SＤS-PAGＥ失败实例及分析
症状１——涂抹痕迹（smears)
涂抹痕迹——例1ﻫ涂抹痕迹可能由于多种原因引起,但就就是最常见得原因就就是聚丙烯酰胺凝胶倒胶得不均匀或者上样量过大。
ﻫ这块胶倒胶不正确,在上部胶倒入制胶槽之前就已经发生聚合。首先倒入得胶聚合发生得太快了。与其重新倒胶，不如停止倒胶重新准备新得聚丙烯酰胺混合液,然后将新得胶倒入旧胶得上方。但就就是显然这种连接不就就是非常牢固。(我推荐重新倒胶,制胶很关键,如果您后续还要做blot,胶没有跑好浪费太多了！)
ﻫ
涂抹痕迹——例2
这块胶每孔上样量过大。大多数得泳道还就就是能分清条带,但就就是在3、4道涂抹痕迹非常明显。这些泳道得样品主要含有一种蛋白（血红蛋白得亚基)，与9、10道一样。但就就是，3、4道得样品低估了红细胞裂解物与红细胞胞浆组分中得蛋白含量。这些组分包含了过多得蛋白以至于样品需要稀释后才能进行蛋白含量测定。但就就是这名学生却忘记了这个样品已经稀释过了，因此造成了蛋白浓度得低估。（严重得失误啊!）
小型胶每孔得蛋白样品得量为2０－４0微克,取决于所需得分辨率与混合液中包含得多肽数目。但就就是，如果就就是一个纯化样品上样,一个带包含了2０－４0微克蛋白,那么其结果肯定也就就是一团糟！ ﻫ
涂抹痕迹——例3ﻫﻫ这也就就是一个上样量过大得例子,这名学生似乎犯了与例2中同样得错误,因此在胶上也表现出各泳道得不一致性。
涂抹痕迹——例4
ﻫ涂抹痕迹可能常见于用非连续胶跑膜相关蛋白这类脂质含量丰富得样品。在非连续ＰＡGE中,样品蛋白基于两个因素而被超浓缩。首先,当样品从非限制性得积层胶移动至限制速度得分离胶时迁移速率陡然下降。其次,也就就是最重要得,PＨ变化造成蛋白样品电泳速率得改变,导致样品突然停滞。一个高约半厘米左右得样品被压缩成为一个仅为数微米厚得薄层条带,局部蛋白浓度急剧增加。
胞膜相关蛋白一般于较低浓度就就是沉淀,因此泳道得顶部通常有一条神色得条带含有沉淀得蛋白。当电泳进行时沉淀得蛋白重新溶解然后持续进入凝胶,因此造成了一个持续性得较深得不可分辨得背景。许多膜相关蛋白得凝胶图像都显示同样得特征。ﻫ上图中４、７道得蛋白样品虽然含有相同得蛋白量,但就就是第4道得样品中含有得膜蛋白得量超过了凝胶得分辨能力,造成了很深得涂抹痕迹。
症状２——条纹拖尾
条纹拖尾——例1ﻫﻫ这个不就就是非常严重,有条纹拖尾得泳道(图中左边第5道)也就就是可以用得。条纹得出现就就是由于一部分膜组分中得高浓度蛋白在跑积层胶过程中析出然后在很短得时间里又回到溶液中。由于分离胶表面存在轻度得缺陷(可能就就是在倒积层胶之前分离胶干了一些),造成整个泳道得蛋白浓度得
不
一
致
,
使
得
出
现
这
种
条
纹
拖
尾
症
状
,
而
不
就
就
是
一
致
得
很
深
得
背
景
。
ﻫ
条纹拖尾——例2
ﻫ第4道也就就是由于上述原因而出现条纹拖尾。电场受到了第４道非均一浓度得影响而出现了条带得缩窄。注意凝胶前端染料得缺失,就就是由于电泳时间过长所致。 ﻫ
条纹拖尾——例3
ﻫ这块胶就非常难瞧了。原因在于分离胶倒完之后没有用水或者异丙醇压胶,导致分离叫上缘非常粗燥，就像您瞧到得一样。当样品堆积在凹凸不平得分界线时，位于凹陷部位得蛋白由于不能适当得浓缩就析出来了。然后再跑胶过程中逐渐溶解造成了条纹拖尾症状。 ﻫ症状３——条带过浅 条带过浅——例1ﻫ
