epa文件-ep25a稳定性

稳定性在IVD研究中是直接反应试剂随时间的延长是否可以保持一致性的特性。其不与精密性，斜率或其他常见特性相同，产品的稳定性由客户来验证是极其困难的。比如，产品在实验室设计和数据分析结果都很精确，之后投入生产，在生产中要确保其稳定性。

IVD试剂在本篇中表示产品使用完后对患者样本的临床检测，举例来说就是IVD试剂盒的各个组分和与它们相关的测量，对照，样本稀释液和通用试剂。

本文中所使用的标准是：European standard EN 13640:2002-IVD试剂的稳定性检测，参考 EN13640。其余两篇重要的参考来源于（ICH）Q1A（R2）2和ICH QIE3，虽然这些着重于讲药品类的发展和药品中的一些物质，但也有一部分是和IVD试剂相关的。

关键词：

加速稳定性，校准区间，失效期，可用时间，货架期，稳定性监控，稳定性设计，模拟运输。

IVD试剂稳定性评估：确认指标

1. 范围：

这篇文章概括了IVD试剂可使用的时间和放置时间稳定性，它涵盖了其背景信息和产品在什么时候需要设计检测其稳定性，研究时的逻辑关系，推荐使用的数据分析和稳定性声明文件。其他题目包括了产品稳定性运输环境声明，稳定性监控（确认），和加速稳定性的检测。

使用这篇文章的一般属于低阶段IVD试剂生产厂家和调试中介，临床研究所或许可以用它来解释商业产品的稳定性，和建立实验室检测稳定性属性的方法。

这篇文章中没有明确表示使用的任何仪器，应用软件，和患者样本，所有未加工的物质，试剂盒组分或消费品都不是很清晰。所以在这个文件所描述的原理或许只可以在生产中作为借鉴。

2. 标准警戒线：

因为对于样本是怎样感染是无法预知的，所有患者样本和实验室样本都作为感染参照标准警戒线进行操作。标准警戒线作为指导方针是由“通用警戒线和身体分泌物隔离”组合而成的。标准警戒线覆盖了所有感染缘的传播，所以比通用警戒线更广泛，通用警戒线只适用与血液病原体的传播。标准和通用警戒线指导方针可在US center for disease control and prevention 中查到。对于特定防止实验室与实验室仪器、物品感染源传播的警戒线，参考CLSI 文件 M29。

3. 名词解释：

3.1 名词解释说明

CLSI，标准化建立的世界权威机构，尽最大能力建立世界一致化标准。一致化是从认识，明白和解释不同到全球统一化的一个过程。CLSI发现医学转化在全球度量衡学范围内与美国、欧洲和另外一些地方存在着不同之处，这些不同处在CLSI、ISO和欧洲组织的CEN文件中有所体现，所以在词语，地区使用，和不同时间线在一致化建立的过程中都是十分重要的。 3.2 定义：

加速稳定性检测—此稳定性研究是建立在使用夸大的环境（eg：光、温度、湿度）加快IVD试剂中化学和物理成分退化的一个过程；注意：研究结果是和产品设计因素或其他因素做对比来预测其有效期，产品的是在建议储藏环境中进行研究的。

可允许的移动—产品生产量中的最大改变但保持在特定值范围之内。

阿伦尼乌斯公式—一个数学公式描述化学反应速度常数和反应温度、能量催化的大致关系。

斜率—估测系统测量错误。

校准—在特定的环境中运行，第一步，建立定量和测量不确定因素（检测标准和对应有关的不确定量）之间的关系，第二步，使用这些信息去建立从指示物（ISO/IEC Guide99）就可以得到测量结果的关系；注意1：校准不可和测量系统校正相混淆，经常错误的叫“统一校准”，或与确认校准混淆（ISO/IEC guide 99）；注意2：校准是对分析物的建立，其特定环境，试剂系统/仪器回应和相对应浓度/活性之间关系的整个运作。

校准区间—IVD试剂在特定环境下经过一段时间后对其做校准检测时发现其包含物在可允许移动范围内有明显改变。

输入设计规定—设备的物理和性能规定作为一个设备设计的最基本要求。

环境因素—影响IVD试剂性能的环境因素。（e.g. 温度，气流，湿度，光）。

有效期—在特定环境下储藏的IVD试剂在保持其性能的条件下的最长时间段。注意：有效期是从IVD试剂，校准品，控制品，和其他组分在试验室测量稳定性时得出的。

一级动力退化—产品的退化速度可以用线性方程表示，给出产品浓度和反应时间一个指数关系。

使用稳定性—IVD试剂开封后在正规条件产品期限内使用，仍保持其特性的时间段。

IVD医药设备—一个设备，无论是单独或与其他设备同时使用，可以检测从人体样本给出诊断，监控，或其他相容性目的的信息。它包括试剂，校准器，控制品，样本，软件和其他相关类仪器。

对等草案—产品在不同储存时间不同环境下检测时要使用相同运算元，在同实验中使用相同的仪器，为的是减少不同量来源。注意：这个方法可以减少数据量和不确定量，以此来对稳定性做预测。

