高效液相色谱法测定粮食中苯并芘残留的研究

质量控制

高效液相色谱法测定粮食中

苯并芘残留的研究

王 浩,刘艳琴,杨红梅,殷晓燕

(北京市海淀区产品质量监督检验所,北京 100083)

摘 要:建立了粮食中苯并芘残留的高效液相色谱测定法。方法采用C18(5Lm,4.6mm@250mmi.d)反相色谱柱,流动相为甲醇+水(95B5),流速1.0mL/min,激发波长365nm,发射波长410nm,柱温35e,进样量5LL。方法的检出限0.5Lg/kg,线性范围0~1000ng/mL,加标回收率83.3%~88.3%,相对标准偏差为1.86%(n=5)。该法具有样品预处理简单,毒性小,灵敏度高,分析时间短等优点,可用于粮食样品的直接测定。

关键词:苯并芘;高效液相色谱仪;粮食

中图分类号:TS207.5+3 文献标识码:A 文章编号:1007-7561(2007)01-53-02

AstudyonHPLCanalysisofbenzo(a)pyreneingrain

WANGHao,LIUYan-qin,YANGHong-mei,YINXiao-yan

(HaidianDistrictInstituteofProductsQualitySupervisionandInspection,Beijing 100083)

Abstract:ThisthesisdevelopedaHPLCmethodfordeterminationofbenzo(a)pyreneingrain.Inthismethod,theanalysiscolumnisrevered-phasecolumnofC18(5Lm,4.6mm@250mmi.d),themobilephaseismethanol/water95B5,theflowis1.0mL/min,excitationwavelengthis365nm,emissionwavelengthis410nm,

thecolumntemperatureis35e,andtheinjectionvolumeis5LL.Thelimitofdetectionwas0.5Lg/kg.Thelinearplotswereobtainedbetween1~1000ng/mL.Overallrecoverieswerebetween83.3%~88.3%,andRSD(n=5)valuewas1.86%.Thismethodissimplerapid,sensitive,safeandcheapfordirectlydeterminingbenzo(a)pyreneingrain,withoutanycomplicatedandtime-consumingseparationprocess.Keywords:benzo(a)pyrene;HPLC;grain

0 前言

1933年,科学家揭示3-4苯并芘的结构式,分子式(C10H12),并证实具有强烈致癌作用,简称BaP。从此以后,国内外许多学者对BaP进行广泛、深入的研究,认为3-4苯并芘是由煤炭、石油、天然气、木材等不完全燃烧而产生的。粮食中苯并芘残留的主要来源包括:环境对粮食的污染和粮食在烘干过程中的污染112。目前,我国检测食品中苯并芘的国标测定方法(GB/T5009.27-2003)中存在着操作复杂、溶剂毒性大、费时、准确度低等问题,以致我国很多基层检验机构不能用此法对粮食中苯并芘残留进行有效的检测122。所以寻求准确、快速、简便的检测方法,对粮食中苯并芘残留进行高效的定性定量分析具有重要意义。

收稿日期:2006-08-23

作者简介:王浩(1969-),男,陕西延长人,工程师.

本文在参考有关文献

13~42

的基础上,采用咖啡

因)甲酸萃取,净化后用高效液相色谱法对粮食中苯并芘进行测定,获得较满意的结果。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 仪器 Agilent1100型液相色谱仪,配荧光检测器。

