miR-338-3p通过调节细胞周期蛋白D1影响HBx缺失突变体(HBx-d382)介导的肝细胞增殖

微生物与感染中遗传稳定［Ｊ３．病毒学报，２０１１，２７（２）：１３５—１４３．　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＭｉｃｒｏｂｅｓ　ａｎｄ　Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｈ　２５，２０１３，８（１）：２－８　ｂｙ　ａ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｖａｃｃｉｎｉａ　ｖｉｒｕｓ．Ｉｎ：Ｃｈａｎｏｃｋ　ＲＭ，Ｌｅｒｎｅｒ　［５３］Ｃｈｅｎ　Ｈ，Ｃｈｕａｉ　Ｘ，Ｄｅｎｇ　Ｙ，Ｗｅｎ　Ｂ，Ｗａｎｇ　Ｗ，Ｘｉｏｎｇ　Ｓ，　Ｒｕａｎ　Ｌ，Ｔａｎ　Ｗ．Ｏｐｔｉｍｉｓａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｉｍｅ－ｂｏｏｓｔ　ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｍｉｃｅ　ｕｓｉｎｇ　ｎｏｖｅｌ　ｐｒｏｔｅｉｎ－ｂａｓｅｓ　ａｎｄ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｖａｃｃｉｎｉａ　ＲＡ，Ｂｒｏｗｎ　Ｆ，Ｇｉｎｓｂｅｒｇ　Ｈ．ｅｄｓ．Ｖａｃｃｉｎｅｓ　ＥＭ］．ＮＹ　Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ，１９９＂、，２９　・￡９　［５７］郭可謇，阮力，王晓沽，伊瑶，刘崇柏，任银海，张玉成，刘　新海，高栓景，杨景伟，朱既明．以痘苗病毒为载体的甲型肝　（Ｔｉａｎｔａｎ）一ｂａｓｅｄ　ＨＢＶ　ｖａｃｃｉｎｅ　ＬＪｊ．ＰＬｏＳ　Ｏｎｅ，２０１２，７（９）：　ｅ４３７３０．　炎基因工程疫苗初步人体免疫效果的观察ＬＪ］．中华微生物　学和免疫学杂志，１９９２，１２（３）：１３７—１４０．　［５４］Ｇｕ　ＳＹ，Ｈｕａｎｇ　ＴＭ，Ｒｕａｎ　Ｌ，Ｃｈｕ　ＣＭ，Ｌｕ　Ｈ，Ｗｏｌｆ　Ｈ．　Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ　ｏｆ　ａ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｖａｃｃｉｎｉａ　ｖｉｒｕｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ　Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ　ｖｉｒｕｓ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ａｎｔｉｇｅｎ．Ｉｎ：Ｃｈａｎｏｃｋ　ＲＭ，Ｌｅｒｎｅｒ　ＲＡ，Ｂｒｏｗｎ　Ｆ，Ｇｉｎｓｂｅｒｇ　［５８］Ｒｕａｎ　Ｌ，Ｌｉｕ　ＧＱ，Ｃｈｕ　ＣＭ．Ａ　ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ　ｈｕｍａｎ　ｔｒｉａｌ　ｏｆ　ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ　ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｖａｅｃｉｎｉａ　ｖｉｒｕｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　ｓｕｒｆａｃｅ　ａｎｔｉｇｅｎ　ａｎｄ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　ｓｕｂｕｎｉｔ　ｖａｃｃｉｎｅ．Ａｂｓｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ｐａｐｅｒｓ　Ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ　ａｔ　ｔｈｅ　１９９１　Ｍｅｅｔｉｎｇ　ｏｎ　Ｍｏｄｅｒｎ　Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ　ｔｏ　Ｎｅｗ　Ｖａｃｃｉｎｅｓ：　Ｈ．ｅｄｓ．Ｖａｃｃｉｎｅ［Ｍ］．ＮＹ：Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ。１９９２，３４９—３５５．　［５５］Ｇｕ　ＳＹ，ＨｕａｎｇＴＭ，Ｒｕａｎ　Ｌ，ＭｉａｏＹＨ，Ｌｕ　Ｈ，ＣｈｕＣＭ，　Ｍｏｔｚ　Ｍ，Ｗｏｌｆ　Ｈ．Ｏｎ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ＥＢＶ　ｖａｃｃｉｎｅ　ｔｒｉａｌ　ｉｎ　ｈｕｍａｎｓ　Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡＩＤＳ［Ｍ３．ＮＹ：Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　ａｂＬｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ，１９９１，５９．　