IVD试剂—在IVD检测中所应用到的化学，生物及免疫相关固态和液态成分的医学用品。（从EN375.2001, §3.9）

重点使用特性—产品稳定性中所选出最重要的指标。

可测量的测量变量—量是需要计算统计的（ISO/IEC Guide 99）；这个包含所有含义的量，但是，通常意义上所说的组成部分称为测量的具体范围，比如：物质浓度这个量是和一个特定的分析物相关的。

可测量的测量变量移动范围—见可允许范围移动。

精密度—1）在规定环境下每一个独立试验结果的最接近程度（ISO 3534-1）；2）在规定环境下每份相同样本试验结果的最接近程度（ISO 3534-1）。

真实稳定性试验—IVD试剂在推荐条件下环境中储藏和使用，在这些环境中查看其稳固性和稳定性。

重复—产品的多个独立样品进行试验；注意：举例来说，考虑将对照进行稳定性考核，在固定时间段对多个预定量的对照品进行试验，所得到的多个测量结果。

样品—从一个系统中拿出一个或多个部分来看，可以给出相关信息，把它作为对于系统或产品最基本的决定水平。

货架期—IVD试剂在出售给使用者后按照厂家给出的贮存条件储存在未失效期内仍然可以保持其稳定性的时间（摘于EN 375:2001，§3.16）；注意1：稳定性和失效期与概念相关；注意2：厂家有责任给出有效期期限和建立稳定性的条件；注意3：厂家必须考虑在特定温度下的稳定性，这个作为最后一次的时间，这次结果要符合所有要求，如果有错误产生，必须再连续测两次。如果检测失败的原因不是因为产品不稳定造成的，这样做就可以减少错误结论的产生。

稳定性— 考察IVD试剂随时间保持其性能特点一致性的能力；注意1：IVD试剂，校准品，对照可以做放置，运输和在特定环境使用的稳定性考察；重组的冻干品，洗液和从密封的器皿中拿出的物质，从制备，使用和贮藏都要严格按照厂家说明书进行使用；测量仪器也要按要求使用。

稳定性监控—货架期（使用期）特定时间段内考察IVD试剂的真实稳定性。

稳定性检测规划—首先写出方案，在以有效的样本大小和测量时间的基础上规划的，设计的稳定性实验要按照支持其数据的声明范围内作为考察；注意：不论是IVD试剂的实验设计或支持稳定性申明都必须存档。

储藏条件—产家建议的储藏条件要标注在产品上货使用说明书上，其中要包含的条件有温度，湿度和亮度保护。

运输条件—从厂家发货到客户收到产品这段期间所要的条件（例如：温度，湿度，光的影响）。

运输稳定性检测—模拟产品从厂家发送到客户手中这段时期，模拟最为极端环境条件检测IVD试剂的稳定性。

精准（测量）--无限重复测量的量和对照值之间接近程度（ISO/IEC Guide99）。

确认—特定物品满足所有特定要求所需要的条款证明（ISO/IEC Guide99）。

3.3 缩写和首字母缩写词

CEN—欧盟制定标准化组织 ICH—国际同一标准协会 ISO—国际标准化组织 IVD—体外诊断试剂 OOS—实验室检验偏差 QC—质量控制

4. 稳定性检验过程概况

IVD试剂稳定性检测可以确定其产品在正确的条件下贮藏和使用的最佳时间。评估包含了货架期和使用期。货架期是指产品在有合理证据下存放到使用期最后一天，这个时间段是货架期。使用期是指当产品第一次被打开后仍然可以使用的这段时间（例如：在IVD试剂中开封的对照品和试剂的校准区间）。

产品的稳定性被内在和外在不同因素所影响，比如实验形式，最终放置产品的器皿，存放条件和组装、使用步骤。其并不像其他性能比如精密性和精准（测量），厂家所给出的稳定性声明不一定可以被客户所确认，除了一些质量控制的结果。

此指导方针认为IVD试剂是可以接受最后一次实验审核和至少一次成品审核，或至少给出一个相似的风险评估，或在二次组装时减少外界物理性质因素对产品的影响比如湿度，光，温度等。才可以把封闭后的试剂装箱，在成品组装时扣紧液态试剂，密封样本稀释液的瓶子。指导方针还认为：

 产品需要有产家给出的正常存放条件（比如：温度区间，湿度，避光）。    

检测产品稳定性声明需要4个步骤：（1）特定的产品需要出示稳定性的可运作定义；（2）给出稳定性设计方案，和相关实验数据；（3）执行此设计方案；（4）把实验数据所分析出的稳定性声明备案。简化的实验方案可以用做稳定性监控或已建立产品稳定性要求的确认。

产品稳定性要求是以真实检测中得到的数据为基础的。在特殊环境条件下检测产品对于预测稳定性或改变产品质量或建立真实稳定性密封产品系统是十分有用的。这些要求必须建立在真实测量结果的基础上。

