兽用鸡脾转移因子的多肽组成研究

２０１４，４８（２）：２３—２７／黄迪海，等　中国兽药杂志　・２３・　兽用鸡脾转移因子的多肽组成研究　黄迪海　，刘霞　，盛晓丹　，董玉兰　，綦学慧　，张从敬　。，徐秀荣　，　张再辉　，秦卓明１，２，３　（１．山东省健牧生物药业有限公司，济南２５０１００；２．济南市动物生物药品工程技术研究中心，济南２５０１００；　３．山东省农业科学院家禽研究所，济南２５００２３；４．中国农业大学，北京１０００９４）　［收稿日期］２０１３—１０—１８［文献标识码］Ａ［文章编号］１００２—１２８０（２０１４）０２－００２３—０５［中图分类号］￥８５９．７９　［摘　要］　为了研究兽用鸡脾转移因子的多肽组成，利用冻融一透析法制备兽用鸡脾转移因子溶　液，分别采用福林酚法测定多肽含量，基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法（ＭＡＬＤＩ—Ｔ０Ｆ—ＭＳ）测　定分子量，液相色谱一质谱联用法（ＬＣ—ＭＳ）分析多肽组成，脱Ｅ受体法测定转移因子活力。鸡脾转　移因子溶液多肽含量为１５７０．８　ｂ￣ｇ／ｍＬ，活力为１０．９２％，ＬＣ－ＭＳ法测得多肽分子量为８００～７４７６　Ｄａ，　多肽种类５８１种，包括Ｔ细胞凋亡抑制相关蛋白（ＴＩＡＬ１）等多种生物活性蛋白。初步揭示了兽用鸡　脾转移因子的多肽组成．有助于进一步研究其有效成分和作用机理。　［关键词］　转移因子；多肽；液相色谱一质谱分析　基金项目：国家自然基金资助项目（３１３７２３３２）；济南市青年科技明星计划项目（２０１２０１２８）　作者简介：黄迪海，从事新兽药研发方面工作。　通讯作者：秦卓明。Ｅ－ｍａｉｌ：ｑｉｎｚｍ１９９７＠１６３．ｅｏｍ　制备了效价较高的抗ｓｃ的多克隆抗体，以期建立　特异的检测粘膜组织中ＳＩｇＡ免疫组织化学方法，　为下一步开展粘膜免疫激活剂对粘膜组织中ＳＩｇＡ　分泌的影响奠定物质基础。　参考文献：　『１］付金龙，刘沛．ｓｃ结构、功能及其临床研究进展［Ｊ］．世界华　人消化杂志，２００９，（３）：２９３—２９８．　法的研究进展『Ｊ１．东北农业大学学报，２００８，３９（１Ｏ）：１３１－１３５．　ｆ９］　杨倩，毛卫华．鸡和猪分泌型免疫球蛋白Ａ结构蛋白的比　较［Ｊ］．畜牧与兽医，２００３，３５（１０）：５－７．　『１Ｏ］梁靖坤，王继芳，曹荣峰．奶牛初乳ｓＩｇＡ的提纯与电泳分析　［Ｊ］．中国农学通报，２００９，２５（１５）：６－８．　１１］韩建保，王开功，于洪洋．鸡ＳＩｇＡ的提取鉴定及其抗体制备　［Ｊ］．贵州畜牧兽医，２００８，３２（３）：５－７．　［１２］周盛华，赵红宇，朱洪艳，等．牛初乳中ｓＩｇＡ的分离纯化　『Ｊ＿．中国乳品工业，２０１ｌ，３９（６）：１２—１３．　［２］　孙立，马健飞，冯江敏，等．尿液ｓＩｇＡ含量测定在非感染性肾　脏疾病中的意义［Ｊ］．中国医科大学学报，２ＯＯ２，（２）：１４６—１４８．　『３］　张宝中．分泌型免疫球蛋白Ａ的研究进展［Ｊ］．生物技术通　讯，２００９，２０（２）：２６３—２６５．　［１３］周华波，房慧伶，李红蕾，等．鸡ＳＩｇＡ的纯化及兔抗鸡ｓＩｇＡ　抗体的制备『Ｊ］．广西农业生物科学，２００６，１０（１２）：２４－２６．　［１４］姚永豪，高学军，刘晓飞，等．牛初乳ｓＩｇＡ的分离纯化［Ｊ］．　乳业科学与技术，２００７，２５（７）：４３－４４．　［１５］冯志新，王海燕，刘茂军，等．猪初乳中ｓＩ　纯化及其单抗　制备［Ｊ］．江苏农业学报，２０１１，２７（５）：１０２６—１０３０．　『１６］陈斌．ｓＩｇＡ分泌片的原核表达及抗分泌片单克隆抗体的制　备『Ｄ］．江西农业大学．２０１１．　［４］　曾常茜．分泌型ＩｇＡ在黏膜抗感染中的作用［Ｊ］．北华大学学　报（自然科学版），２００５，６（１）：３３－３５．　［５］唐庆娟，戚欣，耿美玉．多聚免疫球蛋白受体（ｐＩｇＲ）在粘膜　免疫中的重要功能『．ＩＩ．