高效毛细管电泳安培法测定海虾中呋喃唑酮的残留量

维普资讯 http://www.cqvip.com 第２５卷第６期　应用化学　Ｖｏ１．２５　Ｎｏ．６　２００８年６月　ＣＨＩＮＥＳＥ　ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＡＰＰＬＩＥＤ　ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ　Ｊｕｎｅ　２００８　高效毛细管电泳安培法测定海虾中呋喃唑酮的残留量　黄宝美”　姚程炜　王秀峰“　王志国。　莫金垣。　（。绵阳师范学院化学系绵阳６２１０００；　中国气动中心第四研究所绵阳；　中山大学化学与化学工程学院广州）　摘　要建立了测定虾中呋喃唑酮残留量的高效毛细管电泳．安培法。探讨了缓冲溶液浓度、酸碱度及其操　作电压．进样时间，有机添加剂等条件对检测的影响。在硼砂．氢氧化钠（硼砂浓度为３０　ｍｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ＝９．０）为　电泳介质，甲醇为有机添加剂，在２５　ｋｖ分离高压的实验条件下：方法的线性范围为０．５～１００　ｍｇ／Ｌ，相关系数　ｒ：Ｏ．９９９　２．检出限为０、Ｏ１　ｍｇ／Ｌ。　关键词毛细管电泳．呋喃唑酮．安培检测　中图分类号：０６５７．８　文献标识码：Ａ　文章编号：１０００－０５１８（２００８）０６－０７３０－０４　呋喃唑酮（Ｆｕｒａｚｏｌｉｄｏｎｅ，３．（５．硝基糠醛缩氨基）．唑烷酮，又名痢特灵），是一种硝基呋喃类的抗菌　药，在水产养殖中用于防治水产类的细菌性疾病。资料表明呋喃唑酮具有诱变致癌作用，是美国联邦法　（２１ＣＦＲＳ５３０．４１）禁用的１１个品种的兽药之一。我国已列入《中华人民共和国动物及动物源性食品残　留监控计划》。因此开发食品中呋喃唑酮的快速、准确、灵敏的测定方法很有必要。目前，测定呋喃唑酮　含量的方法有高效液相色谱法¨１－５］、微分脉冲阴极溶出伏安法｜６］、极谱法　］、原子吸收法　］。高效液相　色谱法虽然灵敏度高，重珊陛好，但是测定设备成本较高，并且存在色谱柱易被污染而报废，对样品的前　处理要求严格，分析时间长，进样量大等缺点。高效毛细管电泳法是根据带电质点的有效迁移率差异而　进行分离．对于样品的前处理要求相对不太严格．具有进样量少、环保、经济等优点。尚未见高效毛细管　电泳法测定呋喃唑酮的报道。本文采用毛细管电泳安培法测定了食品中呋喃唑酮的残留量，结果令人　满意　１实验部分　Ｉ．Ｉ仪器和试药　自组装毛细管电泳．安培检测系统（ＣＥ．ＡＤ），ＣＺＥ３０ＰＮ１０／ＭＣＮ２２高压电源（美国Ｓｐｅｌｌｍａｎ　Ｈｉｇｈ　Ｖｏｌｔａｇｅ　Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ），ＣＥＳ９８．ＡＤ　ＩＢ型安培检测器（中山大学电分析室研制）。三电极体系为　ＰＩ片辅助电极、碳纤维电极和饱和甘汞电极，毛细管电泳数据站（中山大学电分析室研制），ｐＨＳ．３Ｃ精　密酸度计（上海电光器件厂），石英毛细管柱（４５　ｃｍ×７５　ｉｘｍ）。　呋喃唑酮对照品（杭州民生制药有限公司），磷酸二氢钾，磷酸氢二钠，三（羟甲基）氨基甲烷　（Ｔｒｉｓ），硼酸（Ｈ，ＢＯ，），乙酸钠，冰醋酸，硼砂，乙醇，乙酸铵，氢氧化钠，甲醇，以上试剂均为分析纯；所用　水为二次蒸馏水。　１．２对照品溶液的制备　取呋喃唑酮ｌ０片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于呋喃唑酮２Ｏ　ｍｇ）药末，置２５０　ｍＬ棕色　量瓶中，加二甲基甲酰胺７５　ｍＬ，振摇３０　ｍｉｎ，使呋喃唑酮完全溶解，用水稀释至刻度，摇匀。　１．３试样制备　取农贸市场销售的外地养殖虾、野生虾中可食部分，切成不大于５　ｍｍ×５　ｍｍ×５　ｍｍ的小块后混　匀，经高速组织捣碎机捣碎即可，充分混匀．称取捣碎样品约１０．０　ｇ（精确至０．０００　１　ｇ），加２５　ｍＬ二氯　２００７－０７－０９收稿．２００７－０９－０６修回　通讯联系人：黄宝美，硕士，女，讲师；Ｅ—ｍａｉｌ：ｈｂｉｎ７９０１１７＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｉｎ．ｅｎ；研究方向：毛细管电泳　维普资讯 http://www.cqvip.com

