鹅不食草总有机酸的提取与分析

２０１７年３月第５期　１２３　鹅不食草总有机酸的提取与分析　王育苗　（天津中医药大学　天津摘３００１９３）　要：目的：比较不同方法提取鹅不食草中的总有机酸，同时采用分光光度法对其含量进行测定。方法：采用有机溶剂加酸水直接提取法、　碱提酸沉法、超声提取法及酸沉后有机溶剂萃取法等几种方法对鹅不食草中的总有机酸进行提取，同时采用分光光度法测定其含量。结果：　有机溶剂加酸水直接提取法提取总有机酸的含量为４９．４％，碱提酸沉法提取总有机酸的含量为６９．４％，超声提取法提取总有机酸的含量为　２５．１％，酸沉后有机溶剂萃取法提取总有机酸的含量为５４．７％。结论：采用碱提酸沉法提取鹅不食草中的总有机酸并采用分光光度法测定其含　量是相对更佳的方法。　关键词：鹅不食草；总有机酸；分光光度法；提取　中图分类号：Ｒ９６　文献标识码：Ａ　文章编号：１００６—０９７９（２０１７）０５—０１２３—０２　２．２．２制备试品溶液：称取由有机溶剂加酸水直接提取法、碱提酸沉　鹅不食草是一种菊科植物，又称鸡肠草、石胡妥，据《本草纲目》　１．记载具有祛风散寒、止咳通窍等功效，主治风寒感冒、咳嗽、鼻塞不　法、超声提取法及酸沉后有机溶剂萃取法分别提取的干品０．０２ｇ，先　通、各种鼻炎及跌打扭伤等病症，资源丰富，应用广泛…。鹅不食草含　置于容量为２５ｍｌ的容量瓶中并用无水乙醇定容，然后再取１ｍｌ置于　多种有效的化学成分，如甾醇类、挥发油、黄酮类、有机酸、皂苷类、胺　容量为１０ｍｌ的容量瓶中用无水乙醇定容，最后获得样品液。　类等　Ｉ，具有很高的药用价值。近些年已有较多的研究对其甾醇类、　１．２．２＿３样品含量测定：取有机溶剂加酸水直接提取法样品液１ｍｌ　挥发油等组成成分的提取工艺及含量测定进行了分析，但鲜见有关　和对照品溶液１ｍｌ，置于１０　ｍｌ容量瓶，依次向容量瓶中加入０．　有机酸类成分的报道。为此，本研究分析了鹅不食草总有机酸的提　３％十二烷基硫酸钠２　ｍｌ、无水乙醇５　ｍｌ、１％铁氰化钾一１％三　取方法及含量测定，以找到一种最佳的提取方法，以促进这一药用植　氯化铁１ｍｌ，混合均匀，置于暗处５ｒａｉｎ，然后加入０．１ｍｌ／Ｌ盐酸在　物资源的最大化利用。　１　仪器与方法　置于暗处２０ｍｉｎ，平行空白，在波长为５００～９００ｒａｎ内进行扫描，由　于样品液和对照品的最大吸收波长为７３０ｎｍ，所以将７３０ｒｉｍ定为　１．１仪器与试药：鹅不食草（产自吉林长白县）；ＵＮＩＣＯ尤尼柯ｕＶ一　测定波长，经过绘制标准曲线证明浓度与吸光度呈线性关系，然　２８０２Ｓ紫外分光光度计（购自麦仪科学仪器上海有限公司）；ＨＫ一４５０　后用直线回归法计算总有机酸的含量。其它各提取法总有机酸　超声波清洗器（购自杭州汇尔仪器设备有限公司）；没食子酸对照品　含量的测定同上。　２．３方法学考察：经精密度实验、稳定性实验、重现性实验及加样　（江苏南京森贝伽）电子天平；真空泵；烘箱；加热套；分析纯；ｐＨ试纸。　１．１．２方法　１．２．１总有机酸的提取　回收率实验均证明本次鹅不食草总有机酸的提取与含量测定可靠　性较高。　结　果　１．２．１．