中国生物化学与分子生物学报，　２００７，２３（９）：７２４—７２９．　『１７］崔巍，孙翠明，刘沛．谷氨酰胺对肠粘膜上皮细胞合成多　［６］　胡正强，黎光，江咏梅，等．ＳＩｇＡ分泌片分离、纯化研究［Ｊ］．　微生物学免疫学进展，２００２，３０，（２）：３５－３８．　聚免疫球蛋白受体的影响『Ｊ］．陕西医学杂志，２０１１，４０　（１１）：１４５２—１４５４．　［７］吴胜昔，姜平，李玉峰．抗猪ｓＩｇＡ单克隆抗体的研制［Ｊ］，　中国兽医学报，２００５，２５（４）：３９０－３９３．　『８］　刘晓飞，高学军，姚永豪，等．牛初乳ｓＩｇＡ分离纯化及其检测方　『１８］刘茂柯．猪ＳＩｇＡ直接ＥＬＩＳＡ检测方法的建立及对猪肺炎支原体　灭活疫苗免疫效果的评估［Ｄ］．四川：四川农业大学，２０１０．　（编辑：李文平）　－２４・　中国兽药杂志　２０１４，４８（２）：２３—２７／黄迪海，等　Ｔｉｌｅ　Ｄｉｖｅｒｓｅ　Ｒ　ｐｅ　ＨＵＡＮＧ　Ｄｉ—ｈａｉ　，ＬＩＵ　Ｘｉａ’　Ｃ【艇　０ｆ　ｔｈｅ　Ｏｄｃｋ＿ｅｎ　Ｓｐｌｅｅｎ　ＴＦａｌ￣ｅｒ　Ｆａｃｔｏｒ　ｉｎ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　，ＳＨＥＮＧ　Ｘｉａｏ－ｄａｎ　，ＤＯＮＧ　Ｙｕ－ｌａｎ　，ＱＩ　Ｘｕｅ－ｈｕｉ，ＺＨＡＮＧ　Ｃｏｎｇ－ｊｉｎｇ　一，　ＸＵ　Ｘｉｕ—ｒｏｎｇ　一，ＺＨＡＮＧ　Ｚａｉ－ｈｕｉ　，ＱＩＮ　Ｚｈｕｏ—ｍｉｎｇ　＇　，。　（１．Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｊｉａｎｍｕ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｃｏ．，　ｄ．，Ｊｉｎａｎ　２５０１００　Ｃｈｉｎａ；　２．Ｊｉｎａｎ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｒｅｓｅａｒｃｈｆｏｒ　Ａｎｉｍａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｊｉｎａｎ　２５０１００　Ｃｈｉｎａ；　３．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆＰｏｕｌｔｒｙ　Ｓｃｉｅｒｗｅ　Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｉｎａｎ　２５００２３　Ｃｈｉｎａ；４．Ｃｈｉｎａ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｏ＇ｉｎｇ　１０００９４　Ｃｈｉａ）ｎ　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ　ｍａｋｅ　ｃｌｅａｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｉｖｅｒｓｅ　ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｈｉｃｋｅｎ　ｓｐｌｅｅｎ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｆａｃｔｏｒ　ｉｎ　ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ．Ｆｉｒｓｔｌｙ，ｆｒｅｅｚｅ　ｔｈａｗｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｍａｋｉｎｇ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｆａｃｔｏｒ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｃｈｉｃｋｅｎ　ｓｐｌｅｅｎ．　