产品正确使用指南须知（比如：从储存房移出后回温时间，冻干品的组装步骤，光保护，保证试剂瓶正放）； 对于产品性能要有初步了解，在做稳定性考察时要识别非典型或实验室检验偏差的实验结果。

对于极端环境的影响必须了解或能预测运输和产品从产家到用户的过程； 仪器要正确保养，校准，和在非常好的质量控制下完成检测。

当使用者改变使用方法是需要使用者检测后确认产品性能无影响。比如质量控制产品之前放在正常的储藏盒中，之后被使用者放入离心管中或使用不同型号的瓶塞。

4.1 稳定性实验操作定义

理论上，产品稳定性是指它在一段时间中在特定的储藏条件下保持其特征和性能的能力。对于特殊环境下，稳定性要求的建立是：在产品在两个时间点间必须符合所有设计时的要求：特定时间段的开始和结束。因为其失败率并不适用与于所有情况（比如，产品在预期之前失效）和确认所有实验设计要求的重复性所需要的努力。

一个更实际的产品稳定性定义是在确保它主要性能在特定时间下可以满足所有接受标准的基础上制定的。厂家可能需要考虑更远一点来减少错误结果出现的风险，比如在产品认可标准内的最后一天检测其稳定性，当有错误产生时，需要测量连续两个相同值出现。

稳定性定义的3个重要因素：（1）产品的度量学被认为是最重要的性能指标；（2）每一个度量可以改变多少还能保证其性能和（3）在结果分析时需要的可置信区间。产品稳定性区间是指所有度量学可以在其可置信区间内符合它认可标准下指定的。这三点中的任何一点都只针对产品，并不适用于所有IVD试剂。

4.1.1 稳定性度量学

实验操作稳定性定义首先需要厂家挑选出在储藏中改变产品的质量，安全性或功效的度量。比如，这些度量可以从物理，生物，化学和微生物来反映产品本身或产品使用的分析性性能。例如前者包含颜色，pH，颗粒大小，结晶，特征，和纯度。后者包含测量偏移，检测限，在分析物浓度时的方法精密性，修复，和对于干扰物的偏移。挑选合适的度量学可以应用在IVD试剂。

需要多少度量和类型进行稳定性检测是要在特定产品上，产品设计需要，相似产品稳定性历史信息上决定的。使用稳定性在使用期和货架期研究时所有的、一部分或不同度量学，反应短期、长期内产品的不同变化。

稳定性检测的每个时间点是不需要接触所有度量。但是，它们需要在研究的开始和结束进行检测。再多加一个在中间或是任意一个时间进行检测是很有好处的，主要这样做的目的是防止产品在有效期内失效。这个对做长期研究是很重要的。当产品稳定性较好时这些中介点可以在随后的实验中减去。

对于度量，检测中介点也是十分必要的，它可以使用回归分析和与时间对比。测量偏移度量是典型使用回归分析得出的，它还可以用于其它度量性能比如回复期或干扰偏移，微粒大小，含水量和含杂质量。

4.1.2 检测偏移作为稳定性度量

检测偏移是稳定性的一个传统度量。它直接反应了校准品、对照品和样本中产品对其量的检测在特定环境下的变化（例如：时间，温度）。检测偏移可以用回归分析法建立检测含量（y

轴）和时间（x轴）的关系图。稳定性区间有此可得，比如：95%置信区间的界限和预期可允许偏移相交。或者，用实验数据和偏移标准作比较当偏移评估和最初实验结果（对照环境）作对比。单一的界值使用，是因为从早期产品结果中可以预料偏移的方向（见第4部分）。在Appendix A中有一例。

然而多数反应会增加不稳定性，相对可以看见的较小变化对于名义上稳定的产品应该可以被定为具有线性模式。与药品对比从线性和指数函数来看，其货架期评估中只有非常小的差距，在整个研究中可看见的变化只有±10%，如果使用log或其他函数或使用非线性模式，指数函数在整个研究区间显示出绝对的优势。

可测量偏移可以用绝对浓度定量或用相对、百分比浓度和正常物质作对比。使用多次检测点的平均值给出0时值是很有用的。根据定义，试剂检测是在有特定仪器系统下制定的。校准品和对照品，只要使用合适的检测系统进行检测。

对于评定可测量偏移的检测样本必须包含与其相关的校准品和至少3个附加样本。这些附加样本可以是商业质量控制品，人体样本（干净，稀释或浑浊），或其他已知稳定性物质。一个样本在低值区，一个在高值区，还有一个需要在医学决定水平区。当医学决定水平区和高值或低值相同时，只需要使用两个样本。

当检测不是自产分析物（例如：对照品）时有一些IVD试剂或许对于可检测偏差显示不明显，或检测人体样本时有很大偏差。诸如这些，当不同检测变换随时间变化时，异产和天然或人工样本类型应该在试剂稳定性研究中有所包含。这个可以包括至少一份人体样本作为检测样本来解决—理想上，使用的测量物要可以和对照产品有可比性。选择一个与医学决定水平相信的人体样本是很有用的。