１有机溶剂加酸水直接提取法：用电子天平称取试药粉末２００　ｇ　２　置于容量为５０００ｍｌ的圆底烧瓶，向烧瓶中加入事先经浓盐酸酸化的　有机溶剂加酸水直接提取法提取总有机酸的含量为４９．４％，碱提　７０％乙醇酸水溶液（ＰＨ＝２）３０００ｍｌ，然后进行３次回流提取，每次均　酸沉法提取总有机酸的含量为６９．４％，超声提取法提取总有机酸的含　９０ｍｉｎ，将３次获得的提取液置于６０℃水浴锅上进行浓缩，取适量乙　量为２５．１％，酸沉后有机溶剂萃取法提取总有机酸的含量为５４．７％。　酸乙酯进行萃取，然后回收乙酸乙酯再次用水浴锅浓缩干燥，最后获　３　得的干品即为试药的总有机酸提取物。　讨论　鹅不食草是传统解表类中药，经现代药理研究证，它具有抗　抗炎、抗菌、抗肿瘤及细胞毒素等多重作用，在ｆ临床和民间　１．２．１．２酸沉后有机溶剂萃取法“称取试药粉末２００ｇ置于容量为　过敏、５０００ｍｌ的圆底烧瓶，加入蒸馏水３０００ｍｌ进行３次提取，每次均　常常被用来治疗急慢性鼻炎、过敏性鼻炎、软组织损伤等病症，　。鹅不食草的化学成分很　９０ｍｉｎ，将３次的提取液用水浴锅进行浓缩，在浓缩液中加入浓盐酸，　尤其对其治疗鼻炎的研究比较深人　】使ｐＨ值为２，然后用乙酸乙酯进行３次萃取，回收乙酸乙酯再次用水　复杂，有机酸类是它的成分之一。本研究采用四种不同的提取　浴锅浓缩干燥，最后获得干品。　方法对鹅不食草总有机酸进行提取，并均采用分光光度法测定　１．２．１．３超声提取法：称取试药粉末５０ｇ置于蒸馏水１０００ｍｌ中进行为　其含量，简便、准确、重现性好，结果表明，碱提酸沉法提取总有　时６０ｍｉｎ的浸泡，采用超声提取２次，每次均６０ｍｉｎ，每次过滤并收集　机酸的含量为６９．４％，高于其它三种方法。目前有关鹅不食草　２次的滤液置于水浴锅浓缩获得浸膏，在６０℃的环境下将浸膏进行减　总有机酸的提取与含量测定的报道很少，本研究认为采用碱提　压真空干燥，最后获得干品。　酸沉法提取鹅不食草中的总有机酸并采用分光光度法测定其含　１．２．１．４碱提酸沉法：称取试药粉末５０ｇ置于蒸馏水１０００ｍｌ中进行为　量是相对更佳的方法，可初步为其质量标准的建立提供一定的　时６０ｍｉｎ的浸泡，采用超声提取２次，每次均６０ｍｉｎ，每次过滤并收集　方法学参考，但其中仍有待作进一步探究的问题是，用碳酸氢钠　２次的滤液，用饱和盐酸乙醚进行萃取，然后再用经浓盐酸酸化的２％　提取有机酸时忽略了酯类的水解以及酚类的溶解，而被忽略的　碳酸氢钠溶液（ｐＨ＝２）对乙醚层进行萃取，用乙酸乙酯萃取并回收，再　成分是否为有效成分以及是否会影响药效，这些问题均值得考　次用水浴锅浓缩干燥，最后获得干品。　虑。所以未来应进一步加强对鹅不食草化学成分及提取工艺的　１．２．２总有机酸的含量测定　入无水乙醇，制备成２０．５　ｇ／ｍｌ没食子酸溶液。　研究，以控制药材质量，提高临床疗效，使这一药用植物资源得　参考文献　１．２．２．１制备对照品溶液：用电子天平称取适量没食子酸的对照品，加　到最大化的利用。　１２４　【１】林远灿，高明．鹅不食草的化学成分及药理研究进展Ｕ】浙江中医　（１１）：１　６２１—１６２３．　药大学学报，２０１１，０２（３４）：３０３－３０４　胞ＣＮＥ一２生长抑制作用的实验研究Ｕ】．