果蝇的遗传分析（双因子杂交试验）
一、实验目的：
通过两对性状个体杂交，观察 F2 的分离现象及其比例，了解两对非等位基因间的自由组合。 同时掌握果蝇的杂交技术， 并学会记录交配结果和掌握统计处理方法。
二、实验材料：
灰体残翅
EEvgvg
黑檀体长翅 eeVgVg
三、实验原理：
果蝇的灰体基因（ E）与黑檀体基因（ e）为一对相对性状，位于Ⅲ R70.7 位置，而长翅（ Vg）与残翅（ vg）为另一对相对性状，位于Ⅱ R67.0 位置。这两对
基因是没有连锁关系的，位于不同染色体上的非等位基因。
根据非等位基因分离的自由组合定律， 在 F1 代产生配子时， 非等位基因的
分离是独立的，它们彼此自由组合，产生四种基因型的配子 （EVg， Evg，eVg，evg），且它们的比例相同。这四种配子自由结合，因此在 F2 代会出现 9 种基因型的后代，若显性完全，就出现 4 种表型，比例为 9 ： 3： 3： 1。
正交：灰体残翅 EEvgvg（♀）×黑檀体长翅（♂）
eeVgVg
P
↓
灰体长翅 EeVgvg
↓ 自交
F1
F2
EVg 1/4
EVg 1/4
Evg 1/4
eVg 1/4
Evg 1/4
1/16
Evg 1/4 eVg 1/4 Evg 1/4
四、实验内容：
1、 选处女蝇：每组做正交 1 瓶，正交选灰体残翅为母本，黑檀体长翅为父本，将母本旧瓶中的果蝇全部麻醉处死，在 8-12h 内收集处女蝇 5 只，将处女蝇和 5 只黑檀体雄蝇转移到新的杂交瓶中，贴好标签，于 25℃培养；
2、 7d 后，释放杂交亲本；
3、 再过 4-5 天， F1 成蝇出现，在处死亲本 7 天后，集中观察记录 F1 表型；
4、 选取 5 对 F1 代果蝇，转入一新培养瓶， 于 25℃培养， 其余 F1 代果蝇处死；
5、 7d 后，处死 F1 亲本；
6、 再过 5d，F2 成蝇出现，开始观察记录，连续统计 7d；
五、备注：
1、保证杂交所用的亲本雌果蝇一定是处女蝇；
2、杂交后倒掉亲本时，一定要倒干净，以免造成回交产生实验误差。同样在 F1 自交后，倒掉 F1 时一定要倒干净，以免造成 F1 和 F2 的混杂产生实验误差。
六、实验结果
F1： 观察结果 统计日期 10.21~10.28 F2： 观察结果 统计日期 10.29~11.10 11.16
灰体残翅（♀）×黑檀体长翅（♂）
灰体残翅数
0
灰体长翅数
18
黑檀体残翅数
0
黑檀体长翅数
0
灰体残翅数
1 8
（♀）× （♂）
灰体长翅数 黑檀体残翅数 黑檀体长翅数
10 12
1 3
1 8
合 计 9
对 F2 代的统计结果做 x2 测验：
22
4
9
灰体残翅数
9 8.25 0.75
灰体长翅数
22 24.75 1.25 0.063
黑檀体残翅数
4 2.75 1.25 0.568
黑檀体长翅数
实际观察数（O）
预期数（ E）
偏差（ O-E）
2
9 8.25 0.75 0.068
(O-E) /E 0.068
自由度＝ n－ 1＝ 3
x2＝∑ (O-E) 2 /E ＝0.767
七、分析讨论
1. 果蝇的杂交实验中，为什么要收集处女蝇？简单描述如何收集处女蝇？
因为雌性果蝇生殖器官有受精囊，可保存交配所用的大量的精子，能使大量的卵细胞受
精。因此，在做果蝇杂交实验的时候，雌果蝇必须是处女蝇，保证实验结果的可靠性。 雌蝇羽化出来
10h 内一般不会交配，选择在这个时间段内收集雌蝇，均属处女蝇。
2. 对杂交实验数据进行统计分析， 并说明其遗传学意义； 或计算遗传图距及基因顺序。 由 df（自由度） =4-1=3，当 p=0.05 时，查 x2 表得 x2=7.82. 实验所求得的 x2 值与查表所得 x2 相比较时， 0.767<7.82 ，统计学上认为在 5%显著水准上差异不显著，观察频数与理论 频数间的差异属于随机误差。遗传学上则可认为该次果蝇杂交实验结果符合孟德尔第二定律：两对基因之间的遗传是自由组合的。
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