降低检测中的变化性可以直接降低稳定性的变化。使用相一致的检测方案可以减少检测中的变化，但是这样的要求并不适用与所有产品。如果使用不相同的检测方案，可以考虑这些，在可能的情况下，使校准品，对照品和相似产品在预测稳定的条件下进行实验以防止无法预料的变化或在实验中遇到的人为失误。例如，液态的对照品的正常储藏条件是2℃-8℃，如果有确认的稳定性证明这个对照品也可以在-70℃储藏。在这种情况下，产品需要在每一种储藏条件下每一个时间点进行检测。取两个平均值的差，而不仅仅是冷冻的平均值，来作为y抽的减退值以便计算测量偏差。

4.1.3 认可标准

产品稳定性可用已知变化和时间函数来表示。为了测定产品稳定性时间，对每一个度量在实验之前建立最大允许变化是很有必要的。这些认可标准是从产品设计需要而得来的，特别对它的预期使用，或其他质量说明，相似产品的历史数据，或在市产品的性能（产品变化的稳定性）。

大多数稳定性研究使用大量检测样本目的是分析检测范围来评定性能。在这种情况下，对于每个独立样本稳定性时间范围可首先测定，然后最短的稳定性时间范围定为整批产品的稳定性时间范围。对于产品标签，校准品和对照品可以有独立的货架期或使用最短稳定性时间范围作为总的货架期。

4.1.4 统计学置信区间和幂

从检测稳定性度量结果上做正确的判断，使用假设实验草案上所给的置信区间和幂。合适的重复是十分必要的，这样在做每个实验时所得到的值来检测其中重要的变化，当没有变化发生时用置信区间来表明。

统计学家的帮助是很有作用的，他可以确保稳定性考察的定性度量在实验草案上能够提供必要的统计学数据。在AppendixC有方法提到对于测量偏差应准备的实验要求。外加的指导方针在CLSI中有所体现（例如，EP0516，EP0617，EP0718和EP1719）。

这个文件使用的是一面95%置信区间作为IVD试剂测量偏移稳定性的评估。如果可以的话，使用97.5%或99%置信区间将会给出一个更保守的稳定性评价。

4.2 稳定性研究类型

4.2.1 货架期稳定性研究

此类研究是来预测IVD试剂在最后一次给客户装箱时它的有效期。货架期包含了产品从生产到储存到最后一天使用期限的整个过程--不论其是否使用过。

4.2.2 使用稳定性研究

此项研究是指在IVD试剂开封后，仍可以保持其特性的总时间。一个单独的产品或许可以有多个使用稳定性说明，每一个都可以从不同角度来反映在使用时的情况。例如，某一个IVD试剂在没有开封储藏的条件下是有一个使用稳定性说明，但其还有另一个当开封后使用的稳定性说明。另一种类型的使用期是指IVD试剂的校准区间。

4.2.3 模拟运输研究

EN 13640希望厂家对于产品在运输中环境因素对其的影响在它自己的稳定性说明中给予评价。这个可以通过使用压力检测来模拟产品可能会遇到的最坏的运输条件，这个应该在生产后和出厂前进行。

在产品正常储存和开始考察货架期、使用期之前，压力实验可以通过温度，湿度，感光度和其他环境因素对产品的影响作为考察。模拟运输的结果需要和在正常条件下储藏结果进行对比，目的是确认压力实验是对稳定性有影响。在某些情况下，产品只需考察运输时间的稳定性而不需要做实时稳定性考察。这个必须依照风险评估报告，和历史数据或相似产品信息来决定。

厂家或许会用一系列多个压力实验来确定全球运输条件的范围，这种系列实验是依据产品真实运输研究数据的基础上发展的或从参考文件比如ASTM:D4169-05得到的。检测一系列压力实验可以让厂家确定最实用的运输条件，来确保产品稳定性。

在这篇文章中所使用的方案是产品在存放之前对考察其稳定性所做的压力实验。这个可以反映产品在生产后短期内运输的一个模式。或是，在运输之前生产之后做产品延长放置期的实验。另外压力实验对模拟运输模式是很有帮助的。这样产品可以在建议的储藏条件下按期限保存，然后做压力实验，最后把它按之前储藏环境存放，拿已做过压力实验产品结果和这些从储存室拿出的作对比。

4.3 稳定性研究设计选择

稳定性结果的不确定性和得到此结果的测量值的不确定性有着直接的关系。有一些不确定性可以从方案设计中降低或在稳定性研究过程中如果不符合储藏条件直接退回。有两个最基本的方案设计：经典和等时。每一个方案都有自己的优点，也有一些相关联的决定条件和风险性，以下说明。

4.3.1 经典设计

经典设计需要把产品首先放置储存。在整个研究过程中的特定点进行检测。这个设计的好处是在某个特定点可以及时的给出实验结果。而且不需要在使用之前做任何准备。

这个设计的缺点就是合并了长时间检测的变异性把其结果和从样本稳定性，实验器具，或中间的变更得到的变异作为稳定性评估，在研究中实验室的环境，不同批次的试剂或重复性校准，使用不同运算符，等都可能会有变异。另外一个顾虑就是，使用不同仪器操作时很难去对比这两个结果，比如在研究中某个仪器换掉。在IVD试剂稳定性研究中会经常碰到这种情况的。