Ｓｅｃｏｎｄｌｙ，ｔｈｅ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ａｎｄ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ，ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ，ａｎｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｍａｔｒｉｘ　—ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｌａｓｅｒ　ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｏｆ　ｌｆｉｇｈｔ　ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ—ＭＳ），ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｍＬ，ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗａｓ　１０．９２％，ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ＬＣ—ＭＳ　—ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＬＣ—ＭＳ）ａｎｄ　Ｅ　ｒｏｓｅｔｔｅ　ｍｅｔｈｏｄ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｈｉｃｋｅｎ　ｓｐｌｅｅｎ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｆａｃｔｏｒ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ　ｗａｓ　１５７０．８　ｗｅｒｅ　ｒａｎｇｅｄ　ａｒｏｕｎｄ　８００—７４７６　Ｄａ．Ｔｈｅｒｅ　ｗｅｒｅ　５８　１　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ　ｓｐｅｃｉｅｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　Ｔ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｏｆ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ（ＴＩＡＬ１）ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ　ａｃｔｉｖｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｆａｃｔｏｒ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｃｈｉｃｋｅｎ　ｓｐｌｅｅｎ　ｗｏｕｌｄ　ｈｅｌｐ　ＵＳ　ｔｏ　ｄｉｓｃｏｖｅｒ　ｍｏｒｅ　ａｃｔｉｖｅ　ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｉｎ　ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ，ａｎｄ　ｍｏｒｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｗｏｒｋｓ　ａｒｅ　ｗａｒｒａｎｔｅｄ　ｔｏ　ｂｅ　ｆｉｎｉｓｈｅｄ　ｉｎ　ｆｕｔｕｒｅ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｆａｃｔｏｒ；ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ；ＬＣ—ＭＳ　兽用鸡脾转移因子（Ｔｒａｎｓｆｅｒ　Ｆａｃｔｏｒ，ＴＦ）是具　有免疫活性的Ｔ淋巴细胞在抗原或丝裂原的刺激　产批号为：２０１２１１０１、２０１２１１０２、２０１２１１０３：绵羊静　脉血；新鲜猪胸腺；乙腈、超纯水，色谱纯；ＴｒｉｓＨＣＬ、　ＮａＣ１、ＫＨ，ＰＯ　等试剂均为分析纯。　