中华中医药学刊，２０１１，７　［３］吴和珍，艾伦强，吴和呜，等　鹅不食草的生药鉴定研究ＩＪ１．中药　【２１陈红淑，李昌煜，余美荣，等．鹅不食草提取物对人鼻咽癌细　材，２００９，０２（２６）：２０（）一２０２．　２０１７年２月２２日收稿　清热解毒扶正颗粒对内毒素血症大鼠炎性细胞因子的影响　李黔云　韦衮政　万启南　（云南省中医医院老年病科　云南省６５００１１）　摘要：目的：观察清热解毒扶正颗粒对内毒素血症大鼠炎性细胞因子的影响，探讨其治疗内毒素血症中的作用机制。方法：选择雄性Ｗｉｓｔａｒ　大鼠７（）只，随机分为６组，即空白对照组、模型对照组、西药对照组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组．．采用腹腔注射脂多糖（ＬＰＳ）　致大鼠内毒素血症模型。结果：模型组血清与正常组比较ＴＮＦ—ｄ、ＩＬ一１　８、ＩＬ一１２表达水平均明显升高（Ｐ＜０　０１）。中药中、高剂量组显著降低　ＴＮＦ一０【水平　＜０．（）１），而甲强龙组反而升高ＴＮＦ一　水平（Ｐ＜（）　ｏ１）。结论：中药中、高剂量组显著降低血清ＴＮＦ—　、ＩＬ一１　Ｂ、ＩＬ一１２的水平，有　效治疗内毒素血症。　关键词：内毒素血症；清热解毒扶正颗粒；炎性细胞因子　中图分类号：Ｒ２８５　文献标识码：Ａ　文章编号：１００６—０９７９（２０１７　１０５　００１２４—０２　内毒素Ⅱｎ症关键启动因子为内毒素及其诱导的失控性释放的大　胞因子的影响情况：见表１。　量炎性介质，炎性细胞因子在内毒素血症的发病机制中起到重要的　作用。前期采用扶正祛邪的清热解毒扶正颗粒治疗感染所致内毒素　表１　血清炎性细胞因子表达水平的组间比较（　±ｓ）　组别　样本数　ＩＬ一１　Ｂ　低齐０量组　中剂量组　高剂量组　甲强龙组　模型对照组　正常组　１　１　ＩＬ一１２　．ＴＮＦ一仪　血症，取得了较好临床效果　Ｊ。本研究探讨该药的作用机制和调控　炎性细胞因子的相关性。　ｌ　材料与方法　３５．０６±１．４１２　“２４．７９±１．２５８‘３３２５７７３±１３．７８４０９　１２　１　２　９　３２．０７±３．８６６　２１．４±１．２７７　．２９１．０４１７±２２．０８３９９　２６１４０９２±３３．５４５９＊　．２９．８６　４－７．３５６～２０８２±３．５５２＊　２５．９１±３．９３１　１．１一般材料：雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠７０只，体重２００±２０ｇ．药物清热解毒　扶正颗粒的处方组成：翼首草、鱼腥草、太子参、麦冬、丹参等十四　味药加水煎煮３次，每次１小时，合并煎液滤过浓缩至相应密度　１．３０～１．３５的浸膏１份，蔗糖３份，糊精１份。低剂量组含生药０．５ｇ／　ｍｌ，中剂量组含生药ｌｇ／ｍｌ，高剂量组含生药２ｇ／ｍｌ，４￣Ｃ保存。　１．２方法　－１９．１８±３．０８４　４２７．６８２２±２２．８８８６９　１２　１Ｏ　５４．８４±８．１３４　２８．１３±４．８２３　３５９．０１±４２．０６９３９　２９（）．４６４±１０．３３１０８　３２．８９±１．９３４　２２．４７　－１．４１１１　注：与正常组比较ＡＰ＜０．