ＜０为　氢键和范德华力；ＡＨ＜０，ＡＳ＞０为静电引力。　当温度变化不大时，反应的△Ｈ可以看作一个常数。根据　得到的不同温度下的结合常数及以下各式可得到热力学参数。　１ｎ（ＫＢ２／Ｋ　１）＝（１／Ｔ。一１／Ｔ２）（△Ｈ／Ｒ）　ＡＧ＝一ＲＴｌｎＫ　ＡＧ：ＡＨ—ＴＡＳ　式中：△Ｈ——焓变　△Ｓ——熵变　△Ｇ——自由能变　Ｔ——热力学温度　（１ｏ）　（１１）　（１２）　３　结论　研究了不同温度下ＣＴＡＢ溶液与ＢＳＡ作用的荧光猝灭光　谱，证实了ＣＴＡＢ与ＢＳＡ间的相互作用导致的荧光猝灭为静态　猝灭。比较多个计算结合常数和结合位点公式，结果表明，本　文根据计算机程序方法所得结果比用总浓度代替游离猝灭剂浓　度的计算方法更合理。同时得到的热力学参数，证明ＣＴＡＢ与　Ｒ——大气压常数　Ｔ．和Ｔ２——两个状态下的热力学温度　Ｋ　。和Ｋ　——不同温度下的结合常数　５８　广州化工　版社，１９９０：１２２．　２０１３年ｌ２月　ＢＳＡ之间主要靠氢键和范德华力结合。　参考文献　迟燕华，庄稼，李娜，等．锌试剂与牛血清白蛋白作用机理的研究　［Ｊ］．高等学校化学学报，１９９９，２０（１１）：１６９７—１７０２．　［２］　Ｓａｎｔｏｓ　Ｓ　Ｆ，Ｚａｎｅｔｔｅ　Ｄ，Ｆｉｓｃｈｅｒ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ａ　ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｂｏｖｉｎｅ　［１２］Ｄｅｗｅｙ　Ｔ．Ｇ．Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ａｓｐｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ［Ｍ］．ＮｅｗＹｏｒｋ：Ｐｌｅｎｕｍ，１９９１：１—４１．　［１３］Ｌａｋｏｗｉｃｚ　Ｊ．Ｒ．，Ｗｅｂｂｅｒ　Ｇ．Ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ　ｏｆ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｂｙ　ｏｘｙｇｅｎ　Ｐｒｏｂｅ　ｆｏｒ　ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　ｆｌｕｃｔｕａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ。　１９７３，１２：４１６１—４１６３．　ｓｅｒｕｍ　ａｌｂｕｍｉｎ（ＢＳＡ）ａｎｄ　ｓｏｄｉｕｍ　ｄｏｄｅｃｙｌ　ＳＵｌｆａｔｅ（ＳＤＳ）ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ　［１４］Ｗａｒｅ　Ｗ．Ｒ．Ｏｘｙｇｅｎ　ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ　ｏｆ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｉｎ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ：８．／１　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ［Ｊ］．Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．，　１９６２，６６：４５５—４５８．　ｂｙ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｔｅｎｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｍａｌｌ　ａｎｇｌｅ　Ｘ—ｒａｙ　ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｏｌｌｏｉｄ　ａｎｄ　Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０ｏ３，２６２：４００—４０８．　［３］　王学川，邱白玉．表面活性剂的毒性问题［Ｊ］．Ｅｔ用化学品科学，　２００５，２８（６）：２２—２６．　［１５］Ｈｕ　Ｙ　Ｊ，Ｌｉｕ　Ｙ，Ｓｈｅｎ　Ｘ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　１一　ｈｅｘｙｌｃａｒｂａｍｏｙｌ一５一ｆｌｕｏｒｏａｒａｅｉｌ　ａｎｄ　ｂｏｖｉｎｅ　ｓｅｒｕｍ　ａｌｂｕｍｉｎ［Ｊ］．Ｊ　Ｍｏｌ　Ｓｔｒｎｃｔ，２００５，７３８：１４３—１４７．　［４］　Ｐａｂｏｎ　Ｍ，Ｃｏｒｐａｒｔ　Ｊ　Ｍ．Ｆｌｕｏｒｉｎａｔｅｄ　ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ：ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，　ｅｆｌｕｅｎｔｆ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＦｌｕｏｒｉｎｅＣｈｅｍｉｓｔ￣，２００２，ｌ１４：１４９—　１５６．　［１６］张国文，郭金宝，阙青民，等．葛根素与ＤＮＡ相互作用的光谱法研　究［Ｊ］．分析试验室，２００８，２７（３）：１—３．　『１７］Ｍａｕｒｉｃｉｏ　Ｓ．Ｂ．