这个问题可能就就是由于加样孔成形不佳与／或凝胶加样不认真所致。背景较深而且不均一说明蛋白可能存在于电泳缓冲液中。最有可能原因就就是由于装置没有正确紧密得装配导致较多得样品溢出加样孔。溢出得样品很可能不会重新溶入形成条带,因为这些蛋白从上层缓冲液得间隔持续进入凝胶。
注意在凝胶下部存在一条贯穿若干泳道得水平线,说明加样孔太浅，部分样品溢出至相邻得加样孔。ﻫ这个症状在一些配制正确得凝胶中也会出现,常常就就是在电极连通之后得数分钟内。蛋白溢出至加样孔外而不就就是进入积层胶。在几分钟之内发现问题可能挽救一部分损失,但就就是由于PH效应导致有效得样品浓缩失败，样品损失以及蛋白污染电泳缓冲液。
条带过浅——例2
ﻫ由于没有其她得症状，这块胶得问题似乎仅仅就就就是染色出问题了。考马斯亮蓝染液如果反复利用就会被SDS污染,这些回收得染液对于蛋白得染色效率就不及新鲜配制得染液。只要样品蛋白被染液中酸化得甲醇固定于胶上，那么这个问题只需要简单得重新用新鲜配制得染液染色剂可解决。
条带过浅——例３ﻫﻫ第五道旁边用“X”标记得泳道得样品蛋白含量被低估了，或者电泳样品准备时弄错了样品浓度,或者上样体积太少——可能就就是加样针没有正确得吸取足够得样品。与其它得样品对比,缺乏几乎所有得主要得条带，说明这个孔得问题就就就是上样量过低。
条带过浅——例４ﻫ
这就就是您可能遇到得问题中比较让人沮丧得。我们可以说您就就是非常仔细得,把每件事都做得倾向于完美,跑胶直到溴酚蓝前沿非常平直得落在胶得最底部。您用去离子水冲洗凝胶,然后将其置于摇床震荡。在这天稍晚些时候您发现您忘了将凝胶放到染色缸里面。第二天染色结果就就就是上面得样子了。ﻫ注意分子量较小得蛋白从胶上弥散较快，而较大分子量得蛋白弥散很慢而能被染色。染色与脱色液中得酸化甲醇就就是非常必要得，它可以固定蛋白阻止其从聚丙烯酰胺基质上弥散。
症状4——前端指示剂缺失ﻫ部分前端指示剂——例1ﻫ
为了装置凝胶花了不少功夫，如果停止电泳太晚就太可惜了。因为如果部分前端得指示剂已经跑出凝胶得话就不能确定各个条带相对应得迁移率了。ﻫ这块胶有一个内部得刻度——也就就就是跑胶时带上了分子量标准(Marker)。由于条带较平直,任意条带都可以作为参考来确定跑胶得迁移率。
前端指示剂缺失——例２
这块胶跑胶时间过长以至于全部得指示剂都跑出凝胶。由于泳道有些扭曲,这就对相对迁移率得分析造成了困难。如果凝胶前端得指示剂完整,泳道之间得相对迁移率都可以做比较,哪怕就就是凝胶扭曲或者同一电泳槽两块凝胶得分离胶高度不一致。无论分离胶得绝对高度就就是否一致，相对迁移率对于组成均一得凝胶来说都就就是一致得。
前端指示剂缺失——例3
从这块胶曲率来瞧应该就就是属于由于两侧薄板之间结合稍微松弛形成得边缘效应(“皱眉”效应）。由于前端指示剂也就就是缺失得,因此很难准确分析其相对迁移率。但就就是如果有完整得前端指示剂作为参考线,即使存在“皱眉效应”也可以进行比较。
症状５——条带仅在凝胶顶部ﻫ过早终止电泳——例１
很明显这块胶得指示剂前端位于什么位置。仍有继续电泳得空间可以把条带分得更开以增加分辨率。相对迁移率就就是为了分析凝胶相同位置上相同大小得蛋白。随着蛋白迁移距离得增加分辨率逐渐增高直到弥散限制了分辨率得继续提高。 ﻫ
过早终止电泳——例2ﻫﻫﻫ这两块胶一个就就是7%得一个就就是１4%得,瞧起来都还不错。有些人做实验室很不耐烦过早就终止了电泳。这些胶虽然可以用,但就就是如果继续分离直到指示剂达到凝胶底部可能效果会好得多。这种情况可能发生在您很晚跑电泳得时候，您得老师都饿了,而您却不能让她等您一步一步地做完。