第６期　黄宝美等：高效毛细管电泳安培法测定海虾中呋喃唑酮的残留量　７３１　甲烷搅拌，分散后浸泡１５　ｍｉｎ，在振荡器上振荡５　ｍｉｎ，提取液经无水硫酸钠柱滤人蒸发烧瓶中，残渣分　别用２５和１５　ｍＬ二氯甲烷按上述方法各重复提取１次，再用１５　ｍＬ二氯甲烷冲洗无水硫酸钠柱，并采　用洗耳球吹出柱中液体，滤液均滤人同～蒸发烧瓶中，滤液于旋转蒸发仪上在４５℃左右水浴下减压蒸　发去除溶剂，蒸发速度控制在１滴／ｓ。　１．４缓冲溶液的配制　分别配制１００　ｍｍｏｌｆＬ的乙酸钠，乙酸，硼砂，硼酸，磷酸二氢钾，磷酸氢二钠，Ｔｒｉｓ的储备液，各取适　量配成不同浓度比的体系。　１．５实验方法　毛细管依次用０．１　ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ溶液、二次蒸馏水和缓冲溶液各冲洗约５　ｍｉｎ，每２次进样之间用　缓冲液冲洗２　ｍｉｎ，以保证其重现性。采用柱端安培检测，三电极体系：碳纤维电极，饱和甘汞电极，Ｐｔ对　电极。采用重力进样方式，进样高度１０　ｅｍ，时间１０　ｓ，分离毛细管长度４５　ｅｍ，内径７５　ｍ，分离电压　２５　ｋＶ。　２结果与讨论　２．１工作电极及其电位的选择　分别用Ｐｔ电极、Ａｕ电极、碳纤维电极作循环伏安，呋喃唑酮只在碳纤维电极上有响应，循环伏安图　如图１所示。从图中可看出，呋喃唑酮在０．２５　Ｖ左右出现１个氧化峰。在毛细管电泳仪上考察了呋喃　唑酮的动态伏安（见图２）。图中发现，从一０．２～＋０．６　Ｖ，峰电流不断增加，＋０．４　Ｖ达到最大，电位再　往负移，峰电流又有所减小，所以本文选择＋０．４　Ｖ为最佳检测电位。　图１　呋喃唑酮的循环伏安图　图２呋喃唑酮的动态伏安图　Ｆｉｇ．１　Ｃｙｃｌｉｃ　ｖｏｈａｍｍｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｆｕｒａｚｏｌｉｄｏｎｅ　Ｆｉｇ．２　Ｈｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃ　ｖｏｈａｍｍｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｆｕｒａｚｏｌｉｄｏｎｅ　ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ：ＮａＯＨ—Ｎａ２Ｂ４Ｏ７，ｐＨ＝９．０；　ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ：３０　ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｎａ２Ｂ４０７，ｐＨ＝９．０，　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｆｕｒａｚｏｌｉｄｏｎｅ：２　ｍｇ／Ｌ　５％ＣＨ３ＯＨ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｆｕｒａｚｏｌｉｄｏｎｅ：２　ｍｇ／Ｌ　２．２缓冲溶液的选择　实验分别考察了酸性和碱性缓冲溶液对分离的影响。发现在酸性缓冲溶液中峰较宽，峰形较差，不　利于定量。在碱性缓冲溶液中，磷酸盐缓冲溶液基线噪音和基线偏移都较大；Ｔｒｉｓ—Ｈ　ＢＯ　中峰形峰电流　又较小，峰拖尾严重，灵敏度较低；而在ＮａＯＨ—Ｎａ　Ｂ　Ｏ，缓冲溶液中峰形较理想，灵敏度较高。