１．２　仪器　高速组织捣碎机，质谱仪（ＬＴＱ—　Ｖｅｌｏｓ），分光光度仪（Ｐ一２０００），医用低速离心机，恒　温水浴锅，显微镜（ＸＳＳ一２Ａ）。　１．３方法　下释放的一类可透析的小分子多肽，具有增强淋巴　细胞转化，提高机体免疫功能的作用。ＴＦ可将供体　的细胞免疫功能特异地转给受体，而且能转移包括　真菌、细菌、病毒、寄生虫、组织相容性抗原和肿瘤抗　原等多种抗原的细胞免疫，是一种新型免疫制剂［１］。　自２０世纪５０年代首次发现ＴＦ至今，国内外　研究人员对其进行了广泛深人的研究和应用，发现　ＴＦ具有分子质量小、无毒、无抗原性、不引起过敏　１．３．１　多肽含量测定按照福林酚Ｌｏｗｒｙ法＿８］测　定兽用鸡脾转移因子样品溶液的多肽含量。　１．３．２分子量测定　采用ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ—ＭＳ法，检　反应、不产生特异性抗体，且可超越种属界限应用　等优点，具有治疗免疫缺陷［２］、恶性肿瘤＿３］、感染性　疾病　等作用。１９７９年以后，国内外逐渐将ＴＦ应　测条件为固体激光源波长３５５　ｎｍ．离子类型为正离　子，检测方式为反射方式（飞行管长２．７　ｍ．加速电　压２０　ｋＶ，反射电压２３　ｋＶ）和线性方式（飞行管长　用于兽医免疫和临床治疗。２０１１年，我国批准兽用　转移因子口服溶液上市。ＴＦ在防治动物传染　１．２２　ｍ，加速电压ｋＶ），基质为ＣＨＣＡ和ＳＡ。试验　样品溶液ｚｉｐｔｉｐ脱盐后ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ—ＭＳ分析，根　病［　、增强机体免疫［　、提高疫苗效果［　等方面效　果确切，但其多肽组成不明确，在调控肠道粘膜屏障　中的作用机理不清楚，严重制约ＴＦ的应用　本研究　旨在探索鸡脾转移因子的多肽组成，为进一步研究　据分子量图谱确定样品分子量。　１．３．３　多肽组成分析　１．３．３．１　样品处理样品用１０　ｋＤ超滤管离心超　滤，通过１０　ｋＤ超滤管的小肽不用酶解，直接用质谱　分析，选择ｎｏ　ｅｎｚｙｍｅ。未通过１０　ｋＤ超滤管的样品，　其有效成分和作用机理提供技术支持。　１材料与方法　将超滤管反转后离心，取样品约３０　ｇ，加入３０　Ｌ　ＳＴＤ　ｂｕｆｆｅｒ，沸水浴５　ｍｉｎ，冷却至室温；加入２００　Ｌ　ＵＡ　ｂｕｆｆｅｒ（８　ｍｏｌ／Ｌ　Ｕｒｅａ，１５０　ｍｍｏｌ／Ｌ　ＴｒｉｓＨＣ１　ｐＨ８．５）　１．１　材料兽用鸡脾转移因子．由山东省健牧生　物药业有限公司生产，多肽含量≥ｌｍｇ／ｍＬ．样品生　２０１４，４８（２）：２３～２７／黄迪海，等　中国兽药杂志　混匀，转入３０　ｋＤ超滤离心管，离心；加入２００￣Ｌ　ＵＡ　ｂｕｆｆｅｒ离心，弃滤液。加人１００　ＩＬＬ　ＩＡＡ（５０　ｍｍｏｌ／Ｌ　ＩＡＡ　ｉｎ　ｕＡ），振荡１　ｍｉｎ，避光室温３０　ｍｉｎ，离心：加入　１００　ｕＬ　ＵＡ　ｂｕｆｆｅｒ，离心，重复２次；加人１００　２５　ｍｏｌ／ＬＮＨ　ＨＣＯ　，离心，重复２次；加入４０　Ｌ　Ｔｒｙｐｓｉｎ　ｂｕｆｆｅｒ（２　Ｉｘｇ　Ｔｒｙｐｓｉｎ　ｉｎ　４０　Ｉ＊Ｌ２５　ｍｏｌ／Ｌ　ＮＨ４　ＨＣＯ　），振荡１　ｍｉｎ，３７　ｏＣ　１６～１８　ｈ。换新收集管，离　心。收集滤液，进行质谱分析，选择Ｔｒｙｐｓｉｎ。　１－３．３．２毛细管高效液相色谱方法　Ａ液为０．１％　甲酸的水溶液，Ｂ液为０．１％甲酸的乙腈水溶液（乙　腈为８４％）。色谱柱以９５％的Ａ液平衡后，样品由　自动进样器上样到Ｔｒａｐ柱。