白菜汁中3种酰胺类除草剂候选标准样品的制备与定值方法研究

１０　化学分析计量　２０１１年，第２Ｏ卷，第４期　白菜汁中３种酰胺类除草剂候选标准样品的　制备与定值方法研究　王建华　李　立　郭　翠　２６６００２；２．中国检验检疫科学研究院，北京２７２１００）　１０００２５　（１．山东出入境检验检疫局食品农产品检测中心，青岛３．济宁出入境检验检疫局，济宁摘要向浓缩白菜汁中添加乙草胺、丁草胺、甲草胺３种酰胺类除草剂的混和标准溶液，搅拌均匀并分装后对其　进行均匀性检验，在一１８％冷冻保存下进行稳定性检验。经Ｆ检验结果表明，研制的候选标准样品均匀性良好；通　过直线模型验证标准样品的稳定性，结果表明在冷冻保存条件下，标准样品中除草剂含量在半年内是稳定的。对研　制的标准样品进行了定值，并对定值结果的不确定度进行了评定。　关键词标准样品除草剂均匀性稳定性不确定度　我国是世界上农田杂草发生最严重的国家之　一Ｊａｃｋｓｏｎ公司。　，据统计，每年因杂草危害给经济作物造成的损失　１．２标准样品的制备　约８０亿元。近年来，中国农药工业发展十分迅速，　农药品种成倍增长，而除草剂产业发展的增速远远　高：　杀虫剂和杀菌剂，目前产量已占农药总产量的　１／３＿ｌ　Ｊ。称取商品化浓缩白菜汁５　，通过计算需添加　浓度为２５　ｍｇ／Ｌ的３种除草剂混标溶液约３０　ｍＬ，　使得制成的标准样品中除草剂含量约为１５０　ｇ／ｋｇ。由于浓缩白菜汁较粘稠，加标准溶液时应　不断搅拌，并分多次添加。用磁力搅拌器搅拌约９６　ｈ，经测定上、中、下层样品除草剂含量值基本一致　后，分装于５０　ｍＬ塑料离心管，每瓶约４０　ｍＬ共１００　瓶。　乙草胺、丁草胺、甲草胺均属于酰胺类除草　剂　在我国普遍使用。近年来，１３本在松茸和大粒花　生中发现乙草胺检出超标。该类除草剂的作用机制　是抑制杂草细胞内蛋白质的合成＿２ｊ，对动物和人的　急性毒性较小＿３ｊ，但近年来却发现乙草胺、丁草胺　具：　弱的基因毒性＿４　Ｊ，使得酰胺类除草剂的残留检　测问题备受关注。　１．３　除草剂含量的测定　（１）测定方法　山东检验检疫局技术中心作为能力验证提供　者，开展了３种酰胺类除草剂测定的候选标准样品　研制（以下称标准样品），经过实验室间验证后，将　参考笔者已经验证的检测方法＿５　ｊ：称取１．２　中制备的白菜汁标准样品２．００　ｇ于５０　ｍＬ离心管，　加入１０　ｍＬ水、５　ｍＬ磷酸盐缓冲溶液、２０　ｍＬ乙腈、　约２　ｇ氯化钠，水平振荡１０　ｍｉｎ，４℃下以５０００　ｒ／ｍｉｎ　离心１０　ｍｉｎ，取上清液１０　ｍＬ于梨形瓶，旋转蒸发至　形成标准物质，这对于新建立检测方法的确证、Ｅｔ常　检测工作的质量保证和质量控制具有重要意义。　１实验部分　１．１　主要仪器与试剂　近１　ｍＬ。用ＳＡＸ／ＰＳＡ固相萃取柱净化［提前用５　ｍＬ丙酮一正己烷（体积比３：７，下同）混和溶剂活　化］，然后用２０　ｍＬ丙酮一正己烷混和溶剂洗脱，浓　缩后用丙酮一正己烷混和溶剂定容至１　ｍＬ，待ＧＣ　—气相色谱一质谱仪：７８９０—５９７５Ｃ型，配自动进样　器，分流／不分流进样口，美国Ａｇｉｌｅｎｔ公司；　具塞塑料离心管：５０　ｍＬ；　ＭＳ—ＳＩＭ分析测定。　冷冻离心机：５８１０型，德国Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司；　旋涡混合器、数显型水平振荡器：德国ＩＫＡ公　司：　（２）ＧＣ—ＭＳ测定条件　色谱柱：ＨＰ一５　ＭＳ柱（３０　ｍ×０．