4.3.2 等时设计

另外一种就是等时设计，可以在任何一个时间进行实验。在交错时间末的等时设计和经典设计相同，都是在研究开始前先把产品放置储藏，然后在特定点进行实验。等时设计不同的是当产品被拿出后，必须把它放到-70℃储藏直到研究结束，和经典设计正好相反。所有产品都将在研究结束的当天进行。

等时设计最重要的好处是所有样本可以在单个实验台完成，不论顺序，使用一样的检测材料，仪器系统，运算符和条件。这样就可以大大降低稳定性的不确定性和对于在实验过程中仪器损坏的担忧。

但是等时设计有先决条件和一个缺点。先决条件是产品必须可以忍受低温，或在其有效期内有效。缺点是结果不能在研究结束时得出，防止产品不稳定性的早期检测。这样的话风险将会很大，特别是对于新上市的产品，但是对于延伸产品或已知稳定性产品的稳定性监控是可以接受的。等时设计还可以用于短时间段的研究比如校准区间，对照品的使用期，或加速检测（第7部分），但也需要有可忍受低温的先决条件。

4.4 产品稳定性检测方法

在实验开始之前，实验设计和接受标准对于一个新的，之前的或重新改良的IVD试剂的稳

定性要求的制定是在稳定性检测方法中是必须建档的。这个可以包含所有产品（比如，试剂，校准品，对照品）或对每一个产品/每一类研究的单独方案（比如，货架期，试用期，运输）。

每个方法中必须包括以下内容： ● 产品名称或其他认可证明；

● ● ● ● ● ● ● ● ●

研究目的（比如，货架期，试用期或模拟运输）； 研究方案（比如，经典或等时设计；实时或加速）； 需要检测稳定性的接受要求； 同产品批次的检测； 产品储存地点和环境条件；

样本检测（比如，样本数量，来源）； 使用的测量系统；

实验时间表；

实验容量（比如，测量点的数量，在时间点的重复数量，每次重复时使用同样样品的数量）；

根据样本选择方法指定从成批产品中挑选检测的产品； 检测稳定性度量的实验方案（包括数据分析）； 证明有可能产生的现象或OOS的指导方针。

● ● ●

在EN13640，和一致性文件中，对药品稳定性的评估，货架期稳定性建立最低产品批量用于检测是三批，使用稳定性需一批，模拟运输稳定性需一批。之后产品货架期稳定性仍然需要3批用于检测，一批使用期稳定性。产品组分的改良稳定性必须包含至少一个批次的产品。在最低限度上增加检测批次对于降低风险是可有用的，综合所有情况，这些批次必须可以反映产品最终设计和密封系统，对这些没有太大变化的产品批次可以用于生产。

普遍来讲，货架期检测必须在产品生产出后直接用于检测。使用期检测最好在产品货架期的开始和结束进行。这样产品在研究开始时可以确认其使用期，并在货架期检测中一直不变。使用期检测只在研究开始时进行是不够的往往需要在风险评估中证明。仅仅在货架期结束时检测使用期对于新产品生产会有风险，但可以用于以建立产品的稳定性监控。

可以的话，在货架期稳定性两批生产中最好使用相对新鲜未加工的材料，和一个接近其有效期的产品。这个可以把未加工材料的稳定性和总产品稳定性相合并。所挑选出被检测的产品样本可以很好的表现成批产品的性能，例如，从整批中挑选每隔N个的产品而不是从生产开始到结束通通选择。这些样本必须使用不规则的顺序检测稳定性，原因是在分析结果时可以减少与产品顺序相关的偏差。

实时稳定性研究的时间必须比要求时间要长。这样做的目的是可以全面的包括稳定性时间的检测数据。例如，产品要求货架期稳定性时间是365天，那就必须检测367天。相似的，产品的使用期是8个小时，那么必须至少检测9个小时。检测时间延长的做法对于不确定性的范围的建立是和有用的，当然此范围要在产品风险评估的基础上建立。产品的时间区间也可根据国家自己的需要来延长。

所选择重复实验次数，数据的重复和检测时间都必须具有可以从结果的变异性看出其趋势的能力。在没有其他考虑因素下，最少要使用三点（开始，中间，结束），在整个研究时间内

要平均分布开。也可以加入另外一些检测点，目的是确认有可能发生的早期偏移，增加研究的力度，与项目进度保持一致，等。在研究前几天的时候在检测点做检测，然后求平均值或增加第一个检测点的检测数量对于建立开始时间（0时）是很好处的。

4.5 定性方法的延伸

之前所讲的稳定性研究的定义也可应用在定性IVD试剂上。与定量IVD试剂的唯一区别就是所使用的稳定性度量。比如定性产品在检测区间内称为阳性和阴性，OD值，颗粒试剂的浑浊，细菌含量和pH变化。