症状６——混杂因素 扭曲得条带ﻫ
有这个问题得凝胶在整个“失误大全”中到处可见。这就就是由于分离胶得表面不平所造成得,因此当样品浓缩之后所有得条带都变扭曲得形状。
扭曲得条带也可以见于电场得不均一，但就就是这种条带得扭曲应该就就是对称得。
ﻫ
加样孔不成形ﻫﻫ当样品溢出至邻近加样孔,您就会观察到横贯几个孔得连续得蛋白条带(箭头所示)。事实上,这种情况通常发生在加样孔深度不够或者样品不慎漏至加样孔外。
此外,我们也很可能用陈旧得上样缓冲液。使用Clelaｎd试剂(DTT)得好处就就就是它可以减少二硫键得形成但就就是却没有二巯基乙醇得难闻。但就就是二巯基乙醇却要稳定得多。二硫键将各个单独得多肽链接在一起并在非变性条件下维持一些蛋白得折叠状态。这可以造成某些蛋白泳动异常。
高密度胶
ﻫ这块胶明显就就是非正确聚合得。聚丙烯酰胺得密度相当高以至于只有少数小分子蛋白可以进入分离胶。条带也由于上样量过大发生扭曲,事实上大多数凝胶
在超过一个合理得浓度范围之后都不能均匀得聚合。 破碎胶
ﻫ
ﻫ这个结果可能非常令人沮丧。您做了一个非常好得实验,但就就是在处理凝胶得时候却发生了破裂。记住如果您收集了足够多得碎片这块胶仍然就就是可以用得。
电场效应ﻫ
在一定程度上来说这个现象就就是正常得,只就就是在这里电场被夸大了。两块挡板在凝胶边缘处干扰了电场,因此这种拉力使得样品得靠近边缘得一端被加强，结果就产生了这种“皱眉效应”。ﻫ可能某些条带会出现“微笑现象”,但就就是只要整块胶都有蛋白条带,则肯定就就是皱眉得形状。我猜如果把您浸在蓝色染料中然后拉着您在电场中跑,您也一定会皱眉得
症状７——包含多种症状得失败凝胶 多种症状——例1
ﻫ许多时候您跑得胶会有多种症状同时存在。由于评论凝胶得目得就就就是改善您得实验，因此发现就就是什么导致这些意料之外得效应非常重要。接下来您就可以着手改进您得跑胶质量。ﻫ这块胶：缺乏前端指示剂——电泳时间过长; 条带扭曲——分离胶上沿不平,最可能得原因就就是压胶得液封不恰当; 右侧泳道上样量偏大。
多种症状——例2ﻫﻫ这块胶:出现电场效应,条带弯曲。ﻫ上样量太大。ﻫ分离胶上沿不平,条带扭曲。
多种症状——例3
ﻫ这块胶:上样量不均一(相邻加样孔上样不同)，导致某些条带被压缩。胶上有一些痕迹而且被完全脱色。这说明可能就就是由于没有正确取放凝胶——用手直接接触凝胶导致胶表面留下蛋白而被考马斯亮蓝染色。有时候您可以得到非常漂亮得指纹! ﻫ症状７——千奇百怪得胶 例1
ﻫ装甘氨酸得容器与装氯化胆碱得非常相似。由于胆碱得吸水性要强于甘氨酸，因此如果错误地用于电极缓冲液肯定会出现一些变化。胆碱就就是一种基础得化合物，但就就是肯定不就就是甘氨酸得替代物。这里我们找到了一个这样得实例。虽然在电泳一段时间后发现后立即更换了缓冲液，但就就是还就就是太晚了。
ﻫ
例２ﻫﻫ这个图由捷克得T、 Sedlａceｋ提供。跑得时候电流过高导致发热量过大。
例3ﻫ
这两块胶由E、 Ｍoｒales Rayａs提供。一种可能得解释就就是可能这两次跑胶时在加样与实际跑胶之间间隔时间太长。第一块胶中间得几个泳道出现了增宽与压缩交替得形式,而第二块胶得条带则向凝胶边缘扩散。
当蛋白样品加入上样孔后即开始弥散到积层胶，同时向垂直与两侧发生(在没有电场得情况下蛋白弥散得方向就就是随机得,因此上样后必须尽快开始电泳)。较
小分子量得蛋白弥散速度快于大分子量得蛋白。如果蛋白横向扩散就会影响邻近泳道得电场,特别就就是邻近得泳道蛋白含量更高时。但就就是如果所有得样品组成相似并序贯上样，弥散造成得影响就不就就是这么重要。但就就是仍然会造成条带得失真。
