动物细胞培养助教总结报告

2 实验方法

2.1 细胞培养

细胞从液氮中取出后，直接放入37～40℃温水中，迅速摇动并不断观察融化情况，避免温度过高使细胞损伤。然后在无菌条件下，吸出细胞冻存液，移至离心管并加入DMEM全培养液。800～1000rpm离心，去除上清液，再重复用培养液洗涤一次。加入足量培养液轻轻吹打成为细胞悬液，移入培养瓶（接种密度为5×105/ml），置于5%CO2、95%空气、37℃、饱和湿度的培养箱内培养，24h后更换培养液继续培养。

根据已有的细胞倍增时间进行细胞消化和传代，待细胞处于对数生长期或接近铺满整个培养瓶底面后，吸弃瓶内培养液，加入0.25％的胰蛋白酶液和0.02％的EDTA液，之后轻轻摇动培养瓶，使消化液浸过细胞表面，置于37℃培养箱，消化1分钟后将培养瓶放置在倒置显微镜下进行观察，发现胞质回缩，细胞间隙增大后，立即终止消化，吸弃消化液，加入全培养液，用弯头吸管按顺序反复吹打贴壁细胞，使细胞脱离瓶壁，形成单细胞悬液。细胞计数后，分别接种在3～5个新的培养瓶内，置于5%CO2、95%空气、37℃、饱和湿度的培养箱内继续培养。

2.2. 质粒提取（未参与）

2.3 细胞转染及结果测定（未参与）

2.4 细胞增殖实验（E-screen实验）

2.4.1 细胞培养及药物处理

MCF-7细胞以含10?S的有酚红DMEM培养基常规培养，至80%融合时用0.25%胰酶消化，以104个细胞每孔接种于96孔板。置于37℃，5%CO2培养箱中培养24 h 后，细胞贴壁良好，铺展生长。此时吸去10%CS-FBS无酚红DMEM培养液，加入1%CS-FBS无酚红DMEM培养液同步化，预培养12h，以增加细胞对雌激素样物质的敏感性。更新实验培养液，并同时加入不同浓度药物。同时每块96孔板都设溶剂对照组（0.1% DMSO）、E2组（0.01μM）、E2（0.01μM） ICI（0.1μM）组、药物各浓度组（10-5M、10-6M、10-7M）、以及药物 ICI（0.1μM）组，培养24h。

2.4.2 细胞增殖率检测

MTT法检测细胞增殖率。按说明书操作，吸去96孔板培养液，每孔避光加入0.5mg/mlMTT溶液（PBS为溶剂）100μl，置于37℃，5%CO2培养箱中培养4 h 后每孔加入150μlDMSO，震荡使紫色结晶溶解，选择570nm 波长，在多功能读板机上测定各孔光吸收值，计算各组细胞相对增殖率（relative proliferative effect, RPE）。

RPE= (ODsample/ODcontrol) ×100%

实验结果

原图较大，看不清楚可以拉伸

皂苷实验结果，血药浓度为10-6时对细胞生长的促进作用最强

次苷实验结果，血药浓度为10-6时对细胞生长的促进作用最强

致谢

半年的实验过程一转眼就结束了，

在这个完整的实验过程中我收获的不仅仅

是知识、实验技能和经验，更有对科研工作的端正态度和实事求是的实验原则。感谢X*给予我的规范示教和指导，感谢分子生物实验室的师兄师姐的耐心指导和关心，今后在学习生活中，我将更加努力，克服困难，争取在未来的道路上做出造福于人的科研成果！