０１；与模型组比较　Ｐ＜Ｏ．０１；与甲强龙组比较　５－Ｐ＞０．０５；与甲强龙组比较ＯＰ＜０．０５；与模型组比较▲Ｐ＞０．０５；　讨论　１．２．１内毒素血症动物模型的制备：采用腹腔注射脂多糖（ＬＰＳ）　３　ｌｍｇ／１００ｇ体重致大鼠内毒素血症模型。具体操作方法如下：每日测　量大鼠体温（采用肛温）２次，连测２日，２次的平均值是基础体温。　内毒素血症恶性进展的关键启动因子为内毒素诱导的失控　性释放的大量炎性介质如ＴＮＦ—ｄ、儿　一１　Ｂ和ＩＬ一１　２等，因此阻　１．２．２分组与给药：７０只大鼠进行编号，查随机数字表分为空白对照　断或减弱其介质的损伤具有重要实际意义。本实验模拟内毒素　结果发现内毒素血症的血清ＴＮＦ—Ｏｔ、ＩＬ—ｌ　１３、　组、模型对照组、西药组、中药低、中、高剂量组。正常组每日予生理　血症的炎症反应，　一１２的表达水平均显著升高，说明造模成功。本实验证明该药　盐水灌胃，西药组给甲基强的松灌胃，中药低、中、高剂量分别相当于　ＩＩｔ、ＩＬ一１　Ｂ、　５、１０、２０ｇ／ｋｇ体重灌胃，每天各１次。分别于３ｄ、７ｄ和１４ｄ每组各处死　治疗内毒素血症作用机制是显著抑制炎性介质ＴＮＦ—Ｏ大鼠１０只，４周后（２８天）处死所有大鼠。　ＩＬ一１　２的释放。方中君药翼首草属藏药，抑制急性炎症渗．　和水　丹参酮有抗菌消炎、　１．３检测指标：采血后放人无热原肝素抗凝管，低温离心机中４０００ｒ／　肿，具抗炎活性　。丹参中丹酚酸类化合物、改善血液循环、抗凝血和保护细胞等作用ｌ４　。通过本　ｍｉｎ提取血浆，放人无热原管，按照试剂盒说明书操作步骤，ＥＬ１ＳＡ检　抗氧化应激、测血清中ＴＮＦ—ｏ【、ＩＬ一１　Ｂ、ＩＬ一１２的水平。　实验证实清热解毒扶正颗粒具有拈抗内毒素、抗炎、调节免疫等　值得临床推广。　１．４统计学方法：实验所有数据均使用均数±标准差表示，组内比较　重作用，采用ｔ检验，组间比较使用ＡＮＯＶＡ分析，Ｐ＜Ｏ．０５是差异有统计学意　参考文献　义，Ｐ＜Ｏ．Ｏ１是差异有　著性统计学意义。　２　结　果　ｆ１１万启南，陈晓华，等．清热解毒扶正颗粒治疗老年人肺炎５９例疗　效观察．光明中医，２（）０７，２２（７）：５９．　　２万启南，陈晓华，叶勇，等．清热解毒扶正颗粒治疗外感高热症３６２＿　大鼠模型组中血清炎性细胞因子的表达ＴＮＦ—Ｏｔ、ＩＬ一１　Ｂ、ＩＬ一１２　ｆ）（７）：２０．　的水平与正常组比较显著升高　＜０．Ｏ１）。中药低、中、高剂量组及甲　例中医研究，２００７，２（３１刘训红，陈彬，王玉玺．太子参多糖抗应激和免疫增强作用的实　强龙组均显著降低ＩＬ—ｌ　水平（Ｐ＜０．０１），甲强龙组与中药低剂量有　『）。２１（１０）：５３—５４．　显著性差异（Ｐ＞０．０５），甲强龙组与中药中、高剂量组无显著性差异　验研究．江苏中医，２００（４１杜冠华、张均田．丹参现代研究概况和进展（Ｐ＜０．０５）。证明中药中、高剂量组降低ＩＬ—ｌ　Ｂ水平的作用与甲强龙组　ｆ６）：３—８　相当。中药中、高剂量组比较降低血清ＴＮＦ—ｄ、ＩＬ一１　Ｂ、ｌＬ—ｌ２的水　２３（医药导报，２００４，　２０１７年２月２２日收稿　平无显著性差异　＞０．０５），说明中剂量和高剂量疗效相当。对炎性细　通讯作者