２５　ｍｍ，０．２５　Ｉｘｍ）；载气：氦气；恒压模式１３６　ｋＰａ；柱温程序：初始　温度７０ｃＣ，保持４．０　ｍｉｎ，以２５　ｏＣ／ｍｉｎ升至１５０℃，　以３℃／ｍｉｎ升至２００ｏＣ，再以８℃／ｍｉｎ升至２８０℃，　山东出入境检验检疫局科研基金项目（ＳＫ２００８５６）　收稿日期：２０１１—０３－３０　旋转蒸发仪：Ｒ一２１５型，瑞士Ｂｕｃｈｉ公司；　移液器：０．２、１．０、５　ｍＬ，法国Ｇｉｌｓｏｎ公司；　乙草胺、丁草胺、甲草胺、异丙甲草胺除草剂纯　标准物质：均购自美国Ｓｉｇｍａ公司；　乙腈、丙酮、正己烷：色谱纯，美国Ｂｕｒｄｉｃｋ＆　王建华，等：白菜汁中３种酰胺类除草剂候选标准样品的制备与定值方法研究　ｌ１　保持１０．０　ｒａｉｎ；离子源温度：１５０℃；四极杆温度：　２３０￣（２；色谱一质谱接口温度：２８０￣Ｃ；ＥＩ源电子能　量：７０　ｅＶ；ＳＩＭ测定。　２均匀性与稳定性检验　２．１均匀性检验　农药　乙草胺　测定２　测定１　丁草胺　测定２　测定１　甲草胺　测定２　表２均匀性检验实验数据　ｋｇ　测定　测定１　测定值　１４２　１４３　１３７　１３４　１１７　ｌ１６　１３３　ｌ１９　１３３　１３３　１３６　１２５　１４４　１ｌ８　１２５　１４０　１２１　１１７　１２０　１３８　平均值　１３Ｏ　将分装的１００瓶样品随机分为１０组，每组１０　１６０　１６０　１４９　１５ｌ　１２７　１２５　１４３　１２９　１４６　１４２　１２５　１３４　１４４　１５０　１３４　１４１　瓶，每组任取１瓶平行２份进行测定，测定结果采用　单因子方差统计分析　进行均匀性检验，即抽取ｉ　个样品（ｉ＝１、２、……／７／，），每个样在重复条件下测试　１２２　１５５　１４７　１３８　１４ｌ　１４７　１４７　１４１　１３７　１２０　ｊ１９　１３６　１２２　１３９　１３６　１３２　１２８　ｌ３１　１４０　１２５　ｌ３４　次（　＝１、２、……ｎ）。计算样品间平方和、样品内平　方和以及自由度，从而计算统计量Ｆ。若Ｆ小于自　由度为（　）及给定显著性水平　（选取　＝０．０５）　的临界值Ｆ（　，　），则表明样品内和样品问无显著　性差异，样品是均匀的。　２．２稳定性检验　将分装样品放于一１８℃冷冻保存，按照先密后　疏的间隔原则在１８０天内进行测定，分别在第１Ｏ、　２０、６Ｏ、９０、１８０天随机取样，平行２份测定，根据测　定结果进行冷冻条件下样品的稳定性检验。　由于没有合适的物王里／化学模型来真实地描述　该标准样品中除草剂的降解机理，故采用直线作为　经验模型【　。若该条件下白菜汁中除草剂含量稳　定，则希望该模型中的截距等于测定值，而斜率趋近　于零。　３结果与讨论　３．１检测方法的适用性验证　选用合适的测定方法是标准样品研制和定值的　基础，实验采用的方法参考文献［５，６］，并同时通过　实验方法的回收率和重复性来验证测定方法的可靠　性，回收率数据可用于制样过程引入的不确定度分　量的计算。用未添加除草剂的白菜汁作空白，添加　水平为２００　ｇ／ｋｇ，重复６次进行试验，结果见表１。　该方法满足农药残留检测要求。　表１添加回收试验结果　％　农药　回收率测定值　平均值　ＲＳＤ　乙草胺　８３．Ｏ　７７．４　８５．８　８５．３　８２．５　８２．５　８２．８　３．６　丁草胺　８０．９　８０．９　７９．７　８８．５　８４．５　８５．９　８３．４　４．２　甲草胺　８２．２　７３．４　８７．７　９１．４　７４．０　８１．１　８１．