4.6 稳定性研究档案

最初稳定性要求是在所有研究结束后现有数据基础上产生的。这些要求可在外加实验数据上增加。

稳定性研究的结果必须最终写成报告的形式。报告中必须有稳定性检测设计，从设计方案所分裂出的偏差值；要包括实验结果，总结和产品稳定性结论。不同的稳定性研究可有不同报告（比如，货架期，使用期，和模拟运输）或把这些归纳为一篇阐述产品稳定性性能的报告。

5 实时稳定性研究草案

这个部分描写的是以在测量偏差作为稳定性度量的基础上所建立货架期或使用期稳定性的一个普通草案。这篇是针对实时稳定性研究的；见第7部分是加速稳定性研究。假设产品在研究中不能冷冻；所有，在每个时间点进行实验的经典稳定性研究设计被应用。

这篇草案只可以作为指导方针。稳定性设计的类型，测量样本的数量，样本的重复，检测时间表，等。可以在特定产品需要的情况下作改动。

5.1 设计实验

（1） 设计稳定性检测必须包含相关信息，材料，仪器和来源

（2） 准备充足的产品，校准品和外来样本来确保适应所有检测需要。允许多20%的量，当检测失败或需要多次实验时使用。

（3） 分清所使用的仪器系统。理论上整个实验中最好使用相同的仪器以减少测量的不稳定性。确保每个仪器有合格的质量控制和在有效期内维护、校准。

（4） 查看试剂进度和样品使用说明书来确保他们有足够的量和对于运算符清楚明了。 （5） 给出相应实验精确性和精密性运算符的指导方针以便帮助确认和处理极端数据。检

测草案应给出是否允许有替代实验说明，当有另外检测点用于实验时，需要说明使用哪种文件。当监控结果与接受标准作对比来检测不合格的产品时需要考虑给出方

向，还需要给出在研究中哪种条件会构成早期结果的形成。

（6） 如果实时稳定性一直在接受考察，那么不合格产品将不应该被接受直到有两个连续

的检测点数据超出接受标准。在不合格产品发现后，稳定性考核或许要在最后一次符合接受标准后建立。这样做可以避免事实是实验中产生错误而不是因为产品性能不稳定而出现的错误结论。

5.2 实验

（1） 把产品放入储藏作为0时（比如，建议的储藏条件，压力条件，加速条件，等）。 （2） 这一步仅用于模拟运输研究：把产品进行一系列的压力过程。再把产品放入建议条件下的储藏条件。

（3） 任意从储藏的产品中挑选，根据已拟定的稳定性时间表进行检测。每一次实验检测

样品室都使用不同顺序。在实验前先目测，然后记下与稳定性相关的改变（比如，变色，结晶物产生，非典型性再水化时间）。

注意1：普遍来讲，数据是从分析物所使用的仪器得出，之后对于样本超过或就在分析范围的计算是十分重要的，这样的计算是不用在定量报告中出现的。另一种方法可以检测样本稀释比例，这个比例要在分析范围之间—假设已经被确定稀释液。

注意2：货架期研究使用的试剂分析数据必须包含周期性的校准，建立在已知或假设的校准区间。这个可以从仪器或从仪器回应数据分析得出。

注意3：在相关恢复期的研究（比如：产品在建议条件下储藏与产品在假设稳定的条件储藏对比，在4.1.2部分由描述）必须包括所有的样品和储存条件，这些要在相同实验上或在同一时间内进行。

（4） 检查每个样品所重复的实验检测，找出有可能出现的问题，参考稳定性检测指导方针（见CLSI文件EP09）。

（5） 如果样本或当天所有的实验结果都因为这个问题，QC步骤，或运行困难而不被接

受，需要在已证明和已解决问题后重新检测。

（6） 每一个稳定性检测都需要检测不同的稳定性度量。

5.3 数据分析

（1） 用测量偏移对成批产品稳定进行评估。

（a） 使用平均值直线图建立x（时间）y（分析值）

注意1： 如果一个对照温度产品用于校准或对照研究（见4.1.2部分），那么绝对平

均值的区别，百分比的区别，或所显示产品在正确条件下储藏的分析物的区别将用y值。

注意2： 多数产品计划在货架期的最小变异≤10%。比如，用一个直线模型可以充

分解释。如果图形不是直线，考虑使用对数或一个不是直线的模型，在4.1.2部分由讨论。

（b） 如果它的回归斜率不是p≥0.05，那么这个样品稳定性区间就取最大时间点来

进行检测。多数电脑都可以计算出p值。另外，斜率的p值可以很容易的计算出，之后可以和t值表进行对比。

（c） 如果回归斜率p＜0.05，那么使用测量偏移所得到的稳定性区间就必须是单面

95%回归曲线的置信区间的交点。这个可以从直线性回归图看出。如果需要，置信区间的Y值可先假设为Yi，对应时间是Xi，选取后估计出所需时间，再画图。

下个的方程式是计算95%置信区间负测量偏移斜率的的最低值：如果测量偏移

斜率是正的话，加上计算后置信区间来估测结果，而不是减去。

其中

b0和b1是直线回归Y交点和斜率值，ta=0.05,n-2是t统计数据值，其中由度，n是在回归曲线中使用成对数据的个数，

是所有Xi值的平均值。

和n-2个自

(3)