０～１０５　ｍｉｎ，Ｂ液线性　梯度从４％到５０％：１０５～１１４　ｍｉｎ，Ｂ液线性梯度从　５０％到１００％：１１４～１２０　ｍｉｎ，Ｂ液维持在１００％。　１．３．３．３质谱数据采集多肽和多肽碎片的质量电　荷比按照下列方法采集：每次全扫描后采集２０个碎　片图谱（ＭＳ２　ｓｃａｎ）。　１．３．３．４数据分析原始文件用ＢＩＯＷＯＲＫＳ软件搜　索相应的数据库。查询ＩＰＩ数据库ＣＨＩＣＫ（ｖ３．８１）分　类系统，得到鉴定的蛋白质结果。　１．３．４　活力测定　按照国家卫生部新药转正标　准西药第四十七册中脱Ｅ受体法［８］，制备脱Ｅ受　体胸腺Ｔ细胞悬液，使最终浓度为每１　ｍＬ含３×　１０　～５×１０　个细胞：制备绵羊红血球悬液，使最终　浓度为脱Ｅ受体胸腺Ｔ细胞悬液浓度的８～１０　倍：取供试品，用Ｈａｎｋ’Ｓ液配制成每１　ｍＬ中含　１　ｍｇ的供试品溶液；取小试管６支，其中３支各加　Ｈａｎｋ’Ｓ液０．１　ｍＬ作为对照管，另３支各加供试品　溶液０．１　ｍＬ作测定管，每管中各加脱Ｅ受体胸腺　Ｔ细胞悬液０．２　ｍＬ，３７　保温１　ｈ，加绵羊红血球　悬液０．２　ｍＬ，混匀，５００　ｒ／ｍｉｎ离心３　ｍｉｎ，４　ｏＣ冰　箱过夜；次日取出，弃上清液，每管中各加固定液　１滴，轻轻摇匀，静置１０　ｍｉｎ，加染色液２滴并摇　匀．静置１５　ｍｉｎ后开始计数。显微镜视野中淡蓝　量’４７００　Ｒｅｌｆｅｃｔｏｒ　Ｓｐｅｃ　１　ＭＣ［ＢＰ　１　１９７．６，８２７０］　９　７．　￣￣＇４－　ｅｒａ　８　７　６　‘　‘　‘　。。　’、　’　７ｖＩａｓｓ（ｍ／ｚｙ‘‘　‘　‘’、　。　、　‘　图２　Ｇ１—８００—８０００一反射模式的分子量图谱　色的较大的细胞为淋巴细胞，共数计数板１６个大　方格上所有淋巴细胞的个数（不少于２００个），统　计其中的Ｅ玫瑰花结形成的细胞数（结合３个以　上绵羊红细胞的淋巴细胞），计算结花百分率，取　平均值。即为供试品管或对照管的平均数。样品　活力＝供试品测定管Ｅ玫瑰花结百分率一对照管　Ｅ玫瑰花结百分率。　２结果与分析　２．１　多肽含量用紫外一可见分光光度法，在６５０　ｎｍ　波长处测定不同浓度牛血清白蛋白标准品溶液的　吸光度，获得标准曲线（见图１），标准方程为：　Ｙ＝０．０１２５ｘ＋０．００３８（Ｒ　＝０．９９８６）。样品ｌＯｘ６倍　稀释液吸光度检测值分别为０．３３０、０．３３２、０．３３１，带人标　准方程，计算，多肽浓度分别为２６．１０　ｍＬ、　２６．２６　ｍｌＪ、２６．１８　ｍＬ，平均值为２６．１８　ｇ／ｍＬ，　样品原液多肽含量平均值为１５７０．８　ｇ／ｍＬ，符合兽　用转移因子口服溶液国家标准多肽含量≥１　ｍｇ／ｍＬ　的规定　０・　０・　０．　０・　擎ｏ．　ｏ．　０．　０　１０　２０　３０　４０　５０　蛋白浓度／（１ａｇ　ｍＬ　）　图１标准曲线图　２．２分子量反射模式检测多肽分子量范围为８００～　８０００　Ｄａ．获得多种小肽。小肽分子量为８００．２１７５～　７４７５．９９８０　Ｄａ，主要集中于８００～４ＯＯＯ　Ｄａ（图２）；线性模　式检测分子量范围为４Ｏ００～２００００　Ｄａ，获得分子量为　６０１７．６６１１　Ｄａ和８２７９．９３０７　Ｄａ的两个多肽（图３）。　图３　Ｇ１　４０００　２００００一线性模式的分子量图谱　２０１４，４８（２）：２３～２７／黄迪海，等　中国兽药杂志　・２７・　３．２　转移因子分子量及其分布　转移因子的分子　量一般在３０００～１５０００　Ｄａ。本试验利用质谱法分　析测定鸡脾转移因子分子量分布范围为８００　Ｄａ～　８２８０　Ｄａ，主要为分布于４０００　Ｄａ以下。虽然利用上　述方法测定的分子量都在１００００　Ｄａ以下，但是在　多肽组成测定试验中，仍然分析到了６９种分子量　大于１００００　Ｄａ的多肽，具体原因有待进一步研究。　３．３　转移因子功能与组分的关系　转移因子具有　增强细胞免疫ｌ】。　和体液免疫¨引，增强非特异性　免疫　】　、抗免疫抑制［１７１等作用，但具体是何种成分　发挥作用暂无报道。