６　８．８　３．２均匀性检验结果　均匀性检验数据见表２。由表３中公式进行计　算　＝９，　＝１０，样品内和样品间的平方和、均方　及Ｆ值见表４。由表４结果可看出Ｆ值均小于临界　值Ｆｏ．０　（９，　。）＝３．０２，即样品的均匀性良好　。　１２５　１４５　１３４　１３０　１４０　表３均匀性检验公式［’］　方差来源　自由度　平方和　均方　Ｆ　样品间　＝ｍ一１　ＳＳｒ　（ｉ　一　）　ＭＳ１＝ＳＳｌ／ｆ，　ＭＳＩ　一　样品内　厂２＝Ｎ—ｍ　ＳＳｍ　ｎｉ　ｚ　（　—Ｘ—ｉ）　ＭＳ２＝ＳＳ２　２　表４均匀性检验结果　名称　平方和　均方　Ｆ值　ｌ　００３　１１１　乙草胺　８２４　８２　１．３５　１　２９８．８　１４４．３　丁草胺　１　２５９　１２５１．１５　．９　８７３　９７　甲草胺　５３９　５４　１．８０　１４８４　１４８　３．３稳定性检验结果　５个时间点测得的除草剂含量的平均值见表５。　表５稳定性检验数据　ｇ／ｋｇ　时间／ｄ　乙草胺　丁草胺　甲草胺　０　１２８　１４０　１４２　ｌ０　１１６　１０８　１ｌ６　２０　１２０　１２９　１２２　６０　１２６　１３９　１２９　９０　１２９　１１９　１２８　１８０　１２２　１２４　ｌ２２　直线模型　可表示为：　Ｙ＝ｂｎ＋ｂ１　＋　式中：ｂ。、ｂｌ——回归系数；　——随机误差分量。　ｎ　一　一　（　—　）（　—Ｙ）　斜率：ｂ１＝　—　———一　∑（　—　）　＝ｌ　截距：ｂｏ＝Ｙ—ｂｌＸ　直线中点的标准偏差：　化学分析计量　２０１１年，第２０卷，第４期　表７标准样品定值结果的不确定度分■及来源　与斜率相关的不确定度：　ｓ（ｂ　）＝　厂—　———————一　Ｓ　不确定度分量　不确定度分量的来源　乙草胺　对应值　√　（　查表得，自由度为／２—２＝４，Ｐ＝０．９５时，ｔ因子　“　（Ｃ）校准过程引入　标准储备溶液，溶液配制过　００８９４７　的不确定度　程，最小二乘法拟合　．ｕ　（ｍ）样品质量引入　天平的最大允许误差（ＭＰＥ）　０．等于２．８，比较ｌ　６　Ｉ与ｔ　．　一　・ｓ（ｂ　）的大小，若　前￣－ｂ＇ｂ说明斜率不显著，计算结果见表６。由表６　可知，３种除草剂的　ｂ　ｆ值均小于　。　．　一　・ｓ（ｂ　），　表明４种除草剂在一１８￣Ｃ冷冻条件下１８０天内无　００１　４４　的不确定度　ｕ　ｌ（　）体积引入的不　定容刻度试管，进样微量注　Ｏ００９　５３　确定度　射器　．ｕ　ｌ（Ｐ）制样过程引入　样品的制备过程，采用方法　０．的不确定度　回收率对该部分进行评定　．０１４７０　明显的降解趋势，未观测到不稳定性。　表６稳定性检验结果　参数　乙草胺　０．０７　００　—　（Ｒ）测试过程随机　测试过程随机效应，通过测　０ｌ效应导致的不确定度　试结果的标准偏差进行评定　０２９９４　甲草胺　—０．１８　１２８．６３　９５．９１　丁草胺　一Ｏ．１５　１２８．１８　１８７．４　表８标准样品的定值结果及不确定度　农药　乙草胺　丁草胺　ｋｇ　平均值　１３Ｏ　１４１　Ｕｃ　１２．４　６．４　２４．９　１２．７　定值结果　１３Ｏ±２５．０　１４１±１２．７　１２２．４９　３２．４３　（ｂ．）　ｔ（）９　Ｏ．２０　０．５７　０．４９　１．３７　０．３５　０．９８　甲草胺　１３４　１１．６　２３．３　１３４－４－２３．３　２・ｓ（ｂ１）　参考文献　３．４标准样品的定值及不确定度评定　［１］　张为农．近期我国除草剂和杀菌剂市场概况［Ｊ］．中国农药，　２００９（７）：５２—５３．　