共轭亚油酸检测方法
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Cognis GmbH， Standort Illertissen AMIA-000010 安全-健康-环境-质量 分析方法E- IA -000010 （第二版）第二版） 用气相色谱法定量测定下列的游离的脂肪酸用气相色谱法定量测定下列的游离的脂肪酸 C16:0，棕榈酸 C18:0，硬脂酸 C18:1 c9，油酸 C18:2 c9, c12，亚油酸 C18:2, 共轭亚油酸（总和） C18:2, c9,t11，共轭亚油酸异构体 C18:2, t10,c12，共轭亚油酸异构体 C18:2, c,c，共轭亚油酸异构体 C18:2, t,t，共轭亚油酸异构体 脂肪酸乙酯 CLA-低聚物 IA-001010 前版本：1071 IA-002010 前版本：1171 IA-003010 前版本：1271 IA-004010 前版本：1371 IA-005010 前版本：1471 IA-006010 前版本：1571 IA-007010 前版本：1671 IA-008010 前版本：1771 IA-009010 前版本：1871 IA-010010 前版本：1971 IA-011010 前版本：2071 含有游离脂肪酸的混合物 替代分析方法：替代分析方法：E-IA-1071-2071,第一版本 有效期起始日：有效期起始日： 2004年07月23日 （硅烷化后使用非极性的色谱柱） 归档：归档：2009年07月 内容目录：内容目录： 1. 用途和/或应用范围·······················································································2 2. 定义·················································································································2 3. 概述·················································································································2 4. 试剂·················································································································2 5. 仪器·················································································································2 6. 取样·················································································································2 7. 程序·················································································································2 8. 评估·················································································································3 9. 文献·················································································································4 批准人： 1. 用途和/或应用领域 本方法用于定量检测脂肪酸混合物的组成，特别是定量检测共轭亚油酸（CLA）的组成及其副产物。这个方法没有关于测定C18:2 c11,t13脂肪酸的含量的信息。 2. 定义 “Oligomers”-即低聚物，可以理解为在脂肪酸共轭反应过程当中的高分子量的产物（其组成还没有确定）。 3. 概要 概要 样品在干燥嘧啶中，在添加了MSTFA的作用下发生硅烷化反应，硅烷化反应的产物通过气相色谱的毛细管柱进行分离，使用FID检测器并且进行定量。定量结果使用面积百分比（A%）进行表示。 4. 试剂 试剂 （1）干燥嘧啶(pyridine)，水分含量不超过0.01% （2）MSTFA（N-Methyl-N-T-rimethyllilyl-trifluoraceramide） 5. 仪器和材料 仪器和材料 5.1 样品制备需要的仪器5.1 样品制备需要的仪器 样品制备需要的仪器 （1）1.5ml的GC自动进样瓶。 （2）加热块 5.2 气相色谱5.2 气相色谱GC，GC， （1）气相色谱仪，GC-系统6850 （2）自动进样器6850 （3）色谱柱： 毛细管DB 5HT，15m， 0.32mm I.D., 0.1um膜厚度 （4）检测器： FID （5）进样器： 分流进样器 6. 取样 取样 按照标准操作规程进行取样。 7. 操作程序 操作程序 7.1. 安全：安全： 应注意处理危险物品的具体细则。技术、组织和个人安全测定方法应遵守。 7.2. 样品制备：样品制备： （1）称取14mg的样品（精确到0.01mg）加入到GC自动进样器的安瓿瓶中（单个测试）。 （2）加入1ml的嘧啶和100ul的MSTFA。 （3）放在80℃的加热块上加热10min。 （4）不需要任何的前期稀释，直接将样品进样进行检测。 7.3. 气相色谱法条件 气相色谱法条件 载气： 氢5.0 注射器温度： 330℃ 检测器温度： 360℃ 尾吹气（Make-up Gas）： 氮气 5.0 10ml/min 燃料气体： 人工空气； 300ml/min 氢5.0； 30ml/min 分流： 1:35 进样量 0.2ul 载气的程序：载气的程序： 恒速： 2.5ml/min 气体保护时间(GasSaverTime)= 3.5[min] 气体保护流速(GasSaverFlow)= 20.0[ml/min] 升温程序：升温程序： 速率[℃/min]： 10.0 8. 评估 评估 8.1 计算8.1 计算：计算： 使用相应的适当的对照品可以鉴别各个单个的脂肪酸。 对照品： 脂肪酸C08-C24（双碳原子数的脂肪酸） 脂肪酸C18:1, 脂肪酸C18:2, 脂肪酸C18:3 脂肪酸C18:2,共轭，c9,t11 脂肪酸C18:2,共轭, t10,c12 单个组分的含量表示面积百分比（A%）的计算公式如下： 温度[℃]： 80 350 保持时间[min] 0.50 2.00 (结束：总的保留时间为：29.5min)。 Mi: 单个组分的含量表示面积百分比（A%）, Sum of all peak-areas: 所有峰面积的和。 Peak-area component i: 单个组分的峰面积。 测得结果保留一个小数点。 IA-（总和）[IA-005010 FA C18:2 CLA（Sum）]： IA-005010 脂肪酸005010 脂肪酸 C18:2 脂肪酸 C18:2 共轭亚油酸 C18:2 共轭亚油酸总和） 参数的总和： - 脂肪酸C18:2,共轭亚油酸，c9,t11 - 脂肪酸C18:2,共轭亚油酸， t10,c12 - 脂肪酸C18:2,共轭亚油酸， c,c（总和） - 脂肪酸C18:2,共轭亚油酸， t,t（总和） IA-IA-011010共轭亚油酸-共轭亚油酸-低聚物：低聚物： 所有相关的峰的面积百分比的总和。 IA-IA-010010脂肪酸乙酯：脂肪酸乙酯： 总的脂肪酸乙酯的含量不能直接检测，因为共轭亚油酸的乙酯在气相色谱柱中被游离的脂肪酸覆盖了。 油酸乙酯与油酸在气相色谱图中两个峰分开了，姑且假定认为,脂肪酸和少含量的脂肪酸乙酯（<2%）的组成分布与油酸乙酯与油酸的比例相同，按照下面的公式进行计算 ： 计算的结果仅仅是一种近似的估计计算。 Content Fatty Acid Ethyl Ester[A%] – 脂肪酸乙酯的面积百分比 Content Oleic Acid Ethyl Ester[A%] – 油酸乙酯的面积百分比 Content Oleic Acid [A%] -油酸的面积百分比 9. 附录 附录 无