1.1.2 试剂 石油醚(沸程60e~90e)、二氯甲烷、甲酸、Trition-100、无水硫酸钠:北京化工厂。以上均为分析纯。

咖啡因(含量\\99.0%):AJohnsonMatthey公司。

苯并(a)芘标准品:国家标物中心。1.1.3 样品 粮食购自本地超市。1.2 色谱条件

色谱柱:金欧亚ODS柱:5Lm,4.6mm@250mm;流

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质量控制

速:1.0mL/min;柱温:35e;流动相:甲醇+水(95B5);进样量:5LL;激发波长:365nm,发射波长:410nm。1.3 样品处理

准确称取30g粉碎样品,加石油醚与二氯甲烷(95B5)混合液100mL,再加入Trition-100水溶液(1B10)10mL,无水硫酸钠10g左右,振荡60min,静置,待溶液澄清后,取上清液50mL于分液漏斗中。用90%甲酸洗三次,每次10mL,摇2min,分层后弃甲酸。石油醚层以15%咖啡因溶液(甲酸溶解)萃取3次,每次15mL,振摇3min。待溶液澄清后,将下层咖啡因溶液转入250mL具塞锥形瓶中,加120mL2%硫酸钠溶液稀释,再加50mL石油醚剧烈振摇3~4min,转入分液漏斗,待溶液分层后,将下层溶液转入原锥形瓶中,加入50mL石油醚重提一次。合并两次石油醚提取液。石油醚层过无水硫酸钠脱水,再取50mL石油醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠,并入蒸发瓶内,并将其接至旋转器上,于45e水浴中减压蒸馏至干,用3mL甲醇溶解,再经0.45Lm滤膜过滤后,进样5LL进行色谱分析。1.4 定性定量方法

采用标准物质的保留时间对样品峰进行准确定性,采用外标法以峰面积计算定量,依次配制不同浓度的苯并芘标准溶液进样分析,以质量浓度(Lg/L)为横坐标,以峰面积为纵坐标绘制标准曲线。

样品

编号12345

粮油食品科技第15卷2007年第1期

2.2 标准曲线线性范围

将逐级稀释的标准工作液分别进样5LL,测定结果经线性回归,线性范围:0~1000ng/mL;回归方程(y为峰面积,x为浓度,Lg/L):y=1.1161x+0.2977;线性相关系数:0.99999。2.3 方法检测限

进空白样,以基线5倍噪声值在标准曲线查得结果计算,测得方法检出限为5.0ng/mL,定量下限为5.0ng/mL,按测定方法计算,本方法最低检出量为0.5Lg/kg。

2.4 方法的回收率和精密度

准确称取同一空白样品5份,每份30g,分别加入定量的苯并芘对照品60ng,按供试品溶液制备方法制备后,进行测定,结果见表1。从表中可看出,样品加标回收率大于83.0%,平均加标回收率为85.7%,平均相对标准偏差为1.86%(n=5)。同时将浓度为60Lg/L的标准样品重复测定5次并取平均值计算精密度,测得变异系数2.79%(n=5)。

表1 回收率测定结果加标量

(ng/g)2.02.02.02.02.0

实测含量(Lg/mL)1.721.771.671.741.68

回收率(%)86.188.383.387.084.0

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的优化

比较了几种流动相,分别为甲醇+水(95B5)、甲醇+水(30B70)、甲醇+水(50B50),发现甲醇+水(95B5)条件下苯并芘和样品中干扰物能达到较好的基线分离;在0.2~2.0mL/min范围内改变流动相流速,发现在流速为1.0mL/min时,苯并芘出峰时间合适,峰形较好;对苯并芘标准溶液分别用激发波长:350nm、365nm、375nm,发射波长:405nm,410nm、415nm进行测定,发现激发波长365nm,发射波长410nm时,苯并芘标准溶液的响应值最大;通过不同体积进样量比较,发现进样量5LL时,峰形较好。综合以上色谱条件的测定结果令人满意。此条件下加标粮食样品(加标2ng/g)的色谱图见图1。

3 结论

本文建立了粮食中苯并芘残留的高效液相色谱测定法。实验结果表明,其回收率为:83.3%~

88.3%,最低检出量为0.5Lg/kg,符合国标中对粮食中苯并芘的检测要求。该法样品预处理简单,分离度高,分析时间短,明显提高了检测效率,且其准确性和重复性好,是测定粮食中苯并芘含量的理想方法。参考文献:

112李永和.3-4苯并芘(BaP)对粮食及食品的污染1J2.粮食科技与

经济,1997,(4):37-38.

122辽宁省卫生防疫站,江苏省卫生防疫站,等.食品卫生检验方法1M2.理化部分,GB5009.27)2003:219-222.

132王焕锁,王红勇.双波长薄层扫描法测定油脂中苯并(a)芘1J2.

解放军预防医学杂志,1993,11(6):432-434.

142杨貌端,方荣,沙博郁.啤酒、饮料、酱油、醋中苯并(a)芘快速测

图1 加标粮食样品(加标2ng/g)的色谱图

定1J2.食品与发酵工业,1988,80,(2):66.完

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