根据文献［９，１０］，标准样品的定值方法如下：　将均匀性测定结果中除草剂的平均浓度作为该标准　样品的浓度，并且对研制过程中引入的不确定度进　行评定。标准样品研制过程中的不确定度包括实验　［２］　郑和辉，叶常明．甲草胺和丁草胺等除草剂在多个介质环境中　环境行为综述［Ｊ］．环境科学进展，１９９９，７（３）：１—１０．　［３］姚斌，徐建民，张超兰．除草剂丁草胺的环境行为综述［Ｊ］．生　态环境，２００３，１２（１）：６６—７０．　方法引入的不确定度、样品均匀性引入的不确定度　及样品稳定性引入的不确定度。由于实验已验证样　［４］　Ｙａｋｏｖｌｅｖａ　Ｊ，Ｚｈｅｒｄｅｖ　Ａ　Ｖ，Ｐｏｐｏｖａ　Ｖ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎ．　ｔｉｂｏｄｉｅｓ　ａｎｄ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｅｎｚｙｍｅ—ｌｉｎｋｅｄ　ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ　ａｓｓａｙｓ　品的均匀性和稳定性均良好，故这两部分引入的不　确定度可忽略，仅考虑实验方法带来的不确定度，以　乙草胺为例不确定度分量及来源列于表７。　合成相对标准不确定度按下式计算：　Ｍ　．　ｆｏｒ　ｈｅｒｂｉｃｉｄｅ　ｂｕｔａｃｈｌｏｒ［Ｊ］．Ａｎａｌ　Ｃｈｅｍ　Ａｃｔａ，２００３，４９１：１—１３．　［５］　王建华，王艳丽，牟俊，等．两种离子源技术ＧＣ／ＭＳ法检测蔬　菜中多类除草剂的残留量［Ｊ］．分析实验室，２００９（３）：１—５．　［６］王建华，郭翠，赵亮，等．气相色谱一负化学电离质谱测定蔬菜　中啶虫丙醚的残留量［Ｊ］．化学分析计量，２００９（５）：４５—４７．　】＝￣／Ｍ　ｌ　（ｃ）＋ｕ　ｌ２（ｍ）＋“　ｌ　（　）＋ｕ　ｌ２（Ｐ）＋ｕ　。ｌ２（Ｒ）　０．０９５　９７　＝．　［７］ＣＮＡＳ—ＧＬ０３能力验证样品均匀性和稳定性评价指南［ｓ］．　［８］　ＣＮＡＳ—ＧＬ０４标准物质／标准样品生产者能力认可准则［Ｓ］．　＝ｕ　＝ＷＵ　１３０×０．０９５　９７＝１２．４８（　ｋｇ）　［９］　昃向君，陈世山，刘心同，等．食品安全检测实验室测量不确定　度的评定与应用［Ｍ］．青岛：中国海洋大学出版社，２００７．　［１０］　ＧＢ／Ｔ　１５０００．３—２００８／ＩＳ０　Ｇｕｉｄｅ　３５标准样品工作导则（３）　标准样品定值的一般原则和统计方法［ｓ］．　取包含因子　＝２，则扩展不确定度为：　Ｕ＝ｋｕ　＝２×１２．４８＝２５．０（　ｇ／ｋｇ）　３种除草剂的定值结果及不确定度列于表８。　ＰＲＥＰＡＲＡＴｌｏＮ　ｏＦ　ＣＡＮＤＩＤＡＴＥ　ＲＥＦＥＲＥＮＣＥ　ＭＡＴＥＲＩＡＬ　ＦｏＲ　ＴＨＲＥＥ　ＫＩＮＤＳ　ｏＦ　ＡＣＥＴＡＮＩＬｍＥ　ＨＥＲＢＩＣＩＤＥＳ　ＩＮ　ＣＨＩＮＥＳＥ　ＣＡＢＢＡＧＥ　ＪＵＩＣＥ　ＭＡＴＲＩＸ　Ｗａｎｇ　Ｊｉａｎｈｕａ　，Ｌｉ　Ｌｉ　，Ｇｕｏ　Ｃｕｉ　（１．Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｅｘｉｔ＆Ｅｎｔｒｙ　Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ　Ｂｕｒｅａｕ，Ｑｉｎｇｄａｏ　２６６００２，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ，　Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００２５，Ｃｈｉｎａ；３．