生化实验室尿素BUN紫外谷氨酸脱氢酶法作业指导书

生化实验室尿素BUN紫外谷氨酸脱氢酶法作业指导书

1、前言

试验名称：尿素测定，英文名称：BUN，方法：紫外-谷氨酸脱氢酶法。

本文件适用于安阳鼎城糖尿病医院检验科生化实验室，目的是指导工作人员正确的在科华KHB-450全自动生化分析仪上测定血清、血浆、尿液样本中的尿素浓度，以保证测定结果的准确可靠。

尿素是人体内蛋白氮代谢的主要终产物，它构成了血液中绝大部分的非蛋白氮，尿素产生于肝脏，经过肾脏排泄至尿中，因此尿素的含量取决于蛋白的摄入量、蛋白质分解代谢和肾功能。尿素水平增加可发生于饮食改变、肾功能损伤的疾病、肝脏疾病、充血性心力衰竭、糖尿病和感染。

另外肠道氨的产生增加也可引起血清尿素氮增高。

2、测定原理

本试验采用由Talke和Schubert首先提出的酶学方法，为缩短和简化分析，计算基于Tiffany等的发现，即尿素浓度与固定时间间隔内的吸光度变化成正比。其原理为：尿素和水在脲酶的催化下分解为氨和二氧化碳，氨、α-氧代戊二酸和NADH在谷氨酸脱氢酶的催化下生成谷氨酸和NAD+，酶反应的速率与样本中尿素（尿素氮）的含量成正比。在340nm波长下测定固定时间间隔内NADH吸光度下降的速率，即可没得样本中尿素（尿素氮）的浓度，

3、试剂

试剂生产商：长海科华生物工程股份有限公司。

剂型：液体双试剂。

包装量：R1：4*45ml R2：2*30ml

注册号：沪食药监械（准）字2010第2400021号。

生产许可证号：沪药管械生产许20030916号。

基本成份：

试剂1：

α-氧代戊二酸 7.5mmol/l

谷氨酸脱氢酶 ＞800u/l

NADH 0.35mmol/l

二磷酸腺苷 1.5mmol/l

Tris缓冲液 115mmol/l

试剂2：

Tris缓冲液 115mmol/l

尿素酶 ＞40000u/l

α-氧代戊二酸 7.5mmol/l

储存条件和有效期：试剂避光储存于2―8℃可稳定12个月。启用后2―10℃可稳定14天，若试剂混浊，或空白在340nm下吸光度值低于1.0A时，则不能使用。

4、标准品：使用试剂盒附带标准品

5、质控品：

生产商：英国Randox公司。

剂型：干粉试剂，用5ml去离子水复溶，完全溶解30分钟后使用。

保存条件：未溶解时2―8℃稳定至有效期，复溶后2―8℃稳定一周。

6、、样品要求：

样品采集前病人准备无特殊要求，用肝素锂抗凝管或促凝管常规方法肘静脉采血，血标本4000转离心3分钟，分离血清或血浆样本，均不应溶血。血浆样本应用肝素钠或EDTA抗凝。不能使用氟化物防腐的血清和肝素铵抗凝的血浆样。

样品可在室温稳定24小时，4－6℃短时间保存7本天。超过保存期限测定结果将偏低，应尽快完成测定。

样品拒收标准遵照《安阳鼎城糖尿病医院标本收集管理制度》要求执行。

7、质控品分析要求：

每批分析需做高、低两个值。失控范围和失控后处理遵照《安阳鼎城糖尿病医院检验科室内质控操作规范》的规定设置。质控品分析操作见上述KHB 标准化操作规程。

8、校准品分析要求

校准操作见上述标准化操作规程。

9、设备

设备生产商：上海科华公司

设备型号：KHB-450

10、上机测定参数：

见全自动生化分析仪标准化操作规程第四节

11、计算方法

尿素浓度（mmol/l）= 样本管吸光度/校准管吸光度*校准液浓度（mmol/l）。

13、技术参数：

可测定范围：0－－35.7mmol/l

试剂空白起始吸光度：＞1.65A (340nm 37℃)。

相对偏差：≦±10%

批内精密度：CV%≦6%

批间精密度：相对极差（%）≦6%

14、参考范围：2.9－8.2mmol/l

15、报告方式：mmol/l

16、注意事项：

a、样本中尿素浓度大于35.7mmol/l时，应无氨生理盐水稀释后再测试，计算结果乘以稀释倍数。

b、高浓度氟化物干扰本反应，可引起测定结果偏高。试剂、器皿受氨气污染后可引起测定结果偏高。

c、试剂中含有防腐剂和稳定剂，可能存在一定的刺激作用或毒性，请勿直接接触皮肤、眼睛。一旦接触，即用大量清水清洗。请勿吞服。

17、替代方法：如因特殊情况本试验不能正常工作，用同样试剂、方法在安阳地区医院测定。