与其使用绘图式计算，它还可以用从4次方程得到的稳定性区间（Xint）来表示

其中

YClint是预期的分析值作为其置信界限交点。

注意，所估算稳定性应该在研究时间范围内。如果是计算预测时间超出研究时间，应把估算的时间作为最后检测时间点。

（d） 对于成批产品测量偏差的稳定性时间应作为所有检测样品稳定性时间的最短时间。

（2） 如果有的话，评估产品其他的稳定性度量。

（a） 在整个研究过程中对于所有稳定性度量评价其结果，与他们相对应的接受标准

作对比。

（b） 用这些稳定性度量所检测的稳定性时间来作为最长的时间，所有稳定性度量都

必须符合相对应的接受标准。 （3） IVD试剂稳定性时间是所有单独稳定性度量估算在整个产品稳定性检测方案的最小

时间。 （4） 对于模拟运输研究，每一个压力条件都应有其自己的稳定性时间。

（a） 如果稳定性时间和产品在正常条件下储藏的时间相同，那么特定系列模拟运输

条件对产品稳定性的影响是不被考虑的。

（b） 如果稳定性检测比产品在正确储藏条件下的时间少，那么特定系列的模拟运输

条件将会对产品稳定性有很不好的影响。要么就要减少产品稳定性要求，要么就要选择不会造成这种情况发生的运输条件。

（5） 对于研究结果要汇总成报告。这个报告需要包括或有涉及的稳定性检验方案，明确

检测所有产品，和有产品稳定性的总结。

6. 真实稳定性监控（确认）

稳定性监控是可以给出任意产品和其预测要求保持一致的确认。一些特殊环境或使用环境包括

 对产品的牌照/许可证有质控体系  对于产品有纠正和保护措施的的方案

 对产品形态上或生产上的变化有相对应的确认要求 

生产商常规产品质量保证检验

普遍讲，稳定性监控遵守检测产品要求相同的步骤，但是检测点的个数相对来讲要少很多。如果测量偏移作为稳定性度量，研究中仅仅需要2个检测点：开始和结束。然而，使用至少3个检测点将可以在回归线中估计误差。

稳定性监控室在真实实验的基础上，横跨整个时间。针对特定产品，如果在风险评定中确定，或许使用比要求较少的稳定性度量。

7. 加速稳定性检测

7.1 加速稳定性实验的应用

加速稳定性检测，偏向使用极端环境、但比正常储存时间短就可以引起产品性能的减退的条件。一般是提高温度，湿度，压强和光度也可以作为参考因素。这样的研究适用于：  对于不同产品模式或密封系统的对比   

在风险分析中建立稳定性无效实验的依据 对于产品模式或生产改变后影响的评定；

给出产品最初时预测稳定性所使用的阿伦尼乌斯定律或其他适用的数据分析

7.1.1 监控或对比计划

加速稳定性实验的使用可以快速的对多个产品的模式或装置的选择。最典型的研究方式就是把不同的产品在极端环境下短时间内放置（一个月或少于一个月），对于产品的外观和性能结果作评估。

重点是，对于加速稳定性检测或许可以引起非典型的改变而对使产品性能下降，比如说，在正常条件不会引起的蛋白变性。还有，不是所有的产品都会产生可预料的下降趋势和直到性能下降时一直所表现正常。

因温度，光度或其它环境而对产品性能降低对加速稳定性的确认是十分有用的。早期发现这样的问题可以使开发者发明和检测合适的实验方案，也可没有真实研究的风险。

7.1.2 合格设计的改变

检验加速稳定性最重要的一点就是可检测在产产品的模式或装置是否合格。所有，对于原始或改良过后的产品放置在一起进行加速试验。在储存的最后，改良的产品和原始产品在外观和性能上作对比。如果改良的产品与原始产品相同，那么原始产品的稳定性要求就被认为是合格的改良产品初步的稳定性要求。

使用此方法来使产品被改变后合格需要有一个稳定性方案，其中在实验开始之前包括合适的稳定性度量和接受标准，这个可以应用在任何新产品上。需要检测至少一批被改良的产品；在产品性能、组分和性能降低风险的基础上可以增加批数。在最后报告中要包含所有的结果和结论。使用加速检测所建立初步的产品要求可以在之后的实验数据中得到证实。

7.1.3 建立初步稳定性要求

对于一个新的IVD试剂稳定性要求是可以在以接受的产品加速稳定性基础上建立的。比如，一个新的产品是在市产品的衍生物，其性能和稳定性已知并且一致。对产品使用的国家要有事先的了解。