Ｊｉｎｉｎｇ　Ｅｘｉｔ＆Ｅｎｔｙｒ　Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ　Ｂｕｒｅａｕ，Ｊｉｎｉｎｇ　２７２１００，Ｃｈｉｎａ）　ＡＢＳＴＲＡＣＴ　Ａ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｃａｂｂａｇｅ　ｊｕｉｃｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｓｐｉｋｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｒｅｅ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ａｃｅｔａｎｉｌｉｄｅ　ｈｅｒｂｉｃｉｄｅｓ　ｗａｓ　ｐｒｅ—　ｐａｒｅｄ，ｉｎｃｌｕｄｅｄ　ａｃｅｔｏｃｈｌｏｒ，ｂｕｔａｃｈｌｏｒ　ａｎｄ　ａｌａｃｈｌｏｒ．Ｔｈｅ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｗａｓ　ｂｌｅｎｄｅｄ，ｐａｃｋｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｔｅｓｔｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｈｏｍｏｇｅｎｅｉｔｙ　ａｎｄ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ．Ｆ　ｔｅｓｔ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｈｏｍｏｇｅｎｅｉｔｙ　ｗａｓ　ｆｉｎｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｓｔｕｄｙ　ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｍａｔｅｒｉａ１　ｗａｓ　ｓｔａｂｌｅ　ａｆｔｅｒ　ｂｅｉｎｇ　ｓｔｏｒａｇｅｄ　ａｔ一１　８℃ｆｏｒ　１　８０　ｄａｙｓ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ａｃｅｔａｎｉｌｉｄｅ　ｈｅｒｂｉｃｉｄｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｅｆｅｒｅｎｅｅ　ｍａｔｅｄａｌ　ｗｅｒｅ　ｃｅｒｔｉｉｆｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｕｎｃｅｒｔａｉｎｔｉｅｓ　ｗｅｒｅ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ．　ＫＥＹＷＯＲＤＳ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｍａｔｅｒｉａｌ，ｈｅｒｂｉｃｉｄｅ，ｈｏｍｏｇｅｎｅｉｔｙ，ｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ｕｎｃｅｒｔａｉｎｔｙ