因此选择　ＮａＯＨ—Ｎａ，Ｂ４Ｏ，缓冲溶液作为电泳液。缓冲溶液浓度不仅影响分离时间也会影响安培响应，选择合适浓　度的缓冲溶液对毛细管电泳安培检测非常重要。实验发现，随着Ｂ　０７－浓度增大迁移时间延长，这是因　为离子强度大，压缩了双电层，导致Ｚｅｔａ电位降低，电渗流减小，从而迁移速度减小。当浓度高于　３０　ｍｍｏｌ／Ｌ［ｔ￣。焦耳热明显增大，区带展宽严重，基线噪音也增大。综合考虑分离时间和峰形的影响，选　择３０　ｍｍｏｌ／Ｌ的硼酸盐缓冲溶液。　２．３有机溶剂的选择　电泳体系中加入有机溶剂如甲醇、乙腈可使电渗流增大，迁移时间缩短。考察了电泳液中加入体积　维普资讯 http://www.cqvip.com

７３２　应用化学　第２５卷　分数为５％　２０％甲醇对分离检测的影响，发现加入体积分数为５％时的效果较好。　２．４　ｐＨ值对迁移时间的影响　对于石英毛细管，溶液ｐＨ值增高时，表面电离　多，电荷密度增加，管壁ｚｅｔａ电势增大，考察了ｐＨ　．曼　暑　值分别为８．０、８．５、９．０、９．５和１０．０对迁移时间的　堇　影响（图３）。结果发现，随着ｐＨ值的增大，迁移时　鲁　鼍　间略增加．本文选择缓冲溶液的ｐＨ＝９．０。　鱼　２．５进样时间及其高压的影响　采用虹吸进样，在一定进样高度下，进样时间决　定进样量的多少，我们选择进样高度为１０　ｃｍ，考察　了进样时间对分离检测的影响。结果发现，进样时　ＤＨ　间太短，达不到检测器的灵敏度，若进样时间超过　图３　ｐＨ值对迁移时间的影响　Ｆｉｇ．３　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｐＨ　ｏｎ　ｍｉｇｒａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　１０　Ｓ，峰拖尾较严重，进样量增加会引起样品扩散，　导致峰形扩宽。故选择进样时间１０　ｓ。操作电压也是影响分离的重要因素。实验中比较了不同电压　（１０　３０　ｋＶ）对分离结果的影响。发现电压太低（１０　ｋＶ），出峰时间较长，提高电压，出峰时间明显提前，　综合考虑了电压对分离度和柱效的影响，确定２５　ｋＶ为最佳检测电压（见图４）。　Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｖｏｌｔａｇｅ／ｋＶ　Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｖｏｌｔａｇｅ／ｋＶ　图４分离高压对迁移时间和理论塔板数的影响　Ｆｉｇ．４　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｖｏｌｔａｇｅ　ｏｎ　ｍｉｇｒａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ａｎｄ　ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　ｐｌａｔｅ　２．６线性范围和精密度实验　在最佳实验条件下，将呋喃唑酮标准品进样６次，迁移时间的相对标准偏差分别为１．４％和１．６％，　峰面积的相对标准偏差分别为２．１％和２．８％。呋喃唑酮在０．５—１００　ｍｓ／Ｌ范围内峰高（１，）与质量浓度　（ｃ）之间呈现良好的线性关系，回归方程为：Ｙ：１　００２＋８２１．６ｃ，ｒ＝０．９９９　２，检出限为０．０１　ｍｓ／Ｌ。　２．７加样回收实验　分别加入不同量的对照品进行加标回收实验，实验结果如表１所示，结果令人满意。　表１样品的测定结果及回收率　Ｔａｂｌｅ　１　Ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｒｅｓｕｌｔ　ａｎｄ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　２．８样品的测定　按照本文１．