ｕｓｉｎｇ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｖａｅｃｉｎｉａ　ｖｉａｌｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｍａｊｏｒ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ａｎｔｉｇｅｎ．Ｉｎ：Ｔｕｒｓｚ　Ｔ，Ｐａｇａｎｏ　ＪＳ，Ａｂｌａｓｈｉ　ＤＶ，　ｄｅ　Ｔｈ６　Ｇ，Ｌｅｎｏｉｒ　Ｇ，Ｐｅａｒｓｏｎ　ＧＲ．ｅｄｓ．Ｔｈｅ　Ｅｐｓｔｅｉｎ—Ｂａｒｒ　［５９］ＲｕａｎＬ，ＹａｎｇＫＪ，ＳｕｎＺＨ，ＺｈｕＣ，ＬｕＲＪ，ＷｕｗＴ，Ｒｅｎ　ＹＨ，Ｚｈｕ　ＪＭ，Ｃｈｕ　ＣＭ．Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｔｒｉａｌ　ｏｆ　ｍｅａｓｌｅｓ－ｖａｃｃｉｎｉａ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｗｉｔｈ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　２．Ａｂｓｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ｐａｐｅｒｓ　Ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ　ａｔ　ｔｈｅ　１９９５　Ｍｅｅｔｉｎｇ　ｏｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ　ｔｏ　ｔｈｅ　Ｃｏｎｔｏｏｌ　ｏｆ　Ｖｉｕｓｒ　ａｎｄ　Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ　ＥＭ］．Ｍｏｎｔｒｏｕｇｅ，Ｆｒａｎｃｅ：　Ｃｏｌｌｏｑｕｅ　ＩＮＳＥＲＭ／Ｊｏｈｎ　Ｌｉｂｂｅｙ　Ｅｕｒｏｔｅｘｔ　Ｌｔｄ．，１９９３，２２５：　５７９—５８４．　Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｍ］．ＮＹ：Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　ａｂＬｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ，１９９５．　［５６３　Ｇｕｏ　ＫＪ，Ｇａｏ　Ｆ，Ｌｉｕ　ＣＢ，Ｒｕａｎ　Ｌ，Ｃｈｕ　ＣＭ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ａ　ｖｉｒｕｓ　ａｎｔｉｇｅｎｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　（收稿日期：２０１３—０３—１０）　＋一＋一＋一十一＋一＋一＋一＋一＋一＋一十一＋　＋一＋－＋一＋一＋一＋－＋一＋一＋一＋一＋一十。　・国外研究信息・　ｍｉＲ－３３８－３ｐ通过调节细胞周期蛋白Ｄｌ影响ＨＢｘ缺失突变体（ＨＢｘ－ｄ３８２）介导的肝细胞增殖　乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ整合和ＨＢｘ蛋白缺失突变发生在ＨＢＶ阳性肝癌患者中，ＨＢｘ基因突变的　Ｃ端缺失与肝癌发生密切相关。鉴于以前发现ＨＢｘ．ｄ３８２缺失突变体（缺失３８２￣４００　ｎｔ）可下调ｍｉＲ一３３８－　３ｐ表达，该研究旨在检测ｍｉＲ．３３８．３ｐ在Ｉ－ＩＢｘ．ｄ３８２介导的肝细胞增殖中的作用。通过脂质体２０００转染建　立ＨＢｘ基因表达的Ｌ０２细胞。转染ｍｉＲ－３３８．３ｐ类似物或抑制剂至Ｌｏ２／ＨＢｘ—ｄ３８２细胞和Ｌｏ２／ＨＢｘ细　胞，ｍｉＲ．ＮＣ作为对照ｍｉＲＮＡ。电脑分析ｍｉＲ．３３８．３ｐ潜在的靶蛋白，提示ｍｉＲ一３３８．３Ｐ可靶向细胞周期调　节蛋白Ｄ１。为确认细胞周期蛋白Ｄ１受ｍｉＲ．３３８．３Ｐ的负调控，该研究构建了与ｍｉＲ．３３８－３ｐ结合的细胞周　期蛋白Ｄ１的３　非翻译区（３　ＵＴＲ）野生型和突变体荧光素酶报告系统。通过荧光定量聚合酶链反应（ＰＣＲ）　和蛋白免疫印迹法检测细胞周期蛋白Ｄ１表达，采用流式细胞仪、ＥｄＵ掺入法及软琼脂集落形成分析细胞增　殖活性。结果显示，ＨＢｘ．ｄ３８２促进ＬＯ２细胞增殖，上调细胞周期蛋白Ｄ１表达。ｍｉＲ－３３８—３ｐ的表达抑制　Ｌｏ２／ＨＢｘ．ｄ３８２细胞（和Ｌｏ２／ＨＢｘ细胞）增殖，也下调细胞周期蛋白Ｄ１表达。在细胞周期蛋白Ｄ１的３　ＵＴＲ区２个假定的ｍｉＲ．３３８．３ｐ结合位点中，第２个位点（２　３９７￣２　４０３　ｎｔ）是抑制所必需的。结果提示，　ＭＩＲ一３３８．３ｐ可通过结合到细胞周期蛋白Ｄ１的３　ＵＴＲ区２　３９７￣２　４０３　ｎｔ，下调细胞周期蛋白Ｄ１表达。下　调ｍｉＲ－３３８．３ｐ表达能促进ＬＯ２／ＨＢｘ和ＬＯ２／ＨＢｘ．ｄ３８２突变的肝细胞增殖，而对ＬＯ２／ＨＢｘ－ｄ３８２细胞效　果更显著。该研究阐明了一种新的机制，从一个新的ｍｉＲＮＡ调控角度发现ＨＢｘ基因缺失突变体比ＨＢｘ　蛋白具有更快诱导肝癌的倾向。　（Ｆｕ　Ｘ，ｅｆ　ａ１．ＰＬｏＳ　Ｏｎｅ，２０１２，７（８）：ｅ４３２０４．）