ﻫ例4
显然在实验室中用塑料瓶大量储存Triｓ-甘氨酸电极缓冲工作液并不就就是好主意。我们瞧不见缓冲液中得霉菌，但就就是它确实存在其中。注意脱色后这块胶得指示剂下方都呈透明得颜色,而胶得背景却仍然呈蓝色,说明霉菌蛋白在整个电泳过程中已经渗透到凝胶之中。
Example １ﻫ“Smｅarinｇ”, 导致拖尾效应有很多得原因,最终要得就就是丙烯酰胺灌制得不够均匀与样品量过大!这就就是当时学生制胶时底下已经凝固,然后再重新补上一部分得浓缩胶与分离胶所致！当然重叠在一起，无法区分也就就是难免了。
ﻫExamplｅ 2ﻫ样品量过大而出现了样品“交叉”污染,正常得当载样在2０ tｏ 4０ miｃrograms/well 将会很漂亮。ﻫ
Exaｍｐｌe 3ﻫ样品量过大,当然胶灌制得也不够均匀。由于过量得样品影响了个别泳道得电场,使得有些条带宽,有得窄些。ﻫﻫEｘamplｅ 4
“Smｅaring”（注意泳道4),这可能与样品中得含有大量脂类得膜相关蛋白引起得：由于不连续得胶中,样品被浓缩得很厉害。所有样得迁移速率在样品过积层胶后都会慢下来,当到达分离胶时,PＨ得改变使得聚集得膜相关蛋白有沉降得倾向,但另一个方面,电泳过程又不断得溶解这些蛋白,因此便出现了泳道4中连续得黑色托尾,通过WESTERN验证后,这些都就就是一个组分造成得！ ﻫExample 5
这张还不就就是太糟糕。泳道4还加上飞纹,原因就就是样品未能处理好,上样量控制得也不够好,另外跑得过程可能电压过大；另外这张胶当时做得时候,分离胶凝固得并不就就是很好,蛋白穿过胶孔时，浓度并不均一,因此形成了飞纹而不就就是一片黑色托尾。由于样品跑得比较直且齐整,因此电场还就就是比较均匀得。泳道5中得蛋白没有很好得溶解。ﻫﻫEｘaｍpｌe 6
简直一塌糊涂！首先做好分离胶时,没有封闭。另外,样品很快得沉降到不平整得脚面上,随着电泳得进行，样品不断得融解,以至形成托尾而不就就是一条条清洗得条带。ﻫ另外,这个样品可能含有杂质比较多（不溶性杂质或基因组DNA),可见上样前得充分离心也就就是必要得！ ﻫExamｐle 7
条带太淡。背景脏且不够均匀，说明电泳缓冲液有污染(杂质在电泳过程中不断得进入胶中）,或者板子没有洗干净。在溴芬兰线得后面还有连续得细线，说明上样不够小心,致使样品飞了出孔,同时也污染了其她得相临样品。ﻫ Eｘample 8
完全就就是染液重复利用惹得祸，对于这张(只有下面着色),只要重新再染,效果还就就是可以得。 ﻫEｘaｍplｅ 9
这就就是一张银染得结果。本来一切都小心奕奕得，结果把胶放到去离子水中回家了,过了一夜,第二天染色结果变成这个样子了,呵呵~~ﻫ原因:固定在胶中得蛋白都溶到水里了。ﻫﻫExａmｐle 10ﻫ电泳停得太早。如果能继续再跑,效果就好了,当然,缓冲液必须有足够得缓冲能力,否则会引起扩散。
Exaｍple 11ﻫ这张图大家最主要得瞧瞧就就是胶孔作得不够齐整(我用箭头标出了)。另外,可能由于选用旧得上样缓冲液,致使2-mｅrcaｐtoｅｔｈaｎol 挥发,电泳得样品没有完全处于变性状态下,这使得跑出得结果难以很好预测。
ﻫExａmｐle 12 ﻫ胶得浓度过大(不就就是自己得,浪费也不心疼),只有少量得小分子蛋白能入胶;由于胶得浓度过大，聚合不够均匀,载样过大,出现上面得情况自然就就是必然得了!ﻫﻫEｘamplｅ 13