加速检测方法使用建立新产品稳定性要求所需要的条件和真实性研究时是一样的。在研究开始之前要有合适的实验方案，其中要有合适的稳定性度量和接受要求，最少要检测3批产品，在最终报告中要有详细的结果和结论。在多数情况下，在加速检测所建立的初步稳定性要求在要随后的真实性研究中得到证实。

7.2 在加速稳定性实验中以温度为因素所要考虑的事

加速试验中包括使用温度的数量，所需重复的数量和对照每一个温度时间点的数量。

（1） 典型的，使用3到5个温度，注意防止可变性的条件和对所选时间校正，

变性或许可以从实验中看出。比如，如果一个产品正常储存是2-8℃，加

速研究把产品15℃、20℃、25℃、30℃和45℃中存放。另外，降低阿伦尼乌斯曲线的推断误差，选取与正常储存温度靠近的温度，当然，所选的温度也要在可接受时间内给出的数据有效。

（2） 复测数量和在每个温度所需要测量时间点选择都应在与真实时间检验相同的标准。

（3） 研究的时间区间在所选温度的基础上应该和显示出产品性能下降保持一

致，一般指2-6周。研究必须首先有方案，然后参考5.1和5.2。

（4） 对于在整个检测条件的正确操作以避免由于温度或其他因素对稳定性研究的影响是十分重要的。

（5） 或许找到温度对产品影响的根源去理解特定产品失效是非常有用的，也需

要去明白在整个这个温度使用时产品是否保持一致。

7.3 对于货架期加速稳定性检测的分析

以下部分所介绍的方法或许可以应用在加速稳定性检测数据分析上。但并不意味着只能用这些。或许在一些特定的产品也有其他分析数据的方法可以使用。这里介绍的例子就是普遍用的模式，比如Kennon所描述的。

7.1.3 阿伦尼乌斯公式

最初时，阿伦尼乌斯公式曾被用在以加速稳定性检测为基础上来预测真实的产品稳定性。公式与产品性能下降的速率和储存温度有关

其中k表示产品性能下降速率，A是阿伦尼乌斯常数，Ea是活化能（kcal mol-1），R是气体常

数（0.00199kcal mol-1K-1），和T是绝对温度（K=℃+273）

使用阿伦尼乌斯公式时，需要有一些假设。这些假设并不能只针对一种产品，阿伦尼乌斯公式也有可能给出一些错误结果。   

但是这些假设或许不能满足IVD试剂检测中包含的复杂分子（比如：免疫测定），所显示出产品不稳定的动力学应该与使用阿伦尼乌斯公式所计算出的结果相似。

注意：在使用阿伦尼乌斯公式时产品所表现的不稳定性应该选用多个较高温度。如果可测量的改变没有造成影响，那么在那个时候的温度所计算出的回归斜率将无意义，也不可在阿伦尼乌斯公式中使用。（参照公式6和11）

7.3.2 货架期评估：一级性能下降动力学

对于监控性能降低的每个变量，不可以在极高和正常存放温度下使用零级动力学或一级动力学。

性能降低反应属于单分子

性能下降反应速率的双对数是直接和温度成比例

加速稳定性检测的货架期评估，这些数据是从多个货架期稳定性研究根据阿伦尼乌斯公式得到的，每一个都是用极高温度，在整个研究过程中检测结果的分析准确性是十分重要的，它可以可靠的区分性能下降速率。在AppendixB中有一个例子的分析。

假设一个产品不稳定性模式遵循一级性能下降动力学，在特定温度下可检测物可以用储存时间的指数函数表示

其中C0是在开始时间t0的检测物，Ci是在ti时的检测物，kj是在Tj时的性能下降反应常数。当把方程两边同时取对数，那么它就变成了直线型

在极高温度下Tj的加速稳定性数据可以很好的从这个方程中得到也可以使用线性回归去分析。对于剩下的量可以给出反应常数kj。这个过程需要在多个极高温度下实现（至少3个）来给出反应常数的数据，这个可以很好的使用阿列牛斯公式表示（公式4）

对于产品在正常贮存温度（Tnorm）的反应速率，可以从公式a和b中得到

最后，稳定性时间区间tstab可以从公式12中得到

如果稳定性允许性能下降在10%，那么公式15就变成

7.3.3 货架期评估：零级性能下降动力学

如果产品的不稳定性遵循简单的零级动力学，那么公式就可以写成

这种情况下，最初从公式12演变的对数就不需要了，从显示可测量物VS时间中可以得到常数kj。在正常存放温度下所预测速率常数knorm就可以用公式13和14得到，稳定性区间tstab表示为

7.3.4 货架期评估使用非直线型回归

除了使用以上的直线回归，非线型回归或许也有合适的参数来计算实验数据。比如说，直接把公式4代入公式5给出测量物非线型模式，然后再使用一级性能下降动力学以温度Tj和时间ti为方程的

这种方法在货架期评估上可以给出更紧凑的置信区间，如果产品显现出一些不遵守阿伦尼乌斯定律但是却对robust模式更有好处使用这种方法也是有很用的。对非线型的回归的介绍并没有放入此文件中。统计学电脑软件是可以买到的，可以分析和给出与参数相关的误差。