３节制备好样品溶液，在最佳的实验条件下进行测定，其毛细管电泳图如图５所示。　维普资讯 http://www.cqvip.com 第６期　黄宝美等：高效毛细管电泳安培法测定海虾中呋喃唑酮的残留量　７３３　Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ／ｍｉｎ　Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ／ｍｉｎ　图５对照品（ａ）和样品中（ｂ）呋喃唑酮的毛细管电泳图　Ｆｉｇ．５　Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｇｒａｍｓ　ｏｆ（ａ）ｓｔａｎｄａｒｄ　ａｎｄ（ｂ）ｓａｍｐｌｅ　参考文献　ＪＩＮＧ　Ｌｉ－Ｘｉｎ（景立新），ＧＥ　Ｘｉａｎｇ－ｗｕ（葛祥武），ＳＵＮ　Ｗｕ－Ｐｉｎｇ（孙武平），ＲＵＡＮ　Ｌｉｎｇ．Ｊｕａｎ（阮铃娟），ＸＩＥ　Ｌｕ．Ｌｉｎ（谢　路林），ＱＩ　Ｊｕａｎ（齐娟），ＣＨＡＮＧ　Ｌｉ－Ｈｕａ（昌利花），Ｊ　Ｄａｌｉａｎ　Ｕｉｖｅ（大连大学学报）［Ｊ］，２００６，２７（２）：９１　Ｗａｎｇ　Ｊ　Ｒ，Ｚｈａｎｇ　Ｌ　Ｙ．Ｊ　Ｌｉｑｕｉｄ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ＆Ｒｅｌａｔｅｄ　Ｔｅｃｈ［Ｊ］，２００６，２９（３）：３７７　Ｍｏｔｔｉｅｒ　Ｐ，Ｋｈｏｎｇ　Ｓ　Ｐ，Ｇｒｅｍａｕｄ　Ｅ，Ｒｉｃｈｏｚ　Ｊ，Ｄｅｌａｔｏｕｒ　Ｔ，Ｇｏｌｄｍａｎｎ　Ｔ，Ｇｕｙ　Ｐ　Ａ，Ｊ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ　Ａ［Ｊ］，２００５，ｌ　０６７（１／２）：８５　Ｌｕ　Ｈ，Ｚｈａｎｇ　Ｄ　Ｚ，Ｈｕ　Ｐ　Ｊ，Ｌｉ　ｚ　Ｓ，Ｌｕ　ｘ　Ｈ，Ｆａｎｇ　Ｘ　Ｃ，Ｘｉａｏ　Ｓ　Ｄ，Ａｌｉｍｅｎｔａｒｙ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＆Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ［Ｊ］，２００１，　ｌ５（１２）：１　９７５　‘　ＴｓｏｕｋＭｉ　Ｈ，Ｅｐｉｖａｔｉａｎｏｓ　Ｐ，Ｋａｎｉｏｕ　Ｉ，Ｚａｃｈａｒｉａｄｉｓ　Ｇ．Ｊ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｓｃｉ＆Ｈｅａｌｔｈ，Ｐａｒｔ　Ａ：Ｅｎｖｉｒｏｎｍ　Ｓｃｉ＆Ｅｎｇ［Ｊ］，　１９９３，ＡＺＳ（３）：６４５　ＷＡＮＧ　Ｇｕｉ－Ｆｅｎ（王桂芬），ＢＩ　Ｓｈｕ－Ｙｕｎ（毕淑云），Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊ　Ａｎａｌ　Ｌａｂ（分析试验室）［Ｊ］，２００４，２３（１）：６７　ＷＡＮＧ　Ｆｕ－Ｍｉｎ（王福民）．Ｊ　Ｉｎｓｔｒｕｍ　Ａｎａｌ（分析测试学报）［Ｊ］，２００３，２２（４）：４８　ＪＩＡＯ　Ｇｅｎｇ－Ｓｈｅｎｇ（焦更生），ＣＡＯ　Ｈｕｉ－Ｌａｎ（曹会兰）．Ｃｈｉｅｅｎｓｅ　ＪＡｎａｌ　ａｂ（分析试验室）［Ｊ］，Ｌ２００６，２５（８）：８８　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｆｕｒａｚｏｌｉｄｏｎｅ　Ｒｅｓｉｄｕｅ　ｉｎ　Ｓｈｒｉｍｐ　ｂｙ　Ｃａｐｉｌｌａｒｙ　Ｅｌｅｃｔｒ０ｐｈ０ｒｅｓｉｓ　ｗｉｔｈ　Ａｍｐｅｒｏｍｅｔｒｉｃ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ＨＵＡＮＧ　Ｂａｏ．Ｍｅｉ。　，ＹＡＯ　Ｃｈｅｎｇ－Ｗｅｉ　，ＷＡＮＧ　Ｘｉｕ—Ｆｅｎｇ　，ＷＡＮＧ　Ｚｈｉ—Ｇｕｏ。，ＭＩ　Ｊｉｎ—Ｙｕａｎ。　（。Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆＭｉａｎ　ｎｇ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｍｉａｎｙａｎｇ　６２１０００；　Ｔｈｅ　４ｔｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆＣＡＲＤＣ，Ｍｉａｎｙａｎｇ；　。Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｕｒａｚｏｌｉｄｏｎｅ　ｒｅｓｉｄｕｅ　ｉｎ　ｓｈｒｉｍｐ　ｂｙ　ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｃａｐｉｌｌａｒｙ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　ｗｉｔｈ　ａｍｐｅｒｏｍｅｔｒｉｃ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｓｅｖｅｒａｌ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ａｆｆｅｃｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉ—　ｎａｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｒｕｎｎｉｎｇ　ｂｕｆｆｅｒ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ａｃｉｄｉｔｙ，ｓａｍｐｌｉｎｇ　ｔｉｍｅ　ａｎｄ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｖｏｌｔａｇｅ　ａｎｄ　ｏｒｇａｎｉｃ　ａｄｄｉｔｉｖｅ．Ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ：Ｎａ２Ｂ４Ｏ７一ＮａＯＨ（Ｎａ２Ｂ４Ｏ７　３０　ｍｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ＝９．０　ａｓ　ｂｕｆｆｅｒ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ，ＣＨ３　ＯＨ　ａｓ　ｏｒｇａｎｉｃ　ａｄｄｉｔｉｖｅ，２５　ｋＶ　ａｓ　ｒｕｎｎｉｎｇ　ｖｏｌｔａｇｅ，ａ　ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　ｅｘｉｓｔｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｐｅａｋ　ｈｅｉｇｈｔ（Ｙ）　ａｎｄ　ｍａｓｓ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｃ）ｉｎ　ａ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．５～１００　ｍｇ／Ｌ，ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｃｏｅｆｉｆｃｉｅｎｔ　ｉｓ　０．９９９　２，ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｌｉｍｉｔ　ｉｓ　０．０１　ｎｌＩｇ／Ｌ．　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　ｃａｐｉｌｌａｒｙ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ｆｕｒａｚｏｌｉｄｏｎｅ，ａｍｐｅｒｏｍｅｔｒｉｃ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