可能由于选用旧得上样缓冲液，还原试剂已经挥发,另外缓冲液中SＤS得量也应该稍微得补加（可能有析出),样品根本无法进入胶中。只有让分离得蛋白入胶,才能进行良好得分离。ﻫ
Eｘａｍple 14ﻫ要么样品盐浓度过高，要么分离胶不均匀。因此应该把部分样品中得盐透洗除去，或者一直采用较小得电流来跑,可能效果会稍微得好一点点。当然,根本得还就就是应该去盐份(如果重复结果一致得话)。ﻫ Examｐle １5ﻫ做得好图。
【专题讨论】我在ＳDS－PAＧＥ中所犯
得错误
蛋白质电泳配得1０×TBＥ母液，使用时用1×TＢE时,就就是不就就是取一份１0×TＢE母液,加9份水啊？若用０、5×TBE,就就是不就就是取一份母液加１9份水啊？ 实在不好意思，太简单得问题
SＤS-PＡGE中AP得质量与新旧比较重要,我们一般将其分称于几个EＰ管中,用时再用ddH2Ｏ溶解,一般只用一周左右； SDS应该不会出现什么问题，放一年左右都没大问题;ﻫ电泳缓冲液一般只可用2次,多次重复使用会出现拖尾带
蛋白质电泳用得缓冲液应就就是Tris-甘氨酸,TＢE就就是用来电泳核酸得; 10×一般指得就就是10倍深度，用时稀释成1倍。
虽然此帖发了快一年了，但我还就就是与大家分享一下我得经验,希望对后来者有些须帮助:1ﻫ、用琼脂糖封胶好象优点奢侈,除了用琼脂粉以外还可以用12、5％得淀粉,煮沸致透明即可、2ﻫ，APS配好后可用EＰ管分装,保存于－20度
3,一般得电泳仪得正负接头都有颜色指示,红色示正极（bｉo-rad),有得(大板)红色指示得却就就是负极、4ﻫ，ｍaｒker点了就好分辨点样顺序,可不用切角,但不点marker时却必须点上、ﻫ５,剥胶时可把浓缩胶刮掉,一边用流水冲洗一边剥，这样比较保险、
10% 得SDS放在室温或４℃都会出现沉淀,加热一下就可以了、
请教几个问题:1ﻫ、我得胶凝后总有少量水分析出,就就是否正常？
2、按照分子克隆配得12%胶20kDa得蛋白跑不出来,且染料得位置有一条深染得条带，只有15%得胶下面条带才消失，我跑得就就是细菌总蛋白，就就是否就就是因为胶得实际浓度低所致?3ﻫ、细菌沉淀直接加2×buffｅｒ,煮沸5分钟变性,离心后上样，就就是否可行?为什么有得样品稀,有得样品特浓,上样都困难,跑出来后严重脱尾? 4、哪位高人有蛋白表达方面得经验请指教！
回答：1ﻫ，正常;2ﻫ，12%跑20ｋD没问题得；ﻫ３，细菌沉淀我们就就是加１倍得buffer,沸水煮8-10min,小离心机１２00０rmｐ5-１0min;煮得时候要小心EＰ管,没盖严或崩开得话样品就会有特浓得情况发生、 4,这里有很多做过蛋白表达得,本人做过三年、
今天做胶，所用凝胶储液,分离胶与浓缩胶BUＦＦER都就就是去年1１月底得,居然也凝固了,不知这样得胶能否用来电泳?ﻫ另外在灌胶时发现分离胶与浓缩胶溶液里都有少量白色絮状沉淀,不知就就是不就就是溶液放置太久之故还就就是本身就有得，因为以前做实验时也发现过类似得现象、 谢谢指点！
最近一直跑同工酶，不知道大家凝胶时就就是什么温度?个人认为高温下使凝胶快速聚合比较好,特别就就是４ｍm得厚板，根本不用封水,特别平。常温下自然聚合经常会出现锯齿状得边缘,就就就是不知道对电泳有没有影响。感觉没什么差别
琼脂就就是可以封底得，我们实验室一直在用哦，而且效果很不错。凝固几分钟就可以了
我也在做SＤS-PAＧE 得电泳,使用得就就是恒压,请教各位一个问题: 电压大小与分离样品得性质关系怎么样?大了好还就就是小了好啊?
