乳酸杆菌培养

培养基配方如下\"

改良MRS培养基

蛋白陈10g牛肉膏10g酵母提取物5g葡萄糖20个

吐温80 1 g琼脂粉15g乙酸钠5g柠檬酸二铰2g

K2HPO4 2g MgSO4.7H2O0 0.58g MnSO4.4HZO 0.25g碳酸钙20g

蒸馏水1000 mL pH6.2 121 C x l0 min灭菌

MRS培养基

蛋白陈109牛肉膏109酵母提取物5g葡萄糖209

吐温8019琼脂粉159乙酸钠5g柠檬酸二按2g

KZHPO429MgSO4#7HzO0.589MnSO4#4HZO0.259

蒸馏水1000mLpH6.212loCxlsmin灭菌

明胶基础培养基

蛋白陈lg酵母提取物lg葡萄糖0.19明胶129

盐溶液4mL蒸馏水100mLpH值7.0

115oCxlsmin灭菌

蛋白陈水培养基

蛋白陈109NaC巧g蒸馏水IO00mL

pH值7.012loCX15mill灭菌

冻干保护剂

脱脂乳粉1209蒸馏水gsomL115oCxlsmin灭菌

2.3.1.1酸菜中乳杆菌的分离与纯化

取酸菜汁lmL,用无菌PBs缓冲液梯度稀释到10-,,分别从10一!10石!10一,三个稀释度

的试管中各取0.2mL涂布于改良MRS琼脂培养基上,于37e!80%氮气!10%氢气和10%

二氧化碳的厌氧环境下培养2小48小时后,挑取含钙培养基上具有明显钙溶圈的菌落,进行

革兰氏染色!镜检\"凡是革兰氏阳性的菌株,继续在MRS培养基上纯化培养,直至镜检为

纯菌\"

2.3.1.3过氧化氢酶试验

挑取固体培养基上培养24小时后的单个菌落,置于洁净玻片上,滴加3%过氧化氢溶

液数滴(新鲜配制),在305内有大量气泡产生者为阳性(+),不产生气泡者为阴性(一)\"

其中过氧化氢酶试验阴性的杆菌初步确定为乳杆菌(敖敦格日勒等,2002)\"将这些菌株编号

后接种到MRS斜面培养基上,培养24小时后置4e冰箱中保存备用\"

2.3.1.4菌种保存

将己经分纯的乳杆菌接入10mL液体MRS培养基中37e培养20小时后,离心(6000甲m

离心10min)收集菌体,然后加入3mL冻干保护剂,对菌体进行悬浮,混匀后取分装至安瓶

瓶中(600林F瓶),然后放入一20e的冰箱中预冻12小时\"预冻结束后,立即放入冻干机中进

行冷冻干燥,搁板温度均为一40干燥压力均为10Pa,干燥温度均为20

2.3.2.5部分分离株的糖发酵试验

将分离自酸菜样品的分离株Ll一L10和分离自猪肠道样品的分离株L10一L20在MRS固

体培养基上划线,37e恒温培养24h后,挑取单个菌落接入发酵管内,放入灭菌试管中,37e

培养一周后观察试验结果,并记录,阳性用(十)表示,阴性用(一)表示\"通过菌种对单

糖!二糖!多糖以及糖普和糖醇类等碳水化合物的利用情况加以鉴定它们的种\"其反应结果

仅局限于保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌生产的普通酸奶, ,嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌发酵乳糖产生乳酸、醋酸、细菌素等健康促进成分,但是它们对酸及胆汁盐非常敏感，难以通过胃肠环境而在肠道中定植。

嗜酸乳杆菌具有较强的耐酸及耐胆汁盐能力，能顺利通过胃肠环境而定植于大肠内，充分发挥其健康促进效果。

2.1.3.2 培养基

[41-43]

MRS 培养基（固体平板和液体）：葡萄糖 20g，蛋白胨 10g，牛肉膏 10g，酵

母提取物 5g，吐温-80 1ml，柠檬酸氢二铵 2g， 乙酸钠 5g，MnSO4·4H2O 0.25g，MgSO4·7H2O 0.58g，K2HPO42g，琼脂 20g（固），蒸馏水 1000ml，调 pH 6.2-6.4。

分装后于 121℃灭菌 15min。改良 MRS 培养基：向 MRS 培养基中加入 2%CaCO

3。

SL 培养基（用于分离杆菌）：酪阮水解物 10g，酵母提取物 5g，柠檬酸氢二铵 2g，CH3COONa·3H2O 25g，MgSO4·7H2O 0.58g，MnSO4·4H2O 0.15g，琼脂15g，葡萄糖 20g，吐温-80 1ml，KH2PO46g，FeSO4·7H2O 0.03g。溶解琼脂在 500ml 的沸水中，溶解其他的组分在 500ml 水中，用冰醋酸调 pH5.4，并混合已融化的琼脂，进一步煮沸 5min，倾倒平板或将热的培养基适量装入带螺旋上盖的瓶或试管内，这样无需进一步灭菌，避免重复融化和冷却。糖发酵培养基：蛋白胨 5g，牛肉膏 5g，吐温-80 0.5g，糖/醇 10g，蒸馏水 1000ml，调 pH 6.8-7.2，加入指示剂 1.6%溴甲酚紫溶液 1.4ml，分装试管，并将杜氏小管倒置于试管内，塞上塞子后于 115℃灭菌 20min。明胶液化培养基：蛋白胨 5g，明胶 100-150g，水 1000ml，pH 7.2-7.4，115℃灭菌 20min。产 H2S 培养基：蛋白胨 10g，NaCl 5g，牛肉膏 10g，半胱氨酸 0.5g，蒸馏水1000ml，pH 7.0-7.4，115℃灭菌 20min。

蛋白胨水培养基：取 15g 胰蛋白胨水培养基加入 1000ml 蒸馏水，分装试管，

115℃灭菌 20min。牛肉膏蛋白胨培养基（斜面）：蛋白胨 10g，牛肉膏 5g，NaCl 5g，琼脂条 15-20g，蒸馏水 1000ml，调 pH 7.2-7.4，待琼脂融化后分装试管，115℃灭菌 20min。硝酸盐还原培养基：蛋白胨 10g，NaCl 5g，KNO31-2g，1000ml 蒸馏水，分

装试管，115℃灭菌 20min。

用MRS、S L、LS、番茄酵母4 种经典的乳酸菌选择性培养基, 并分别进行有氧及烛缸厌氧分离培养测定其得率。