，Ｇｕｉｌｈｅｒｍｅ　Ｌ．Ｉ．Ｅｆｉｅｃｔ　ｏｆ　ＢＳＡ　ｂｉｎｄｉｎｇ　０ｎ　［５］　石文兵，杨季冬，黄玉明．十六烷基三甲基溴化铵逆胶束介导的化　学发光法问接测定溶解氧［Ｊ］．西南师范大学学报：自然科学版，　２００４，２９（１）：１０２—１０５．　ｐｈｏｔｏｐｈｙｓｉｃａｌ　ａｎｄ　ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ｔｒｉａｒｙｌｍｅｔｈａｎｅ　ｄｙｅｓ［Ｊ］．　Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，１０２（２３）：４６７８—４６８８．　［６］　梁彦秋，孙鹏，刘婷婷，等．荧光光谱法研究十六烷基三甲基溴化铵　与牛血清白蛋白的相互作用［Ｊ］．应用化学，２００７，２４（８）：９６５—　９６７．　［１８］Ｆｅｎｇ　Ｘ．Ｚ．，Ｌｉｎ　Ｚ．，Ｙａｎｇ　Ｌ．Ｊ．，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ａｃｒｉｄｉｎｅ　ｏｒａｎｇｅ　ａｎｄ　ｂｏｖｉｎｅ　ｓｅｒｕｍａｌ　ｂｕｍｉｎ［Ｊ］．Ｔａｌｎｔａａ，１９９８，　４７：１２２３—１２２９．　［７ｊ　安秀林，李庆忠，刘海萍，等．溴化十六烷基三甲基铵与牛血清白蛋　白相互作用的红外光谱研究［Ｊ］．西南师范大学，２００５，３０（４）：　６９９—７ｏ２．　［１９］Ｌａｋｏｓ　Ｚ．，Ｓｚａｒｋａ　Ａ．，Ｋｏｓｚｏｒｕｓ　Ｌ．，ｅｔ　ａ１．Ｊ．Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏ１．　Ｂ：Ｂｉｏ１．，１９９５，２７：５５—６０．　１｛１Ｊ　［２Ｏ］Ｙｉ　Ｐ．Ｇ．，Ｙｕ　Ｑ．Ｓ．，Ｓｈａｎｇ　Ｚ．Ｃ．，ｅｔ　ａ１．Ａｃｔａ　Ｐｈａｒｍ．Ｓｉｎｉｃａ，２０００，　３５：７７４—７７７．　［８］　Ｈｕ　Ｙ　Ｊ，Ｌ　ｉｕ　Ｙ，Ｚｈａｏ　Ｒ　Ｍ，Ｑｕ　Ｓ　Ｓ．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ　ｗｉｔｈ　ｈｕｍａｎ　ｓｅｒｕｍ　ａｌｂｕｍｉｎ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ　ｂｙ　ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃ　ｍｅｔｈｏｄｓ［Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｊ　Ｂｉｄ　Ｍａｃｒｏｍｏｌ，２００５，３７：１２２—１２６．　［２１］Ｂｉ　Ｓ．Ｙ．，Ｑｉａｏ　ｃ．Ｙ．，Ｓｏｎｇ　Ｄ．Ｑ．，ｅｔ　ａ１．Ｓｔｕｄｙ　ｏｆｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｌｆａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗｉｔｈ　ＤＮＡ　ｕｓｉｎｇ　ａｃｒｉｄｉｎｅ　ｏｒａｎｇｅ　ａｓ　ａ　ｌｆｕｏｒｅｓｅｅｎｅｅ　ｐｒｏｂｅ［Ｊ］．　Ｓｅｎｓｏｒｓ　ａｎｄ　Ａｃｔｕａｔｏｒｓ　Ｂ，２００６，１１９：１９９—２０８．　［９］　Ｌｅｒｍａｎ　Ｌ．Ｓ．Ｊ．Ｍｏ１．Ｂｉｄ．，１９６１，３：１８—３０．　ｅｉｎｅｒ　Ｒ．Ｔ．，Ｗｅｉｎｒｙｂ　Ｌ．Ｅｘｃｉｔｅｄ　Ｓｔａｔｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　ａｎｄ　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄ　［１Ｏ］　Ｓｔ［２２］孙艳涛，张玉璞，毕淑云，等．牛血清白蛋白与保泰松和布洛芬相互　作用的荧光光谱研究［Ｊ］．高等学校化学学报，２００９，３０（６）：１０９５一　】Ｏ１１　『Ｍ］．Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ：Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ，１９７１：４０．　陈国珍，黄贤智，许金钩，等．荧光分析法．２版［Ｍ］．北京：科学出　石＼　ｆ　＼Ｉ　／　ｌ＼！　石　穹　石　磊　石　多　盼　石　－、　＼　＿ｌ＇、　石　、．　石　（上接第３８页）　４　结语　参考文献　骆介禹．纤维素基质材料阻燃技术［Ｍ］．北京：化学工业出版社，　２０ｏ３：ｌ８—２０，２３９—２４７．　目前，阻燃纸的发展和应用已经进入了一个新阶段，找到　一种价格低廉且效果长久的纸用阻燃剂已成为重要的研究方　徐程程，刘明友，侯轶，等．纸张阻燃剂的应用与发展［Ｊ］．陕西科　技大学学报，２００５，２３（２）：１２６—１３０．　欧育湘．阻燃剂［Ｍ］．北京：国防工业出版社，２００９：３０６—３１１．　钱立军．新型阻燃剂制造与应用［Ｍ］．北京：化学工业出版社，　２０１３：４５—１８８．　向。而就生产工艺而言，反应型阻燃剂，即磷腈类阻燃剂是纸　阻燃技术未来发展方向。由于这类阻燃剂能够真正的成为纤维　素的一部分，从而赋予其长期稳定的阻燃效果，对环境和人类　危害较小。因此，磷腈类阻燃剂在造纸中的研究和应用前景是　非常诱人的。　Ｈｅｂｅｉｓｈ　Ａ，Ｗａｌｙ　Ａ，ｂｏｕ—Ｏｋｅｉｌ　ＡＭ．Ｆｌａｍｅ　ｒｅｔａｒｄａｎｔ　ｃｏｔｔｏｎ［Ｊ］．Ｆｉｒｅ　Ｍａｔｅｒ．，１９９９，２３（３）：１１７—１２３．