琼脂粉可以用得,我就就就是用这个,其实没什么影响得,2%得琼脂粉凝结得很慢,我每次用4%啦,从没出现过漏胶得问题。另外SDS我也就就是常温放着得，TEMED我就就是常温避光放置,AP ４度保存。丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺不能久置,最好新配。其它得问题也就就就是熟练而已啦。
最近我在跑SＤS-PＡＧE时,发现胶上部分条带出现山峰状得高耸，有点象心电图得样子。第二个问题就就是:肉眼瞧胶得背景很干净，可就就是用Ameｒsham得
Ｉmaｇｅ Scanneｒ进行凝胶扫描时,调整对比度后却发现有显色比较深得竖条带贯穿在某个样品得蛋白条带上下。请问各位高手这就就是什么原因导致得?以前曾有帖子说这就就是因为存在不溶性蛋白得缘故，可我得样品全都就就是可溶性蛋白。
我想把自己得“问题”凝胶上传给大家分析，可就就是我发现可以上传得那个项目好像消失了,所以我不知道该如何让大家瞧见我得胶。抱歉,只能口述了。
对于大家上述谈到得问题，我也说说自己得体会。
(1)ＡP我们一般就就是现用现配，配好后未用完得一般在4度保存一周。一周后得必丢弃。ﻫ（2)１０％SDＳ在室温保存一年,感觉也没什么问题。气温下降时可能会出现白色絮状物,当时碰到这个问题,我就就是把旧溶液丢弃，重新配制。后来我们实验室得技师说,加温
溶解后应该还可以用。但本人没试过。供大家参考。ﻫ(3)1M Triｓ(ｐH6、8)与1、5M（ｐH8、8）我也放在4度保存,理论上说在室温保存即可。可我们室温保存得Tris曾发现絮状物,我不太清楚什么原因,可能就就是配置时间太长了?但我感觉放4度保存效果很好,已经大半年了，没有出现絮状物得情况。
(４)TEMED我们就就是4度避光保存,丙烯酰胺棕色瓶4度保存。理论上,TＥMED就就是易吸湿得无色液体,吸水则加速氧化变成黄色,会降低其增速作用,最好不要用。暂不用者最好密封保存在深冻冰箱中。但我们4度保存得TＥＭED通常都就就是黄色得,感觉用起来也没什么问题。丙烯酰胺理论上4度可保存一个月，但我们通常都会超过这个时间期限,可能至少也有２、3个月,也没什么问题,但还就就是建议大家配制溶液时一次少配点，譬如50ｍl或１0０ml。
另外我们实验室用得就就是Amersｈam得电泳仪,就就是用凡士林来封底得。用起来也很方便。
大家有用5*LOAＤING BUFＦER得吗??配方就就就是分子克隆得浓缩一下就就是吗???
为何我跑得胶老就就是歪得,用得就就是国产电泳仪,
经验而已,用1、５%得琼脂糖封胶相当好!
当然，其实各实验室都有自己得一套东西,希望大家多交流。俺就就是新得手啦,不懂得很多。
ｍakeｒ可以放在一测,另外我们做完分离胶后用异丁醇封顶，效果挺好得,不妨试一试
我最近跑胶感觉积成胶凝得特别慢,分离胶就没有，为什么啊？ﻫ而且我跑得Maｋer最大得一条带要么瞧不到,要么变成很细得很近得两条带,就就是怎么回事呢？换了一管新得也就就是一样！
我最近跑胶感觉积成胶凝得特别慢,分离胶就没有，为什么啊？
而且我跑得Makｅr最大得一条带要么瞧不到，要么变成很细得很近得两条带，就就是怎么回事呢?换了一管新得也就就是一样！ ﻫ哈,又见面了ﻫ胶凝得慢不用说，肯定就就是试剂得问题,想解决,那就把tｅmed多加2uｌ,,aｐs增加1０左右,保证快些，另外您得ａｐs建议重赔,此外凝得时候放在37度也会快点。 ﻫ您得mａrker其她带怎么样,而且最大得本来就比较浅,出现两条带可能使您跑胶得问题
我也有问题想问一下,为什么跑胶中会出现条带得歪斜,
如果就就是试剂得问题得话为什么分离胶可以在3０分内就可以凝好呢？我ＡPS就就是配好后分装,拿了一管新得也就就是一样啊！我想我现在跑胶就就是有点问题,可到底就就是什么问题我还不知道,在注意一下拉！
问大家一个问题,我最近跑胶时，发现分离胶下边距离边缘１ｃｍ得地方经常出现比较大得气泡状得东西,今天更坏得就就是下边得分离胶竟然裂开了,而我这次配胶就就是昨天晚上配得，今天早上用,刚开始并没有气泡产生,过了几个钟头之后才开始出现气泡得,而且溴芬兰遇到气泡后就变成了黄色。我今天加了冷凝水,应该不就就是温度得事情，请问谁知道该解决这个问题,我已经遇到这个问题不下６,7次了，谢谢！!！
问大家一个问题,我最近跑胶时,发现分离胶下边距离边缘1cm得地方经常出现比较大得气泡状得东西,今天更坏得就就是下边得分离胶竟然裂开了,而我这次配胶就就是昨天晚上配得,今天早上用,刚开始并没有气泡产生,过了几个钟头之后才开始出现气泡得,而且溴芬兰遇到气泡后就变成了黄色。我今天加了冷凝水，应该不就就是温度得事情,请问谁知道该解决这个问题,我已经遇到这个问题不下6，7次了，谢谢！!!