本试验在检测确定鸡脾转移　因子生物活性的基础上，对其所含多肽进行分析，　证实了转移因子含有与细胞结构和运动相关的肌　动蛋白，含有与免疫相关的Ｔ细胞凋亡抑制相关蛋　白、胸腺肽、抑制因子活化蛋白等，含有与生长发育　相关的转录因子蛋白，含有与抗应激相关的热休克　蛋白，含有与疫病相关的杀菌／通透性增加蛋白、抑　癌蛋白、抗菌肽等。上述蛋白均具有一定的生物学　活性，可能与转移因子的功能密切相关　下一步需　要通过基因合成和体外表达等方式获得相关多肽　蛋白，进一步研究其生物活性，进而验证鸡脾转移　因子的有效成分和作用机理。　参考文献：　［１］李鑫．转移因子的研究进展［Ｊ］．畜禽业，２０１０，６：３８—４０．　［２］夏宁，刘海菊，沈伟，等．卤米松乳膏联合转移因子治疗白　癜风疗效观察『Ｊ］．现代生物医学进展，２０１３，５：１２１—１２３．　［３］范林妮，尹志勇，王文勇．肿瘤特异性转移因子在消化系统　肿瘤治疗中的应用［Ｊ］．细胞与分子免疫学杂志，２０１１，１１：　ｌ１０－１１１　［４］　郑君英．转移因子治疗／ｂＪＬ反复呼吸道感染疗效分析『Ｊ］．中　华医院感染学杂志，２０１３（０４）：１５６—１５７．　［５］　Ｋｌｅｓｉｕｓ　ＰＨ，Ｋｒｉｓｔｅｎｓｅｎ　Ｆ　Ｂｏｖｉｎｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｆａｃｔｏｒ：Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｂｏｖｉｎｅ　ａｎｄ　ｒａｂｂｉｔ　ｃｏｃｃｉｄｉｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９７７，７（２）：　２４０—２５２．　［６］　凌红丽，陆承平，孙海新，等．鸡脾转移因子对肉鸡免疫应答　及防病效果的研究『Ｊ＿．中国兽医科学，２００６．０７：４６—５０．　［７］　李犹平，房春林，陈元坤，等．转移因子对猪瘟和猪蓝耳病疫　苗免疫增强效果试验『Ｊ］．兽医导刊，２０１０，２：４７—４８．　［８］卫生部．转移因子口服溶液质量标准［ｓ］．新药转正标准西药　第四十七册．２００８：Ｘ５８—６０．　［９］何理平．转移因子在动物医学上的研究进展［Ｊ］．湖北畜牧兽　医，２００３，６：４４—４９．　［１Ｏ］范振青，李崇荣．口服转移因子阻断小鼠免疫抑制的作用　［Ｊ］．上海免疫学杂志，１９９４，１４（４）：２０１－２０２．　［１１］刘刚，刘大涛，刘征，等．转移因子的性质研究［Ｊ］．吉林　大学自然科学学报，２０００，７（３）：１０４—１０６．　［１２］凌红丽．鸡脾转移因子的研制、检验规程及其应用［Ｄ］．南京　农业大学．２００６：１６—２５．　［１３］Ｂｅｒｒ６ｎ－Ｐ６ｒｅｚ　Ｒ，ＣｈＯｖｅｚ－ＳＯｎｃｈｅｚ　Ｒ，Ｅｓｔｒａｄａ－Ｇａｒｃｉａ　Ｉ，ｅｔ　ａ１．　Ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎｓ，ｕｓａｇｅ，ａｎｄ　ｄｏｓａｇｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｆａｃｔｏｒ［Ｊ］．Ｒｅｖ　Ａｌｅｒｇ　Ｍｅｘ，２００７，５４（４）：１３４—１３９．　［１４］赵满达，何孟莲，徐斌．不同动物来源转移因子对肉鸭Ｔ细　胞转化增殖影响的比较研究［Ｊ］．中国预防兽医学报，２００９，　８：８４—８７．　［１５］乔宏兴，张晓根，任敏．鸡脾转移因子的制备及对雏鸡免疫　应答的作用研究［Ｊ］．甘肃农业大学学报，２０１２，１：１９—２２；２７．　［１６］李士学，侍俊超，周微，等．特异性和非特异性猪脾转移因　子的制备及其免疫活性比较『Ｊ］．中国生物制品学杂志，　２０１１，１０：７５—７７．　［１７］陈智敏．转移因子对猪病毒性免疫抑制的缓解作用［Ｊ］．福建　畜牧兽医，２０１２，５：２２—２４．　（编辑：陈希）