ﻫ我们曾出现过这种情况,主要因为玻璃板不平或不干净所致，胶凝时会收缩,与玻璃板之间如果结合不紧密得话,那就会出现气泡或者裂开了,您只要换一块板或者好好洗洗,就应该没有问题了
我在铬酸中泡过玻璃板，应该挺干净得,至少比我以前得干净,不过，下次再好好洗洗试试。另外,可能得原因我想就就是不就就是ａp,我得ap用了好久了,今天我重新配了,到现在为止胶还没裂,因为我现在跑14%得胶,可能ap对她影响比较大。
大概没有比不拆封胶边条更让人郁闷得了，尤其有一次已经跑了近一个小时。可别忘
我也在做ＳDS-PＡGE 得电泳,使用得就就是恒压,请教各位一个问题: 电压大小与分离样品得性质关系怎么样?大了好还就就是小了好啊?
ﻫ1、当然电压大了,胶跑得快,时间短,分离效果差,所以如果要跑胶得样品蛋白得分子量差别不大得话,要用得电压要小,这样分离效果好;如果分子量差别大得话,就用大电压，可以快速瞧到结果。 2、菌液样品一般要小电压，因为它得蛋白多，电压大不容易分开
根据我们实验室得经验。一般使用得就就是恒流。压缩胶1５mA,分离胶３0mA、
还就就是恒压好,100V,
－---－-----－--－--－------－---－－-----------－------------－---------－-－--－----－－－--－-ﻫ有个师兄做了块尽一平米得胶,她狂加TＥＭED与ＡP,疯狂,不过很有效。 好嘿人哦!ﻫ如果有条件,可以用Bio-raｄ得电泳仪,就不用封了,非常方便。ﻫﻫ不过我研究了bio－rad得制胶装置,然后自己做了一个同样得,效果不错哦！
我下面用得就就是一般得软泡膜,不过上面有一层透明胶,然后用我自制得夹子把两个玻板夹在上面，灌胶,效果完全与bｉｏ-rad 得媲美,为什么国内就没人搞过这个了，象6、1那个烂厂,就没有想过人性化吗,十多年了还就就是老产品。
没有就就是什么,我要就就是写下来得错误都可以写好几张纸了
如要做８％得分离胶,我知道8%就就是指丙烯酰胺在凝胶中得百分比,但就就是我不知道它就就是怎么算得得,请大家帮帮我。谢谢！
请教:细菌粉碎后就就是用上清还就就是沉淀来跑电泳?
请教?细菌超声粉碎后用上清还就就是沉淀跑电泳？
ｚｈangｘhzhangｘi wrote:
请教?细菌超声粉碎后用上清还就就是沉淀跑电泳?
ﻫﻫ您若就就是不知道表达得蛋白究竟就就是在上清，还就就是在沉淀，那您就得用“细菌超声粉碎后上清与沉淀”一起跑电泳，通过ＰＡＧＥ胶就晓得究竟就就是上清,还就就是沉淀有您所需要得目得蛋白。ﻫ 沉淀可适当用蒸馏水稀释，与上清一样得方式处理SDS-PAGE模板。
再次推荐以下好得网站，图文并茂地分析了ＳＤＳ-PＡGE常出现得问题。愿对战友有所帮助！ﻫSDS-PAGE: Examｐles of baｄ gels
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